Effect of Total Flavonoids from Phyllanthus emblica L. on Tumor Proliferation and Immune Function

[Objectives]To explore the effect of total flavonoids from Phyllanthus emblica L.on tumor proliferation and immune function.[Methods]The effects of total flavonoids of P.emblica L.on the proliferation of 6 different tumor cell lines(human hepatoma cell line HepG-2,human cervical cancer cell line Hela,human gastric cancer cell line SGC7901,human nasopharyngeal carcinoma cell line CNE-2,human lung cancer cell line H460 and human ovarian cancer cell line A2780)were compared by SRB method.The effect of total flavonoids from P.emblica L.on the proliferation of mouse lymphocytes induced by concanavalin(ConA)or lipopolysaccharide(LPS)in vitro was detected by CCK-8 method.[Results]The results of SRB assay showed that compared with the normal group,the total flavonoids of P.emblica L.had obvious inhibitory effect on 6 kinds of tumor cells.Among them,the inhibitory effect on H460 cells and CNE-2 cells was the most significant,and the IC50 was(471.36±50.66),(463.26±40.75)μg/mL,respectively.The high dose group of total flavonoids from P.emblica L.had the same inhibitory effect as the positive drug 5-Fu.The results of CCK-8 assay showed that compared with the blank group,the total flavonoids of P.emblica L.significantly inhibited the proliferation of mouse lymphocytes induced by ConA or LPS(*P<0.05,**P<0.01).[Conclusions]The total flavonoids of P.emblica L.had significant anti-tumor activity.

体外模拟消化过程中余甘子果实及醇提物的活性成分和抗氧化能力的变化

为探究余甘子冻干粉及其乙醇提取物在体外消化(口腔、胃、小肠和大肠)过程中的差异,本研究对余甘子的主要成分进行了鉴定,然后比较了两者消化前后的总酚和总黄酮含量以及抗氧化能力。结果表明,余甘子富含多酚和黄酮类物质,其中,冻干粉结合型多酚含量更高,而醇提物游离型多酚含量更高。体外模拟消化前,冻干粉的总酚和总黄酮的含量分别为5.40±0.07 mg GAE/mL和1.48±0.15 mg RT/mL,醇提物的总酚和总黄酮含量分别为3.65±0.05 mg GAE/mL和14.80±0.74 mg RT/mL。和消化前相比,在消化过程中,两者的总酚含量均显著降低(P<0.05),但两者的总黄酮含量在口腔消化液中升高。此外,消化前的余甘子醇提物对ABTS^(+)、DPPH自由基的清除能力和Fe^(3+)还原能力都显著低于冻干粉(P<0.05),但消化后余甘子醇提物的抗氧化能力显著增强(P<0.05)。对总酚、总黄酮含量与抗氧化能力的相关性分析表明,总酚含量与抗氧化能力之间存在显著的正相关性(P<0.05)。综上,消化后余甘子果实冻干粉及醇提物的活性成分和抗氧化能力发生明显的变化,且和余甘子冻干粉相比,醇提物的抗氧化能力更强。表明经提取及消化处理加工后的余甘子产品可能会有更高的抗氧化健康效益。

不同产地、不同提取方法对余甘子多酚含量及抗氧化活性的影响

本文选用广东、广西、福建、云南、海南五地的余甘子,采用亚临界水提取法、微波-热水提取法、溶剂浸提法、微波提取法、超声波提取法提取余甘子多酚,对比分析多酚含量及抗氧化活性。结果表明,在不同产地中,云南余甘子提取所得多酚含量最高(345.24 mg GAE/g),广东余甘子提取所得多酚含量最低(198.83 mg GAE/g)。选取云南余甘子,采用不同方法提取多酚,其中亚临界水提取所得余甘子多酚含量最高(387.33 mg GAE/g),微波提取所得余甘子多酚含量最低(223.45 mg GAE/g);抗氧化活性研究表明,不同产地中,云南余甘子提取所得多酚对·OH的清除率高于其它地区(P<0.05),为85.99%,不同产地余甘子提取所得多酚对ABTS^(+)自由基清除率无显著性差异,清除率均在97%以上,但云南余甘子提取所得多酚对DPPH·的清除率较低(70.01%);不同提取方法中,亚临界水提取所得余甘子多酚对DPPH·、ABTS^(+)·和·OH的清除率均高于其它方法,多酚浓度与自由基清除率呈明显量效关系。因此,选用云南余甘子,采用亚临界水提取是提高余甘子多酚产率和抗氧化活性的一种较好的选择。

余甘子各器官总黄酮含量分析

分析比较了余甘子各器官之间、不同余甘子品种之间以及与野生资源之间的总黄酮含量。结果表明,黄酮类化合物普遍存在于余甘子各器官中,以叶片与果实中居多,枝、根中含量较低;皇帝甘枝条的总黄酮含量高于玻璃甘枝条。粉甘、蓝丰、秋白这3个品种的果实总黄酮含量差异显著。3个野生资源单株总黄酮含量差异显著,野生余甘子果实总黄酮含量高于栽培品种。

余甘子果汁活性成分与抗氧化活性研究

测定了不同产地余甘子果汁中多酚、黄酮和多糖含量。结果表明:广东野生余甘果汁的多酚、黄酮含量和水溶性多糖含量最高,分别为(204.15±6.85)mg/g干物质、(81.11±8.67)mg/g干物质和(19.78±1.22)mg/g干物质。通过测定还原力和自由基清除率,研究了余甘子果汁的抗氧化活性,结果表明:各种余甘子果汁都有清除自由基和抗氧化作用,其中广东野生果汁抗氧化活性较高,浓度为10 mg/mL时,其还原力为1.344±0.14,羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除率分别为(91.50±3.53)%、(92.31±1.30)%,其抗氧化性优于同浓度的Vc;由广东栽培的余甘于做的果汁的DPPH自由基清除力最高,浓度为10 mg/mL时,清除率达到(92.09±1.52)%。

余甘子多酚响应面法优化提取及其抗氧化活性研究

以余甘子干粉为原料提取余甘子多酚,比较了乙醇浓度、浸提时间、温度、pH、料液比及提取次数对总多酚提取率的影响,并以乙醇浓度、浸提时间、温度、pH为考察因素,采用RSA响应面分析法,确定了余甘子多酚提取的最佳工艺参数,即乙醇浓度为60%,浸提温度50℃,浸提时间4h,pH3.50。在此优化工艺下余甘子多酚提取率为0.218gGAE/g,还原力为1.019。同时,以茶多酚、维生素C、维生素E及BHT为对照,测定了余甘子多酚对DPPH、超氧阴离子及羟基自由基的清除活性及抗脂质过氧化活性。结果表明,余甘子多酚具有较强的抗氧化活性,是一种极具潜力的抗氧化剂。

不同产地余甘子黄酮类成分指纹图谱研究

目的:建立不同产地余甘子黄酮类成分高效液相色谱指纹图谱。方法:采用高效液相色谱法,Agilent C18色谱柱,以0.5%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,在254 nm波长下对10个不同产地的余甘子药材黄酮类成分进行测定,建立余甘子黄酮类成分的HPLC指纹图谱,对其品质进行评价。结果:建立了余甘子黄酮类成分指纹图谱,10个不同产地余甘子黄酮类成分有18个共有峰,除广西、广东产余甘子外,其他产地18种黄酮类成分指纹图谱相似度均在0.90以上。结论:该方法简便、准确、重复性好,可为余甘子药材有效成分的品质评价及其质控标准的制定提供科学依据。

余甘子活性成分含量与抗氧化性研究(英文)

研究了不同产地余甘子的总多酚、黄酮和多糖含量,同时测定了各产地余甘子提取物的抗氧化活性。结果表明,广东野生品种鲜果的总多酚含量、总黄酮含量和水溶性多糖含量最高,它们在每克干果中的含量分别为(204.15±6.85)mg没食子酸当量、(81.11±8.67)mg芦丁当量和(19.78±1.22)mg葡萄糖当量。广东野生品种提取物的抗氧化活性较高,其还原力为1.344±0.14,羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除力分别为91.50%±3.53%,92.31%±1.30%。广东栽培种提取物的DPPH自由基清除力最高,达到92.09%±1.52%。

正交试验优选叶下珠中黄酮类化合物的提取工艺

以芦丁为对照品,采用分光光度法测定叶下珠中总黄酮含量,在510nm处建立标准曲线,回归方程为A=10.649C-0.00557,其相关系数R=0.9982。采用正交试验设计探讨以乙醇为溶剂,从叶下珠中提取总黄酮的最佳工艺条件,以总黄酮得率为指标,考察乙醇浓度、提取温度、乙醇用量以及提取时间等4个因素对萃取效果的影响,结果表明:在本试验范围内,采用乙醇-水体系提取叶下珠中总黄酮类物质的最佳工艺条件为:70%的乙醇、浸提温度为90℃、料液比为1∶20、提取时间为1h,在此条件下,总黄酮得率为1.394%。

余甘子抗氧化活性成分的研究

[目的]测定余甘子中抗氧化活性成分的含量。[方法]分别采用Folin-Ciocalteu法、AlCl3-NaNO2比色法及2,6-二氯酚靛酚滴定法测定5个品种的余甘子(青油甘、玻璃甘、油甘、丙甘和甜油甘)中总多酚、总黄酮及VC的含量。[结果]青油甘的总多酚含量最高,为1.518g/100g;玻璃甘的总黄酮含量最高,为127.8mg/100g;甜油甘中的VC含量最高,为160.9mg/100g。[结论]余甘子含有丰富的抗氧化活性成分。

余甘子叶提取物总黄酮的含量测定

目的:建立余甘子叶提取物中总黄酮含量的测定方法。方法:以槲皮素为对照品,利用紫外可见分光光度法通过测定吸光度计算余甘子叶提取物中总黄酮的含量。结果:槲皮素在2.375～38μg/mL范围内呈良好的线性关系,回归方程为:A=0.0303C-0.0182,r=0.9999,测得余甘子叶提取物中总黄酮平均含量为51.60%。结论:紫外可见分光光度法简单、快捷、准确、灵敏,可作为测定余甘子叶提取物中总黄酮含量的方法。

HPLC测定余甘子茶中3种多酚成分及抗氧化活性研究

福林酚法测定五个产地的余甘子茶中总多酚(TP)的含量,高效液相色谱法(High performance liquid chromatography,HPLC)分析没食子酸(GA)、柯里拉京(CO)、鞣花酸(EA)的含量,并对其抗氧化活性进行研究。结果表明:TP含量最高的是凉山的余甘子茶,其值为228 mg/g;漳州的余甘子茶中GA、CO、EA含量最高,分别为5.00、28.76、4.30 mg/g;在抗氧化活性研究中,昆明的余甘子茶提取液总还原能力较高,但凉山的余甘子茶提取液对DPPH自由基(DPPH·)和羟自由基(·OH)清除能力较好,EC50分别为7.46μg/mL和0.44 mg/mL,其对自发性肝脂质氧化抑制能力好于其它产地。相比较而言,凉山产地的余甘子茶作为开发天然抗氧化剂更具优势。

不同颜色余甘子果实发育过程中5种生理指标的变化及其相关性

以颜色差异明显的4份余甘子果实为材料,研究果实生长期和成熟期的叶绿素、花色苷、p H值、总糖、总酸的变化规律,探讨这些指标与果实着色之间的关系。结果表明:叶绿素和花色苷呈显著负相关,果实中期,4份种质外果皮颜色从粉红到翠绿,叶绿素含量从低到高,花色苷含量从高到低;总糖与总酸之间存在极显著负相关,余甘子185随着成熟度的增加,总糖含量增加,总酸降低,但余甘子28、37、167表现为随着成熟度的增加总糖、总酸呈下降趋势。因此生产上可以通过铺反光膜、摘除遮荫叶片等方法促使花色苷合成,使叶绿素提前降解,达到改良果皮颜色的目的。

叶下珠中黄酮类物质的研究

以芦丁为对照品,采用分光光度法在510 nm处测定叶下珠中总黄酮含量,通过各种定性颜色反应,初步确定了其中黄酮类化合物的种类,实验还对总黄酮提取的适宜溶剂和提取次数进行了研究。结果表明,用70%乙醇提取2次,总黄酮的提取率为1.84%。

余甘子总黄酮超声波辅助提取工艺的优化

以余甘子干粉为材料,利用超声波辅助提取余甘子总黄酮。单因素试验分析液料比、乙醇浓度、超声时间、超声功率对余甘子总黄酮提取率的影响,在此基础上,利用响应面分析法对提取工艺进行优化。结果表明,余甘子总黄酮最佳提取条件为:液料比82:1(V/W)、乙醇浓度45%、超声时间41 min、超声功率210 W,在此条件下余甘子总黄酮的实际提取率为6.12%。

余甘子提取物抗氧化能力分析和对酪氨酸酶活性的影响

【目的】明确余甘子果实提取物的抗氧化能力和其对酪氨酸酶活性的影响,为进一步开发利用余甘子果实提供理论依据。【方法】本研究采用2种方法(水提法和醇提法)提取余甘子果实中的活性物质,测定其中多酚和黄酮含量、分析其对3种自由基(1-苯基-2-苦肼基自由基(DPPH),2,2联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基和羟自由基的清除率以及对酪氨酸酶活性的影响。【结果】余甘子果实中富含多酚和黄酮类物质,其中水提物中多酚和黄酮含量(22.95和34.61 mg/g DW)均高于醇提物中的含量(15.61和17.61 mg/g DW);水提物和醇提物对3种自由基都有很强的清除作用,其中水提物抗氧化效果优于醇提物,清除DPPH、ABTS+和羟自由基的IC50值分别为4.58μg/mL、9.61μg/mL、1.99 mg/mL。余甘子果实提取物对酪氨酸酶的作用与浓度有关,0.2、0.6 mg/mL提取物对于酪氨酸酶有一定的激活作用;1.8 mg/mL提取物则对酪氨酸酶活性表现出抑制作用。【结论】余甘子果实中富含多酚和黄酮类活性物质,而且具有极强的抗氧化能力,清除自由基能力大小依次是DPPH>ABTS+>羟自由基;提取物可影响酪氨酸酶活性,低浓度提取物引起酶活性升高,高浓度则抑制酶活性,推测相关作用机制比较复杂。

响应面法优化余甘子果实总黄酮提取工艺

目的优化余甘子果实总黄酮提取工艺。方法选用余甘子‘兰丰’果实为试材,利用单因素试验结合响应面分析法,研究乙醇浓度、料液比、水浴时间、水浴温度4个因素对余甘子鲜样和干样总黄酮提取的影响。结果余甘子鲜样总黄酮最佳提取条件为:乙醇浓度70%,料液比1:25 (g:mL),水浴时间45 min,水浴温度40℃,总黄酮理论含量30.70mg/g,实际平均含量为30.49mg/g。余甘子干样最佳提取条件为:乙醇浓度60%,料液比1:20(g:mL),水浴时间60min,水浴温度60℃,总黄酮理论含量30.04mg/g,实际平均含量29.72 mg/g。总黄酮提取含量鲜样大于干样,增加了2.56%。结论响应面分析法对试验结果的优化可靠有效。使用余甘子鲜样提取总黄酮,相比使用干样,在条件适宜地区更为经济。

基于网络药理学探讨余甘子叶总黄酮抗结直肠癌的分子机制及活性成分

目的采用网络药理学方法,研究余甘子叶总黄酮(TFPL)抗结直肠癌的分子机制及活性成分。方法采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)分析鉴定TFPL化学成分,利用ChemMapper数据库和OMIM数据库分别收集TFPL成分相关靶点和结直肠癌相关靶点,比对得到TFPL成分与结直肠癌共有靶点,通过分子对接技术预测TFPL抗结直肠癌的潜在活性成分。结果鉴定得到TFPL的12个化学成分,对应100个靶点,结直肠癌对应靶点192个,通过比对得到TFPL抗结直肠癌的潜在靶点EGFR。分子对接结果显示,化学成分Quercetin、Kaempferol与EGFR能够较好结合。结论TFPL可能通过作用于EGFR发挥抗结直肠癌作用,Quercetin和Kaempferol可能是TFPL抗结直肠癌的潜在活性成分。

多指标正交试验法优选余甘子总酚提取工艺

目的:优选余甘子总酚提取工艺,为其工业化生产提供数据参考。方法:以总酚、诃黎勒酸、没食子酸和粘酸-2-O-没食子酸酯提取量为综合评价指标,采用正交试验设计优选提取溶剂、溶剂用量、提取次数、提取时间等并进行验证,确定最佳提取工艺。结果:余甘子总酚提取工艺为10倍量70%乙醇提取3次,每次90 min。结论:本文优化获得的余甘子总酚提取工艺稳定可靠,简便易行,为余甘子产业化研究提供依据。

余甘子总酚提取纯化工艺的研究

目的研究余甘子总酚的提取纯化工艺。方法在单因素试验基础上,以溶剂用量、提取时间、提取次数为影响因素,没食子酸、葡糖倍苷转移率为评价指标,正交试验优化提取工艺。大孔吸附树脂纯化余甘子粗提物后,考察纯化工艺中各项参数,并对其进行放大验证。结果最佳提取纯化工艺为8倍量70%乙醇回流提取2次,提取时间分别为2、1 h,提取液浓缩干燥后以D101大孔吸附树脂吸附,4倍柱体积纯化水以1.5 BV/h体积流量洗脱,弃去前1.5 BV洗脱液,收集1.5~4 BV洗脱液,浓缩,干燥,有效部位中没食子酸、葡糖倍苷总含有量不低于50%。结论该方法稳定可行,可用于提取纯化余甘子总酚。