余甘子水提物对黑腹果蝇寿命及攀爬能力的保护作用

目的:余甘子(PE)是一种富含多种酚类物质和有机酸等化合物的药食两用植物资源。本研究拟探讨PE水提物对正常生理条件和镉(Cd)胁迫条件下果蝇寿命及攀爬能力的影响。方法:采用1.6、8、16 mg/mL PE水提物分别作用于野生型雌雄红黑腹果蝇,寻找有效提高其寿命及攀爬能力的最佳PE水提物浓度和最佳处理时间,并检测最佳浓度PE水提物处理后对雌雄果蝇体内SOD、CAT活性、MDA含量的影响。用5、10、20、40 mg/L CdCl_(2)单独作用于雌雄果蝇,摸索有效降低果蝇寿命的最适CdCl_(2)浓度,在此基础上采用1.6、8、16 mg/mL PE水提物联合最适浓度CdCl_(2)处理雌雄果蝇,探讨PE水提物对Cd胁迫下雌雄果蝇寿命及攀爬能力的影响。结果:与对照组相比,16 mg/mL PE水提物有助于延长正常生理条件下雌雄果蝇寿命(P<0.05);在最佳浓度(雌性1.6 mg/mL、雄性8 mg/mL)PE水提物处理下,有效提高雌雄果蝇攀爬能力的最佳处理时间呈现出性别差异,雌果蝇的最佳处理时间为22 d,雄果蝇为10 d,但最佳浓度PE水提物分别处理雌雄果蝇10、22、33、45 d均不能提高其体内抗氧化酶活性。与对照组相比,40 mg/L CdCl_(2)作用下雌雄果蝇的平均寿命降低最多(P<0.01),后续以40 mg/L作为最适Cd胁迫浓度。与对照组比较,8和16 mg/mL PE水提物有助于延长40 mg/L CdCl_(2)胁迫下雄果蝇的寿命但处理18 d后其攀爬能力显著降低(P<0.05),1.6、8和16 mg/mL PE水提物处理对雌果蝇的寿命和攀爬能力则均无显著影响(P>0.05)。结论:PE水提物有助于延长正常生理条件下雌雄果蝇的寿命和攀爬能力,延长Cd胁迫下雄果蝇的寿命但降低其攀爬能力,表明PE对果蝇的保护作用存在性别差异。

泡滇橄榄中一株酵母菌的分离鉴定及其耐受性研究

以泡滇橄榄为原料,对分离出的一株产气酵母菌进行鉴定并对其耐受性进行分析。从胀袋泡滇橄榄产品中分离获得一株产气酵母菌株,利用26S rDNA进行分子生物学鉴定,并开展耐受性及消毒剂抑制效果试验。结果表明:泡滇橄榄中产气菌株为葡萄汁有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum);该酵母菌具有耐酸性,在pH 2.5条件下依旧能够生长,而其耐热性能较差,75℃处理5 min便可将其杀死;pH值较低时,两种防腐剂(山梨酸钾、苯甲酸钠)对该酵母菌的抑制效果差异不明显,但pH值较高时,山梨酸钾的抑制效果较佳;4种消毒剂中对酵母菌抑制效果最好的为过氧乙酸,其次为次氯酸钠,而二氧化氯和二溴海因几乎无抑制作用。综上,泡滇橄中产气酵母为葡萄汁有孢汉逊酵母,具有较强耐酸性,过氧乙酸对其抑制效果较好。本研究为泡滇橄榄的工业化生产及滇橄榄系列产品开发提供一定的理论指导。

体外模拟消化过程中余甘子果实及醇提物的活性成分和抗氧化能力的变化

为探究余甘子冻干粉及其乙醇提取物在体外消化(口腔、胃、小肠和大肠)过程中的差异,本研究对余甘子的主要成分进行了鉴定,然后比较了两者消化前后的总酚和总黄酮含量以及抗氧化能力。结果表明,余甘子富含多酚和黄酮类物质,其中,冻干粉结合型多酚含量更高,而醇提物游离型多酚含量更高。体外模拟消化前,冻干粉的总酚和总黄酮的含量分别为5.40±0.07 mg GAE/mL和1.48±0.15 mg RT/mL,醇提物的总酚和总黄酮含量分别为3.65±0.05 mg GAE/mL和14.80±0.74 mg RT/mL。和消化前相比,在消化过程中,两者的总酚含量均显著降低(P<0.05),但两者的总黄酮含量在口腔消化液中升高。此外,消化前的余甘子醇提物对ABTS^(+)、DPPH自由基的清除能力和Fe^(3+)还原能力都显著低于冻干粉(P<0.05),但消化后余甘子醇提物的抗氧化能力显著增强(P<0.05)。对总酚、总黄酮含量与抗氧化能力的相关性分析表明,总酚含量与抗氧化能力之间存在显著的正相关性(P<0.05)。综上,消化后余甘子果实冻干粉及醇提物的活性成分和抗氧化能力发生明显的变化,且和余甘子冻干粉相比,醇提物的抗氧化能力更强。表明经提取及消化处理加工后的余甘子产品可能会有更高的抗氧化健康效益。

余甘子果渣多酚提取工艺优化及其抗氧化活性分析

余甘子果实榨汁后剩余的果渣中含有大量的多酚类物质,为进一步提高余甘子资源的利用率,本研究以多酚提取量为指标,对余甘子果渣多酚的提取工艺进行优化。首先通过单因素试验,考察了乙醇体积分数、提取温度、提取时间及料液比对多酚提取量的影响。在单因素试验的基础上,采用三因素三水平的Box-Behnken响应曲面试验,对余甘子果渣多酚的提取工进行优化,优化得到的最佳余甘子果渣多酚提取工艺条件为:提取温度60℃,乙醇体积分数60%、提取时间80 min,料液比1∶33 g/mL,在此条件下进行三次平行验证试验,结果多酚提取量为126.25 mg/g,与预测值的相对标准偏差仅为0.59%。采用抗氧化能力指数(ORAC)、铁离子还原能力(FRAP)、ABTS自由基清除能力和β-胡萝卜素漂白试验对提取物的抗氧化活性进行了分析评价,提取物的ORAC指数达到VC的50%以上,FRAP达到了VC的40%以上,ABTS自由基的半抑制浓度IC50显著低于(p<0.01)VC和Trolox,对β-胡萝卜素漂白抑制的IC50高于常用的脂类抗氧化剂BHT,但未达到BHT的2倍,而且显著低于Tolox,表明余甘子果渣多酚提取物具有较高的抗氧化活性。本研究结果为余甘子果渣多酚的进一步研究利用提供了试验基础。

28份余甘子品种遗传多样性的ISSR分析及指纹图谱构建

【目的】利用ISSR分子标记技术对28份余甘子种质资源进行遗传多样性分析,并构建其指纹图谱。【方法】从96条ISSR引物中筛选得到9条核心引物,用作广东省农业科学院收集的华南地区28份余甘子品种分子标记,利用UPGMA聚类分析余甘子种质资源遗传多样性,以核心引物UBC809和UBC886组合构建余甘子DNA指纹图谱。【结果】9条ISSR核心引物对28份余甘子样品扩增共得到686条条带,其中多态性条带667条,多态率为97.23%。通过聚类分析将28份余甘子样品聚为4类,其中大果油甘和甜油甘5号遗传分化较大,各单独聚为一类,珍珠油甘、甜油甘2号和甜油甘4号聚为一类,其余23个品种聚为一类。利用核心引物UBC809和UBC886组合,成功构建了余甘子DNA指纹图谱,供试28份余甘子品种(系)每个都有一套唯一的指纹图谱编码。【结论】成功构建了28份余甘子种质的指纹图谱,可用于余甘子种质资源的分类与鉴定,同时可用于余甘子杂交新品种选育。

水分活度及干燥方式对余甘子果渣质量的影响

余甘子果渣中纤维类成分含量丰富,是生产膳食纤维较好的原材料,因鲜渣含有较高的水分和糖分,微生物极易滋生、霉变;为便于余甘子果渣存放和后续加工利用,需确定余甘子果渣合理的贮藏水分活度及干燥方式。试验表明,余甘子果渣水分与水分活度关系式为Y=Exp(0.920-12.312/x+8.194/x2-0.03x),其安全水分活度0.6对应的安全含水率为10.25%,在此含水率下,微生物难以寄生,有较佳的贮藏效果;4种干燥方式中,流化床干燥法所用时间最短、为5 min,样品表面疏松多孔,硬度最小、为21 N,其次为真空干燥105℃,热风干燥50℃对产品的聚合度影响最大。

滇橄榄树不同组织原花色素质量浓度及抗氧化性能研究

原花色素是最有效的自由基清除剂之一,具有非常强的清除自由基和抗氧化的能力。以云南地区滇橄榄树为原料,采用超声波提取法,对其树皮、树芯、树枝、树叶的原花色素质量浓度进行了研究,并对树枝原花色素的提取条件进行优化。其次,对树皮原花色素抗氧化能力及与维生素C(vitamin C,VC)的抗氧化协同作用进行了比较。结果表明:树枝的原花色素质量浓度最高,其次是树皮、树叶、芯材。同时,树枝中原花色素提取的最佳条件为:以质量分数为60%的乙醇为提取剂,料液比1∶7,提取温度60℃,提取时间30 min,在此条件下原花色素的提取率能达到3.85%。滇橄榄树皮提取物具有很强的抗氧化性,清除DPPH自由基的能力最佳,原花色素质量浓度为10μg/m L时,自由基清除率高达88.55%,且抗氧化有效成分主要集中在乙酸乙酯层,水层仍然含有部分抗氧化成分。原花色素和VC以质量比为3∶1,1∶1,1∶3进行复配后的自由基最高清除率分别为88.84%,91.27%,91.05%,协同作用强弱顺序为1∶1>1∶3>3∶1。

中国余甘子果实化学成分初步研究(一)

采用系统预试验法,对中国余甘子果实所含化学成分进行了定性检验。结果表明,中国余甘子果实可能含有糖类,氨基酸及蛋白质,鞣质,有机酸,黄酮,蒽醌,甾体,三萜,香豆素,内酯,油脂等。

滇橄榄自然居群子代苗期生长节律研究

利用4个滇橄榄自然居群的种子开展育苗试验,定期测定幼苗苗高与地径的生长表现,研究其生长节律。结果表明,不同居群滇橄榄子代苗期的苗高和地径生长均表现出"慢-快-慢"的生长过程,符合"S"型生长曲线,不同居群速生期均集中于雨热同期的7—8月。4个居群中瑞丽市半宁村居群在试验地的生长表现最好,速生期持续时间较长,总的生长量较大。

亲水色谱-超高效液相-串联质谱法测定滇橄榄中水解氨基酸研究

目的:建立滇橄榄中的水解氨基酸的亲水色谱-超高效液相-串联质谱法测定方法。方法:采用盐酸水解滇橄榄中的17种氨基酸,DE-52纤维素除氯离子后,利用亲水色谱柱,结合超高效液相色谱-串联质谱仪,采用正离子模式,多反应监测(MRM),外标法定量,测定滇橄榄中17种水解氨基酸。结果:DE-52纤维素能够有效去除水解溶液中的氯离子,亲水色谱柱对于亮氨酸和异亮氨酸等具有较好的分离效果,在0.0003~2.0μg·mL^-1质量浓度范围内,17种氨基酸的线性关系较好,检出限为0.015~13.0 mg·kg^-1,回收率为73.8%~98.8%,RSD为3.25%~7.79%。结论:该方法重复性好、灵敏度高,适合滇橄榄中17种水解氨基酸的测定。

余甘子果渣抑菌免洗凝胶的制备工艺研究

目的:测定余甘子果渣中的化学成分,优选提取工艺与免洗凝胶的制剂处方,开发余甘子果渣抑菌免洗凝胶。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)测定余甘子果渣与余甘子药材中没食子酸、柯里拉京、诃黎勒酸与鞣花酸的含量;通过抑菌圈筛选余甘子果渣中主要抑菌活性成分筛选;采用单因素实验设计优化余甘子果渣的提取工艺;以感官评价及凝胶理化性质为指标,采用Box-Behnken响应面法优选余甘子果渣抑菌免洗凝胶处方。结果:余甘子果渣与余甘子药材的成分基本相同,没食子酸、柯里拉京、诃黎勒酸与鞣花酸在果渣的含量中约为药材中含量的21.99%~67.63%、0.52%~4.79%、7.38%~8.79%、10.15%~16.10%。诃黎勒酸、柯里拉京、没食子酸对白念珠菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)均低于10μg/mL,而鞣花酸的MIC为16.38~32.75μg/mL。以没食子酸、柯里拉京与诃黎勒酸为评价指标,得到最优提取工艺为取余甘子果渣,加入10倍体积的70%乙醇,回流2 h,提取1次。通过Box-Behnken响应面法,得到最优凝胶基质配方为30%余甘子果渣提取液、0.4%卡波姆U20、3%甘油、4%的95%乙醇、三乙醇胺调pH值到5~6,其余为纯化水。结论:余甘子果渣具有较好的开发价值,抑菌免洗凝胶的制备工艺可行,为中药固废物的综合开发利用提供了技术路径。

超声波辅助提取、纯化滇橄榄多糖的工艺研究

目的采用超声波辅助法提取滇橄榄多糖,并采用大孔树脂和透析法对多糖进行除色素纯化。方法通过单因素实验和正交实验优化滇橄榄多糖的提取工艺及脱色纯化工艺。结果超声波辅助法提取滇橄榄多糖的最佳条件为:超声功率为180 W、超声温度为50℃、超声时间为45 min、料液比为1:50(m:V),得率为6.18%;X-5大孔树脂对滇橄榄多糖脱色条件为:5 mg/mL滇橄榄多糖溶液、温度为40℃、树脂用量为1 g、时间为1 h、pH为1,色素清除率为82.21%,多糖保留率为94.86%;纯化后滇橄榄多糖的纯度由31%提高至91%。结论本研究得到了滇橄榄多糖提取、纯化的最优条件,为后续研究及开发利用提供了理论基础。

滇橄榄叶羟基酪醇对CS_(2)致小鼠睾丸组织损伤的保护作用

目的:研究从滇橄榄叶中提取的羟基酪醇(hydroxytyrosol from Phyllanthus emblica Linn leaves,PHT)对二硫化碳(carbon disulfide,CS_(2))致小鼠睾丸组织损伤的保护作用。方法:实验小鼠随机分为对照组(蒸馏水)、CS_(2)染毒组(50 mg/m^(3))和3个PHT干预组(450、150、50 mg/kg),4周后计算睾丸脏器系数、检测精子质量、测定睾丸组织匀浆中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量并观察睾丸组织病理切片,采用Western blot实验检测睾丸组织中凋亡相关因子蛋白的表达情况。结果:经过干预后,PHT高、中剂量组睾丸脏器系数均高于CS_(2)染毒组(P<0.01),且PHT高剂量组与对照组间无统计学差异(P>0.05);各PHT剂量组精子计数和精子活动率均高于CS_(2)染毒组(P<0.01),但低于对照组(P<0.01);各PHT剂量组精子畸形率低于CS_(2)染毒组(P<0.01),且PHT高剂量组与对照组的精子畸形率无统计学差异(P>0.05);观察睾丸组织病理切片发现,与CS_(2)染毒组相比,各PHT剂量组的睾丸组织形态均得到了改善,其中PHT高剂量组与对照组的病理切片在镜下未观察到明显差别;氧化应激指标与凋亡相关因子蛋白的表达情况表明,各PHT剂量组睾丸组织中MDA含量均低于CS_(2)染毒组(P<0.01),PHT高剂量组与对照组间MDA含量无显著差异(P>0.05);各PHT剂量组睾丸组织中SOD和GSH-Px活性高于CS_(2)染毒组(P<0.05),但低于对照组(P<0.01);与CS_(2)染毒组相比,PHT高、中剂量组睾丸组织中Bax和Caspase-3表达降低,Bcl-2表达升高(P<0.01),且各剂量组与对照组间也存在差异(P<0.05)。结论:CS_(2)可以引起小鼠睾丸氧化损伤,且PHT可以针对CS_(2)所致的睾丸组织损伤发挥拮抗作用,其机制可能与PHT的强抗氧化性维持了部分抗氧化酶的活性,缓解了氧化损伤,从而减少了细胞凋亡因子的形成有关。

贵州余甘果汁饮料加工研究

研究了余甘果汁饮料的主要加工工艺及产品指标，选择出最佳配方和工艺参数，探讨了维生素Ｃ等营养成份的保存和单宁物质对果汁品质的影响。试验表明：糖度１０％─１５％，酸度０．３８％─０．４４％，天然维生素Ｃ５０－７０ｍｇ／１００ｇ，香精０．１‰─０．１５‰时，饮料口感及色泽较好。

滇橄榄水提物对洛哌丁胺诱导便秘小鼠症状的改善作用

探讨滇橄榄水提物对小鼠功能性便秘的改善作用。将昆明小鼠随机分为空白对照组、洛哌丁胺模型对照组、阳性对照组(麻仁丸)和3个剂量的滇橄榄水提物干预组。给药组分别经口灌胃低、中、高剂量[300、600、900 mg/(kg·d)]的滇橄榄水提物和洛哌丁胺[8 mg/(kg·d)]。连续灌胃一定时间后,观察各组小鼠的首粒排黑便时间、6 h内粪便总质量和粪便粒数、粪便含水率和小肠墨汁推进率。与模型对照组相比,滇橄榄水提物高剂量组小鼠首粒排黑便时间显著缩短,中、高剂量组小鼠6 h内粪便总质量和粪便粒数以及粪便含水率均显著提高,小肠墨汁推进率显著增加,通便效果与阳性对照组相近。滇橄榄水提物对洛哌丁胺诱导的小鼠功能性便秘具有改善作用,安全有效,无明显毒副作用。

诃子膏核心药对正常大鼠能量代谢相关因子的影响

目的分别观察诃子膏3种核心药(诃子、毛诃子、余甘子)及其组合(剂量比为1:1:1)对正常大鼠能量代谢相关因子的影响,分析其作用趋势和特点。方法制备药液并灌胃给药30 d后,观察大鼠体重变化,采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测肝组织Na^+-K^+ATP酶、Ca^(2+)-Mg^(2+)ATP酶和琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase, SDH)活性、肝糖原(hepatic glycogen, HG)和肌糖原(muscle glycogen,MG)含量,检测血浆三碘甲状腺原氨酸(triiodothyronine, T3)、四碘甲状腺原氨酸(tetraiodothyronine, T4)、促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone, TSH)含量。结果核心药组和毛诃子组能够抑制正常老鼠体重自然增大。毛诃子组显著升高Na^+-K^+ATP酶、Ca^(2+)-Mg^(2+)ATP酶和SDH活性, HG、MG、T3、T4和TSH含量,而诃子组、余甘子组和核心药组合对能量代谢相关因子的影响不明显。结论核心药组合对正常大鼠Na^+-K^+ATP酶、Ca^(2+)-Mg^(2+)ATP酶和SDH、HG、MG、T3、T4和TSH等能量代谢相关因子的影响不显著,而毛诃子影响显著,可能是毛诃子所含物质基础与其他2种药材不同有关,还需要进一步研究。

野生余甘子树皮的化学成分研究

目的研究野生余甘子Phyllanthus emblica树皮的化学成分。方法利用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20等方法分离纯化,并结合其理化性质及波谱数据鉴定化合物结构。结果从余甘子树皮的95%乙醇提取物中分离得到16个化合物,分别鉴定为羽扇豆醇(1)、豆甾醇(2)、β-胡萝卜苷(3)、β-谷甾醇(4)、白桦脂醇(5)、没食子酸乙酯(6)、没食子酸甲酯(7)、3,4,3′-三氧甲基鞣花酸(8)、羽扇豆烷-20(29)-烯-3β,16β-二醇(9)、3-甲氧基鞣花酸-4′-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(10)、没食子酸(11)、吡喃酮[3,2-b]吡喃-2,6-二酮(12)、没食子儿茶素(13)、表没食子儿茶素(14)、3,3′-二甲氧基鞣花酸-4′-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(15)、3,4,3′-三甲氧基鞣花酸-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(16)。结论化合物12为一新天然产物,化合物9、15为首次从该属植物中分离得到,化合物2、5、8、10、16为首次从该植物中分离得到。

滇橄榄主要栽培品种的物候期及经济性状

对云南省滇橄榄(Phyllanthus emblica Linn.)主栽品种及其栽培面积调查、物候期观测、经济性状调查、果实主要化学成分测定分析。结果表明:滇橄榄主栽品种6个("高黎贡山"糯滇橄榄、"保山1号、2号、3号、4号"余甘子和"红珍珠"滇橄榄)栽培面积17 098 hm^2;2月中旬至3月中旬萌芽,4月上旬至5月上旬开花,果实成熟期9月中旬至次年1月中旬,1月下旬至2月上旬落叶;其平方米冠影果实产量4.2～5.4 kg/m^2,果实单果质量14.9～45.9 g、可食率82.9%～90.2%,果肉Vc含量0.412%～0.523%、粗纤维1.30%～2.05%、总糖7.2%～11.1%、总酸1.51%～1.91%、可溶性固形物9.5%～13.2%、水分84%～86.8%。根据品种特性及栽培现状,提出了品种利用策略,为其产业可持续发展提供科学依据。

7种果蔬酵素理化成分及抗氧化活性研究

以滇橄榄、菠萝蜜、柠檬、青梅、火龙果、诺丽果、食用仙人掌等7种果蔬单独经自然发酵制得的酵素为研究对象,对其理化成分、酶活力和体外抗氧化活性进行了分析和比较。结果表明,不同果蔬原料制备的酵素主要活性成分和抗氧化能力存在显著差异(P<0.05)。7种果蔬酵素pH值为2.94~3.41,诺丽果酵素总酸含量(34.38 g/kg)最高,柠檬酵素的粗多糖含量(为5.33 g/kg)最高,滇橄榄酵素的总蛋白、总酚、总黄酮含量及α-淀粉酶活力、总抗氧化能力最高,分别为:42.78 mg/mL、5.92 mg/mL、0.52 mg/mL、326.27 U/mL、155.34 U/mL,与其他6种果蔬酵素差异显著(P<0.05)。总体而言,滇橄榄酵素感官品质和理化品质优于由柠檬、青梅、火龙果、诺丽果、食用仙人掌等制备的果蔬酵素。

发酵条件对余甘果乳酸发酵饮料品质的影响

研究了余甘果乳酸发酵饮料的加工工艺技术,并通过正交试验设计研究了乳酸菌接种量等发酵条件对余甘果乳酸发酵饮料的感官品质等的影响。试验结果表明:复合稳定剂组成为0.25%羧甲基纤维素钠盐、0.15%蔗糖酯、0.01%果胶酶,蔗糖为8%,25%余甘果汁与10%脱脂奶的配比为3∶1,发酵条件为菌种比(保加利亚乳杆菌∶嗜热链球菌)1∶1、接种量5%、发酵温度42℃、发酵时间36h时,余甘果乳酸发酵饮料的稳定性最佳,感官品质最好。