植物性雌激素genistein对豚鼠乳头肌的电生理效应

应用细胞内微电极技术 ,观察了genistein (GST)对豚鼠乳头肌的电生理效应。结果显示 :( 1)GST ( 10～ 10 0 μmol/L)浓度依赖地缩短正常乳头肌动作电位时程 ;( 2 )对部分去极化乳头肌 ,GST ( 5 0 μmol/L)除缩短动作电位时程外 ,还使动作电位幅值和超射值降低 ,零相最大上升速度减慢 ;( 3 )预先应用一氧化氮合酶抑制剂L NNA( 5mmol/L) ,不影响GST ( 5 0 μmol/L)的电生理效应 ;( 4 )单独应用 17β 雌二醇 (E2 ,5 μmol/L)或GST ( 10 μmol/L)时 ,动作电位各参数无明显变化 ,而预先应用同剂量的GST再加入E2 ,则动作电位时程缩短。结果提示 ,GST可能通过非NO途径抑制Ca2 +内流 ,从而影响豚鼠乳头肌电生理效应 ,并与E2 有加强或协同效应。

植物性雌激素genistein对哇巴因所致豚鼠乳头状肌迟后去极化及触发活动的效应(英文)

应用标准玻璃微电极技术 ,研究了植物性雌激素 genistein (GST)对哇巴因所引起的豚鼠乳头状肌迟后去极化 (DAD)及触发活动 (TA)的效应。结果如下 :(1)预先给予GST (10 ,5 0 ,10 0 μmol/L)剂量依赖性地抑制哇巴因 (1μmol/L)所引起的豚鼠乳头状肌DAD及TA ;(2 )预先应用一氧化氮合酶抑制剂L NAME (1mmol/L) ,不影响GST (5 0 μmol/L)对DAD及TA的效应 ;(3)单独应用 17β 雌二醇 (E2 ,5 μmol/L)或GST (10 μmol/L)对DAD及TA无明显影响 ,而联合应用相同剂量的GST和E2 则产生明显抑制效应。以上结果提示 ,GST可能通过抑制钙离子内流从而具有抗心律失常作用 。

金雀异黄素和槲皮素对人类乳腺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨金雀异黄素(genistein,Gen)和槲皮素(quercetin,Que)对人类乳腺癌细胞株增殖的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法测定槲皮素对雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF-7、T47D和非雌激素依赖性乳腺癌细胞MDA-MB231的细胞增殖作用,并以雌激素受体拮抗剂ICI182780为工具药来评价金雀异黄素、槲皮素发挥雌激素样作用与雌激素受体的关系,流式细胞术对MCF-7细胞的增殖情况进行分析。结果Gen和Que在一定剂量范围内能促进T47D和MCF-7细胞的增殖,而对雌激素受体阴性MDA-MB231细胞未见增殖作用,并将MCF-7细胞周期由G1期向S期推进,促进DNA合成,提高细胞分裂增殖指数,且Gen和Que促进MCF-7细胞增殖作用被雌激素受体拮抗剂所拮抗。结论金雀异黄素和槲皮素具有雌激素活性,此作用可能是通过雌激素受体(ER)介导的。

植物雌激素对大鼠慢性缺氧性肺动脉高压的预防作用

目的 研究植物雌激素染料木黄酮和大豆苷元对慢性缺氧性肺动脉高压 (HPH)的预防作用 ,为防治HPH提供一种新的途径。方法 健康♂Wistar大鼠 ,体重 (2 10 3± 2 8 7)g,随机分为 6组 :①平原对照组 (C) ;②慢性缺氧组 (H) ;③染料木黄酮低剂量组 (H +L) :给药剂量为 2 5mg·kg-1;④染料木黄酮中剂量组 (H +M) :给药剂量为 5 0mg·kg-1;⑤染料木黄酮高剂量组 (H +H) :给药剂量为 10 0mg·kg-1;⑥大豆苷元组 (H +D) :给药剂量为 5 0mg·kg-1。C组在平原环境 ,②～⑥组每天灌胃大鼠受试物或与受试物等容积的溶媒 ,置于减压舱 ,模拟海拔 5 0 0 0m高原 ,8h·d-1,持续 2 1d ,分别测定肺动脉压、右心室功能和右心室肥大指数。结果 慢性缺氧后大鼠肺动脉压显著增加 (P <0 0 1) ;与慢性缺氧组相比 ,染料木黄酮可以显著抑制慢性缺氧引起的肺动脉压升高 (P <0 0 1) ;大豆苷元组差异无显著性 (P >0 0 5 )。与平原对照组相比较 ,单纯缺氧组右心室肥大指数 [RV/ (LV +Sep) ]显著增加 (P <0 0 1) ;与单纯缺氧组比较 ,染料木黄酮各组右心室肥大指数从低剂量到高剂量呈逐渐降低的趋势 (40 5 3%±3 80 % ,P >0 0 5 ;39 0 7%± 3 6 9% ,P >0 0 5 ;33 73%±3 2 0 % ,P <0 0 1) ,高剂量组 (10 0mg·kg-1)差异有显著?

槲皮素、补骨脂素对人乳腺癌T47D细胞两种受体亚型表达的影响

目的探讨槲皮素和补骨脂素的雌激素作用以及调控雌激素受体亚型表达的作用机制。方法10μmol.L-1槲皮素和10μmol.L-1补骨脂素分别处理T47D细胞48 h,采用RT-PCR和Western blot方法测定对雌激素依赖性乳腺癌细胞T47D雌激素受体亚型ERα和ERβ表达的影响,并以雌激素受体拮抗剂ICI182,780为工具药来评价槲皮素和补骨脂素发挥雌激素样作用与雌激素受体的关系。结果槲皮素、补骨脂素在10μmol.L-1可明显诱导T47D细胞ERαmRNA和蛋白表达,而对ERβ表达没有影响。当与ICI182,780共孵育T47D细胞ERα表达被拮抗。结论槲皮素、补骨脂素产生的促进ER阳性细胞增殖的雌激素样作用是通过增加ERα表达实现的。

植物雌激素对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的 : 探讨植物雌激素大豆异黄酮 (genistein,GS)和玉米赤霉烯酮 (zearalenone,ZEA)对乳腺癌细胞株 MCF- 7增殖的影响。方法 : 雌激素依赖性 MCF- 7细胞在 DMEM培养液(含小牛血清 1 0 % )中采用开放式单层贴壁培养 ,于加受试物前 5 d将细胞用 PBS洗涤后改为无酚红高糖 DMEM(含 5 %经活性碳 -葡聚糖苷处理的胎牛血清 ,CDT- FBS)培养 ,实验设溶剂对照、雌激素对照、抗雌激素对照及两种受试物各四个剂量组 ,采用噻唑蓝 (MTT)法、3H- Td R掺入法及流式细胞术对 MCF- 7细胞的增殖情况进行分析。结果 : 与溶剂对照组相比较 ,GS(96μmol/ L,2 4h)可明显抑制 MCF- 7细胞增殖和细胞 DNA合成 ,并将细胞周期阻滞在 G2 / M;8μmol/ L GS处理96 h也能产生类似的抑制效果。 96 nmol/ L ZEA处理 2 4 h可明显促进 MCF- 7细胞增殖和细胞DNA合成 ,并将细胞周期由 G0 / G1向 S期推进 ,提高细胞分裂增殖指数。结论 : ZEA和 GS均属环境雌激素 ,但对乳腺癌细胞 MCF- 7增殖产生的影响不同 ,ZEA可促进 MCF- 7增殖 ,而 GS能够抑制 MCF- 7细胞的增殖 ,即

植物雌激素通过缺氧诱导因子-1α与核因子-κB下调缺氧肺泡上皮细胞膜联蛋白A1的表达

目的从人肺泡上皮细胞甲酰肽受体激动剂——膜联蛋白A1(Annexin A1,AnxA1)的表达变化,探讨植物雌激素影响缺氧肺部炎症浸润的机制。方法人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)接种于60 mm培养皿中常规培养,待培养皿中细胞长满约70%,根据是否用药分为:对照组(溶剂DMSO对照)、染料木黄酮(genistein,Gen)组、大豆苷元(daidzein,DD)组,每组细胞再根据是否缺氧再分为常氧组(N)、缺氧组(H)。Gen组、DD组于缺氧处理前分别加入Gen及DD,终浓度均为15μmol/L。缺氧组细胞置于缺氧培养箱(1%O2)24 h。取细胞培养上清及细胞裂解离心上清,结合甲酰肽受体特异性抑制剂tBoc2,通过趋化实验,检测其甲酰肽受体激动活性。用Western blot分析AnxA1、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、核因子-κB(NF-κB)在蛋白水平的变化,用RT2-PCR法分析其mRNA水平的变化。结果缺氧后的细胞冻融上清及培养上清趋化活性显著高于常氧组(P<0.05),而植物雌激素处理后,两种上清的趋化活性均显著高于对照组(P<0.05)。Western blot与RT2-PCR检测结果显示,缺氧组AnxA1在蛋白水平和mRNA水平均高于常氧组(P<0.05),两种植物雌激素不同程度地削弱了缺氧对AnxA1的上调效果,同时对HIF-1α、NF-κB的蛋白水平也产生同样的影响。结论植物雌激素削弱了缺氧对AnxA1基因表达的上调效应,其机制与HIF-1α、NF-κB信号途径有关。

染料木黄酮对慢性缺氧性肺血管结构改建的干预作用

目的 探讨染料木黄酮对大鼠缺氧性肺血管结构改建的干预作用及其作用机制。方法 将♂Wistar大鼠随机分为 3组 ,常氧对照组 (C)、慢性缺氧组 (H)和慢性缺氧 +染料木黄酮组 (H +G) ,对肺血管进行显微形态学观察。通过免疫组织化学方法检测肺动脉平滑肌细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果 与常氧对照组相比 ,慢性缺氧组大鼠肺血管管壁增厚 ,管腔狭窄 ,肌型动脉百分比显著增加 (P<0 .0 1) ;肺动脉平滑肌增殖细胞核抗原表达增加。与H组比较 ,H +G组大鼠肺动脉管壁增厚程度及血管腔狭窄程度显著减轻 ,肌型动脉百分比显著降低 (P <0 0 1) ;肺动脉平滑肌PCNA表达明显减少。结论 实验结果提示 ,染料木黄酮可以显著抑制缺氧性肺血管结构改建 ,其作用机制可能与其抑制缺氧诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖有关。

大豆异黄酮对乳腺癌细胞抑癌基因启动子区的去甲基化作用研究

目的:探讨大豆异黄酮是否能够逆转乳腺癌细胞中关键抑癌基因—上皮型钙粘蛋白基因(E-cadherin)启动子的异常甲基化状态,并有效地重新激活该基因的表达,从而抑制乳腺肿瘤细胞生长。方法:采用不同浓度大豆异黄酮处理乳腺癌SKBR3细胞6d后,通过噻唑蓝比色法检测大豆异黄酮对乳腺癌细胞增殖的影响,进而通过甲基化特异性聚合酶链反应结合半定量PCR方法,检测乳腺癌细胞中E-cadherin基因启动子区CpG岛的去甲基化状态及恢复表达情况。结果:大豆异黄酮在10,20,40,80,160μmol/L浓度对乳腺癌细胞的抑制率分别为(7±2.11)%,(10±3.23)%,(44.33±4.93)%,(84.33±3.06)%,(86.33±3.51)%,其对细胞的生长抑制呈剂量依赖效应。甲基化特异性PCR及半定量PCR结果提示大豆异黄酮对E-cadherin基因启动子区异常甲基化具有去甲基化效应,并能使Ecadherin基因部分恢复表达。结论:植物雌激素大豆异黄酮作为一种天然的表观遗传修饰剂能够通过逆转关键抑癌基因启动子甲基化,激活抑癌基因,抑制乳腺癌细胞的生长,在乳腺肿瘤的预防和治疗中发挥重要作用。

植物雌激素对体外培养的正常人皮肤成纤维细胞的作用

目的:观察植物雌激素(金雀异黄素)对正常人皮肤成纤维细胞的影响,探讨其延缓皮肤衰老的机制。方法:利用体外培养的健康人真皮成纤维细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测金雀异黄素对成纤维细胞存活力的影响;流式细胞仪检测金雀异黄素作用成纤维细胞后,细胞内活性氧(R0S)水平的改变;用分光光度法检测金雀异黄素作用成纤维细胞后,细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量的变化。结果:0.0625、0.125和0.25mg/L的金雀异黄素可以促进人皮肤成纤维细胞的增殖(P<0.05),并降低细胞内活性氧(ROS)的产生(P<0.05);0.0625～0.25mg/L的金雀异黄素可以减少人正常皮肤成纤维细胞内MDA的生成(P<0.05),提高超氧化物歧化酶(SOD)活性(P<0.05)。结论:金雀异黄素可以促进人正常皮肤成纤维细胞增殖,这可能与金雀异黄素可以降低细胞氧自由基的含量和提高细胞抗氧化的能力有关。

木黄酮对体外培养的HSC-T6细胞基质金属蛋白酶抑制因子1基因表达的影响

目的以雌二醇(E2)作为阳性对照,观察植物雌激素木黄酮(GST)对体外培养的HSC-T6细胞基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)基因表达的影响。方法E20.1μmol/L浓度作为阳性对照,GST 0.5、5、50μmol/L浓度分别作用于HSC-T6细胞36 h,以RT-PCR方法测定其对HSC-T6细胞TIMP-1基因表达的影响。结果E2浓度组和GST各浓度组均对HSC-T6细胞TIMP-1基因表达有明显的抑制作用,其中GST各浓度组作用呈一定剂量相关性。结论GST各浓度组均可抑制HSC-T6细胞TIMP-1基因表达水平,从而促进胶原降解,可能是其抗肝纤维化的作用机制之一。

植物性雌激素三羟异黄酮对家兔房室结细胞自发活动的电生理效应(英文)

本研究旨在应用经典玻璃微电极方法观察植物性雌激素三羟异黄酮 (genistein ,GST)对家兔房室结细胞自发活动的电生理效应及其作用机制。GST (10～ 10 0 μmol/L)不仅以剂量依赖性方式抑制房室结起搏细胞的动作电位 0相最大上升速度 (Vmax)、4期去极化速率 (VDD)、自发起搏频率 (RPF)和动作电位幅值 (APA) ,而且延长复极化90 %的时间 (APD90 )。如提高灌流液中钙离子浓度以及应用L型钙通道开放剂BayK864 4(0 2 5 μmol/L) ,则可拮抗GST对起搏细胞的上述电生理效应 ,但NO合酶阻断剂L NAME (0 5mmol/L)对GST的效应并无影响。以上结果提示 ,GST可抑制家兔房室结的自发活动 ,这些效应可能与其抑制钙离子内流有关 ,但此作用机制中并无NO参与。

染料木黄酮在大鼠肝微粒体代谢的酶动力学

目的:体外研究大鼠肝微粒体中染料木黄酮代谢的酶动力学,及选择性细胞色素(CYP)酶抑制剂对其代谢的影响。方法:用大鼠肝微粒体研究染料木黄酮代谢的酶动力学,探讨CYP酶的选择性抑制剂对其代谢的影响及参与其代谢的CYP酶。结果:CYP1A2抑制剂呋喃茶碱可以显著地抑制染料木黄酮代谢,使染料木黄酮的代谢速率下降。而其它CYP特异性抑制剂对染料木黄酮代谢没有明显的影响。结论:CYP1A2参与了染料木黄酮的代谢,CYP1A2的抑制剂可能会与染料木黄酮发生代谢相互作用,从而降低染料木黄酮的代谢速率。

植物雌激素的筛选及抗皮肤老化的体外研究

目的筛选植物雌激素,并进一步研究植物雌激素对成纤维细胞合成胶原蛋白的影响。方法采用细胞增殖实验(MTT法)观察64种植物提取物或有效部位对雌激素受体(ER)阳性细胞系MCF-7增殖的影响,筛选具有雌激素样作用的植物提取物或有效部位;并用ER阴性的MDA-MB-231细胞和ER拮抗剂ICI 182780,考察促进MCF-7细胞的增殖作用是否由ER介导。采用圆点印迹法评估植物雌激素对成纤维细胞合成1型原胶原蛋白(PC-1)的影响。结果在筛选的64种植物提取物或有效部位中,葛根、决明子、啤酒花、桑叶、甘草植物提取物及大豆异黄酮可有效诱导MCF-7细胞增殖,但对MDA-MB-231细胞无诱导增殖作用;ICI 182780抑制其诱导MCF-7细胞增殖的作用。葛根素和染料木素显著促进人成纤维细胞合成PC-1(P<0.01),其中葛根素的作用较强;黄豆苷元则显著抑制PC-1合成(P<0.01)。结论葛根提取物和大豆异黄酮具有较强的雌激素样活性,主要的活性成分葛根素和染料木素可显著促进人成纤维细胞合成胶原蛋白,提示具有潜在的祛皱、抗皮肤老化的功效。

基于网络药理学及分子对接方法探讨大豆异黄酮治疗骨质疏松的机制

目的 基于网络药理学及分子对接方法探讨大豆异黄酮(SI)治疗骨质疏松(OP)的可能作用机制。方法 通过文献检索收集SI所含成分,并利用SwissADME数据库根据Lipinski类药五原则评估各成分的药代动力学参数,筛选SI有效活性成分。通过STITCH及SwissTargetPrediction数据库预测SI有效活性成分的作用靶点;通过TTD、DrugBank及DisGeNET疾病数据库获取OP疾病相关靶点。将SI活性成分靶点与OP疾病相关靶点导入Draw Venn Diagram在线平台,得到两者交集靶点(共同靶点),即SI治疗OP的潜在作用靶点。利用Cytoscape 3.7.1软件构建SI治疗OP的“活性成分-潜在作用靶点”网络。通过STRING数据库和Cytoscape软件对交集靶点进行蛋白相互作用(PPI)分析,并用cytoHubba插件筛选出核心靶点。利用Metascape平台对交集靶点进行GO功能及KEGG通路富集分析。利用AutoDock Vina软件对SI有效活性成分与核心靶点进行分子对接。结果 共收集大豆异黄酮成分12种,通过SwissADME数据库筛选出3种有效活性成分:大豆苷元(Daidzein)、染料木素(Genistein)和黄豆黄素(Glycitein),均为游离型苷元。共获得活性成分作用靶点243个,OP疾病相关靶点471个,得到二者的共同靶点(交集靶点)62个,即SI治疗OP的潜在作用靶点。通过PPI网络分析筛选出了10个核心(Hub)基因,包括IGF1、MAPK1、IL6、MAPK3等。GO功能富集结果显示,交集靶点主要参与类固醇代谢、骨化等生物学过程。KEGG通路富集发现,交集靶点主要与类固醇激素的合成和TGF-β、雌激素、IL-17、Jak-STAT等信号通路有关。分子对接显示,3种活性成分和9种靶蛋白之间具有较好的结合能力。结论 大豆异黄酮可能主要通过游离苷元促进内源性雌激素生成及参与成骨分化、骨吸收相关信号通路及生物学途径防治骨质疏松。

木黄酮对心肌成纤维细胞增殖的影响

观察木黄酮对心肌成纤维细胞 (CF)增殖的影响 .采用培养的新生大鼠CF ,以 [3 H]TdR参入率作为细胞增殖指标 ;流式细胞仪分析细胞周期 .结果显示木黄酮 (0 .5～ 50 μmol·L- 1)具有浓度依赖性地抑制 2 .5%胎牛血清刺激CF增殖的作用 ,并将CF细胞周期阻抑在G2 /M期 ;

染料木黄酮防治大鼠移植动脉硬化的实验研究

目的探讨染料木黄酮(Genistein,GEN)对移植动脉硬化的保护作用及其机制。方法建立Brown-Norway至Lewis大鼠腹主动脉移植模型,将受体鼠随机分为四组:1组)、(n=8):高剂量染料木黄酮组(20mg/kg·d);2组(n=8):高低剂量结合的染料木黄酮组[20mg/(kg·d)14d+2mg/(kg·d)46d]腹腔注射60d染料木黄酮(GEN);3组(n=5):溶剂对照组,腹腔注射溶剂二甲基亚砜(DMSO)60d;4组(n=5):异系对照组,不给予任何处理。移植后60d取移植血管作病理组织学检查并利用算机图像分析系统测量内膜厚度;免疫组织化学检测CD4+、CD8+T淋巴细胞的浸润;ELISA法检测血清中血管内皮生长因子(VEGF)的变化。结果病理组织学检查两实验组分别与两对照组比较,内膜增厚不明显(P<0.001)且淋巴细胞和巨噬细胞浸润减少,免疫组织学检测CD4+、CD8+T淋巴细胞浸润减少(P<0.01);两对照组血清中VEGF表达显著高于实验1组即高剂量组(P<0.01),但与实验2组即高低剂量结合组无明显差别。结论染料木黄酮对移植动脉硬化有保护作用,其机制可能与减少了淋巴细胞的浸润,影响生长因子的表达有关,但其主要作用机制有待进一步研究。

金雀异黄素对Raji细胞生长抑制作用及机制的研究

本研究旨在探讨金雀异黄素(Genistein,Gen)对BCL-6阳性的Raji细胞系的生长抑制作用及其机制。用台盼蓝染色法及MTT法分析Gen对BCL-6阳性淋巴瘤细胞系Raji细胞的抗增殖作用,应用PI/AV双染法检测Gen对细胞凋亡的诱导作用,Western blot法检测Gen对BCL-6和NCoR表达的影响,免疫共沉淀(Co-IP)法分析Gen对BCL-6和NCoR蛋白相互作用的影响。结果表明:Gen可时间和剂量赖性地抑制Raji细胞的增殖,同时可诱导其凋亡。研究发现,不同剂量Gen对BCL-6和NCoR表达无明显影响,但可抑制BCL-6和NCoR的结合。结论:Gen对BCL-6阳性B淋巴瘤细胞有明显的抑制作用,这种作用有可能成为联合利妥昔单抗和化疗为基础的辅助治疗。

染料木素对人宫颈癌细胞株HeLa增殖的影响

目的研究染料木素对人宫颈癌细胞株(HeLa)增殖的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法用无酚红DMEM高糖培养基(含10%活性炭处理过的胎牛血清)培养HeLa细胞,使用不同浓度染料木素(0.001～10μmol·L-1)作用,采用MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡的变化,Western blot检测雌激素受体ERα蛋白表达的变化。结果实验浓度区间的染料木素作用于HeLa细胞48、72 h后,均能促进HeLa细胞的增殖。在该浓度区间下,染料木素能够促进HeLa细胞由G1期进入S期,增加HeLa细胞S期细胞比例,减少G1期细胞比例;同时,细胞凋亡降低,ERα蛋白表达量提高。结论染料木素在0.001～10μmol·L-1浓度范围内能够刺激HeLa细胞增殖,这一增殖效果可能是通过上调ERα表达量、调节细胞周期及凋亡相关信号通路产生的。

植物雌激素协同化疗药的抗白血病作用体外研究

异黄酮类的Genistein及daidzein和黄酮类的quercetin是天然的植物雌激素,具有抗癌特征。本研究探讨植物雌激素在急性和慢性粒细胞性白血病中的抗增殖作用及与化疗药的协同作用。用台盼蓝染色法分析genistein单独应用和与化疗药联合应用在NB4和HL-60白血病细胞中的抗增殖作用;用MTT法分析quercetin对K562及K562/A细胞的生长抑制作用;确定genistein与化疗药联合应用中同时及顺序给药的最佳作用次序;观察联合作用24、48、72小时后细胞的生长状态,研究genistein的凋亡诱导作用和细胞周期阻滞作用。结果表明:Genistein对NB4和HL-60白血病细胞有剂量、时间依赖性的增殖抑制作用,可诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。Genistein和化疗药联合应用对细胞生长有协同抑制作用,且与作用次序相关。Quercetin对白血病敏感株和耐药株均有明显的抑制作用。结论:本研究报道genistein和化疗药联合有协同抗白血病细胞增殖作用,具有作用次序相关性特性,这种联合应用有可能为白血病临床治疗提供新的思路。