[目的]探索信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)新型抑制剂苦蘵内酯J诱导肺腺癌细胞凋亡的分子机制。[方法]以5、10、20、25、30、40μmol·L^(-1)苦蘵内酯J处理表皮细胞生长因子受...[目的]探索信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)新型抑制剂苦蘵内酯J诱导肺腺癌细胞凋亡的分子机制。[方法]以5、10、20、25、30、40μmol·L^(-1)苦蘵内酯J处理表皮细胞生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)T790M继发突变的肺腺癌细胞株H1975细胞24h或48h后,CCK-8法检测细胞存活率;5、10、15、20μmol·L^(-1)苦蘵内酯J处理H1975细胞24h后,Annexin V-PI染色及流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白的表达;5、10、15、20μmol·L^(-1)苦蘵内酯J处理H1975细胞4h或20μmol·L^(-1)苦蘵内酯J处理H1975细胞0.5、1、2、4h后,Western blot检测STAT3蛋白表达及其磷酸化水平;以20μmol·L^(-1)蛋白酶体抑制剂MG132及10μmol·L^(-1)苦蘵内酯J联合处理或单独处理H1975细胞,阐明苦蘵内酯J对STAT3蛋白的降解作用;20μmol·L^(-1)苦蘵内酯J处理H1975细胞4h后,实时荧光定量PCR检测STAT3 m RNA表达情况。[结果]H1975细胞存活率随苦蘵内酯J作用时间延长和作用浓度增加而不断降低,20μmol·L^(-1)苦蘵内酯J处理24h和48h,H1975细胞存活率分别为65.9%和44.2%;20μmol·L^(-1)苦蘵内酯J处理24h后,H1975细胞凋亡率为51.1%;Western blot检测显示20μmol·L^(-1)苦蘵内酯J处理24h后,H1975细胞内cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3和cleaved-PARP蛋白表达水平显著高于未处理组(P<0.05,P<0.01,P<0.001);20μmol·L^(-1)苦蘵内酯J处理4h后,H1975细胞内STAT3总蛋白和STAT3-Tyr表达水平显著低于与未处理组(P<0.001);蛋白酶体抑制剂MG132可恢复STAT3的总蛋白水平;实时荧光定量PCR结果显示,苦蘵内酯J对STAT3 m RNA表达无影响(P>0.05)。[结论]苦蘵内酯J能够抑制H1975细胞增殖并诱导细胞凋亡,其可能的机制是引起STAT3泛素化降解并抑制STAT3磷酸化。展开更多
文摘[目的]探索信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)新型抑制剂苦蘵内酯J诱导肺腺癌细胞凋亡的分子机制。[方法]以5、10、20、25、30、40μmol·L^(-1)苦蘵内酯J处理表皮细胞生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)T790M继发突变的肺腺癌细胞株H1975细胞24h或48h后,CCK-8法检测细胞存活率;5、10、15、20μmol·L^(-1)苦蘵内酯J处理H1975细胞24h后,Annexin V-PI染色及流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白的表达;5、10、15、20μmol·L^(-1)苦蘵内酯J处理H1975细胞4h或20μmol·L^(-1)苦蘵内酯J处理H1975细胞0.5、1、2、4h后,Western blot检测STAT3蛋白表达及其磷酸化水平;以20μmol·L^(-1)蛋白酶体抑制剂MG132及10μmol·L^(-1)苦蘵内酯J联合处理或单独处理H1975细胞,阐明苦蘵内酯J对STAT3蛋白的降解作用;20μmol·L^(-1)苦蘵内酯J处理H1975细胞4h后,实时荧光定量PCR检测STAT3 m RNA表达情况。[结果]H1975细胞存活率随苦蘵内酯J作用时间延长和作用浓度增加而不断降低,20μmol·L^(-1)苦蘵内酯J处理24h和48h,H1975细胞存活率分别为65.9%和44.2%;20μmol·L^(-1)苦蘵内酯J处理24h后,H1975细胞凋亡率为51.1%;Western blot检测显示20μmol·L^(-1)苦蘵内酯J处理24h后,H1975细胞内cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3和cleaved-PARP蛋白表达水平显著高于未处理组(P<0.05,P<0.01,P<0.001);20μmol·L^(-1)苦蘵内酯J处理4h后,H1975细胞内STAT3总蛋白和STAT3-Tyr表达水平显著低于与未处理组(P<0.001);蛋白酶体抑制剂MG132可恢复STAT3的总蛋白水平;实时荧光定量PCR结果显示,苦蘵内酯J对STAT3 m RNA表达无影响(P>0.05)。[结论]苦蘵内酯J能够抑制H1975细胞增殖并诱导细胞凋亡,其可能的机制是引起STAT3泛素化降解并抑制STAT3磷酸化。
