辣椒疫病流行类型及流行因素分析

通过多年调查，明确了辣椒疫病田间流行类型有暴发和蔓延２ 种形式。暴发是辣椒在短期内大面积枯死的过程，除根系变褐腐烂出现青枯外，再无其它明显症状，其田间流行的条件为旬平均气温在２０ ℃左右，突遇大雨，灌水不当或旬平均降雨量在４０ ｍｍ 以上，暴发程度与温度正相关；蔓延是病原菌重复侵染所致，具有明显的发病中心，发病部位主要集中在茎秆或枝叉处，形成黑褐色条斑，其田间流行条件是辣椒封垄郁闭，旬平均气温在２２ ℃以上，大气相对湿度在８０％ 以上。系统观察表明，在不同栽培条件下，辣椒疫病的发生流行动态存在着一定差异，大棚椒早于露地椒，发病始期一般在５ 月底６ 月初，盛期在７ 月下旬；露地椒在６ 月中下旬发病，盛期出现在７ 月下旬至８ 月上旬，９

转几丁质酶和核糖体失活蛋白双价基因大豆的获得与抗病性鉴定

以东北地区4个主栽大豆品种为试材,通过农杆菌介导法,将2个抗真菌病基因,即几丁质酶基因和核糖体失活蛋白基因构建在同一植物表达载体上,对受体材料进行遗传转化,获得了经Southern检测同时整合双价基因的T0代转基因大豆植株,转化频率为0.5%。将T0代转基因大豆植株扩繁至T2代,并进行了大豆疫霉根腐病和大豆灰斑病的抗性检测,4个株系的抗性均比对照有明显提高。分子生物学验证及RT-PCR检测表明,2个外源基因在4个株系中均进行了转录表达。

大豆抗疫霉根腐病的蛋白组研究

利用双向电泳及MALDI-TOF-MS技术分析绥农10号真叶接种疫霉菌1号生理小种后的蛋白质组变化。在抗病品种绥农10号叶片中共获得19个差异表达蛋白点,其中有12个上调表达,6个下调表达,1个特异表达(仅在接种后出现)。利用生物质谱分析8个上调表达点、1个下调表达点和1个特异表达点,最终鉴定得到8个有注释功能的蛋白,根据功能可分为4类,第1类为参与新陈代谢的蛋白,包括二磷酸核酮糖羧化酶的大亚基及前体、琥珀酰-辅酶A;第2类为参与信号传导的蛋白,包括激酶受体类蛋白、氧化还原酶和半胱氨酸氧化还原酶;第3类为参与细胞内物质运输的蛋白,包括衣壳蛋白的zeta-3亚基;第4类为转录因子,是参与茉莉酸介导的F-box蛋白。这些蛋白可为进一步研究大豆抗病机制奠定基础。

不同抗性烤烟根系分泌单糖特征及其对黑胫病菌的化感效应

为探讨烤烟根系分泌单糖的品种差异及与黑胫病的相关性,该研究以‘NC102’、‘K326’、‘云87’和‘红花大金元’4个烤烟品种为试验材料,测定了各烤烟品种根系、根际土中的单糖及对黑胫病的化感作用。结果表明:(1)在各烤烟品种的根系和根际土中均检出了木糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖,检出的糖组分中以葡萄糖含量最高。(2)在烤烟团棵期时,根际土中的葡萄糖含量在高抗品种‘NC102’和中抗品种‘K326’中分别为2.255和4.744μg·g^(-1),中感品种‘云87’和高感品种‘红花大金元’分别为7.100和11.068μg·g^(-1);各烤烟品种团棵期时根际土中的单糖总量表现为:‘NC102’(5.346μg·g^(-1))<‘K326’(7.844μg·g^(-1))<‘云87’(10.551μg·g^(-1))<‘红花大金元’(15.579μg·g^(-1))。(3)根际土中葡萄糖含量、单糖总量均表现为感病品种高、抗病品种少的趋势;感病品种根际土中单糖总量在团棵期时高,而在其他时期时较低。(4)各单糖和混合糖溶液对黑胫病菌的生长均表现为促进作用,单一糖在2.000mg·mL^(-1)处理下促进作用最强,混合糖在4.000mg·mL-1处理下促进作用最强。研究发现,烤烟感病品种在生长发育前期通过根系分泌较多的单糖到根际土中,为土壤中黑胫病菌的生长发育提供了物质和能源,促进了烟草黑胫病菌的生长,导致烟草黑胫病的发生。

辣椒疫病抗病性分子鉴定技术研究

根据辣椒疫霉菌(Phytophora capsiciLeonian)核糖体(Ribosome)基因及其转录间隔区(Internal transcribed spacer,ITS)序列设计两对引物,确定其中一对用于辣椒疫病抗病性的分子检测。用不同的辣椒品种进行接种,并设置不同的采样时间和部位,提取辣椒基因组和侵染到植株中疫霉菌的DNA,扩增后者的rDNA及其ITS序列。试验表明,在接种后24 h和48 h不能从辣椒叶片中检测到疫霉菌,而接种后24 h可从感病辣椒品种茎中检测到。接种后48 h均能从感病、抗病辣椒品种的茎中检测到疫霉菌,并且感病品种中疫霉菌的DNA的扩增量为100 ng,抗病品种中的为20 ng,前者是后者的5倍;辣椒品种N3中疫霉菌的DNA扩增量为77 ng,介于感病和抗病品种之间,更接近前者,因此该品种是感病的。

烟草品种防御酶活性对黑胫病菌响应差异

以不同抗、感黑胫病烤烟品种云85(高抗)、K326(中抗)、净叶黄(中感)和红花大金元(高感)为供试材料,采用人工接种方法研究了黑胫病菌诱导的这些品种超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性差异及其与品种抗性的关系。结果表明,接种黑胫病后不同抗性品种SOD,POD,PPO和PAL活性与对照相比均出现明显提高,抗病品种SOD和POD活性较感病品种上升快且维持较高活性水平,且抗病品种POD酶活高峰较感病品种出现得早;抗病品种PPO和PAL较感病品种活性上升幅度更大,维持时间更长。相关性分析表明,SOD,POD,PPO和PAL活性与品种的黑胫病抗性呈正相关关系。

不同栽培条件辣椒疫霉菌ITS序列同源性分析

由疫霉菌引起的辣椒疫病是辣椒生产上的主要病害。明确设施栽培辣椒土传病害和露地栽培条件下辣椒疫病疫霉病菌基因序列和同源性,为制定病害防治措施提供依据。通过病菌形态观察、ITS基因序列测定与同源性分析开展研究。由疫霉菌侵染的辣椒病害在设施和露地不同栽培形式下发生部位略有不同,但在病菌形态上表现一致,ITS基因序列同源性极高,达到了99%以上。设施土传病害和露地栽培条件下辣椒疫病菌属于同一种,均为辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leonian)。

辣椒疫霉菌在山西省土壤中的季节性变化

研究了山西省主要菜地中辣椒疫霉菌种群数量的季节性变化、垂直分布及在土壤中的残存。结果表明 ,辣椒疫霉菌种群数量的季节性变化与温度的关系最密切 ,夏、秋季菌量最多 ,最适温度为 2 5～ 2 8℃。辣椒疫霉菌主要分布在 0～

剑麻斑马纹病菌EST-SSR标记开发与评价

剑麻斑马纹病是剑麻生产中具有破坏性的一种真菌病害。本研究从Gen Bank(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nucest)中随机下载10 525条寄生疫霉EST序列,经过去冗余处理后得到5 519条无冗余EST。利用MISA(MIcro SAtellite identification tool)软件进行SSR发掘,从中共搜索到199个1~6碱基SSR,其中三核苷酸重复基元类型最多,共鉴定到55个,占SSR总数的27.6%;其次是二核苷酸重复基元类型和单核苷酸重复基元类型,分别鉴定到51和47个,各占所鉴定SSR总数的25.6%和23.6%。进一步分析表明,AG/CT二核苷酸重复基元类型为优势重复类型,占二核苷酸SSR总数的76.5%。而AAG/CTT和AGC/CTG 2个基元类型在三核苷酸中出现频率最多,分别为15和11次,分别占三核苷酸SSR总数的27.3%及20.0%。从鉴定的199个SSR中,选取含有SSR的合适区段设计了22对引物,并通过18个剑麻斑马纹病菌菌株的基因组DNA进行了评价,结果只有其中9对引物能从剑麻斑马纹病菌基因组DNA中有效扩增,其扩增移效率为40.9%。由此表明,利用此方法来开发剑麻斑马纹病菌的分子标记具有可行性,只是存在一个转移效率问题。

Resistance identification of bivalent fungi-resistant genes transformed soybean to Phytophthora sojae

Soybean is one of the most important sources of edible oil and proteins in the world. However, it suffers from many kinds of fungal diseases which is a major limiting factor in soybean production. The fungal disease can be effectively controlled by breeding plant cultivars with genetic transformation. In this study, the resistance to Phytophthora sojae of five bivalent transgenic soybean lines was identified using the hypocotyls inoculation technique. The lines were the T2 of the transgenic soybean which were transformed with kidney bean chitinase gene and barley ribosome inactivating protein gene, and were positive by Southern Blot analysis. The resistance difference was studied through comparing the death percentage of transgenic soybean with the control. The results showed that four lines were more resistant to P sojae, whereas other one had no significant difference in comparison with the control. These transgenic soybean lines with enhanced resistance to P sojae will be useful in soybean resistance breeding.

烟草酚酸和有机酸对黑胫病菌生长的影响

【目的】探讨烟草根系分泌物中酚酸和有机酸对烟草黑胫病菌生长的影响,为明确根系分泌物组分与黑胫病菌互作机制提供理论依据。【方法】采用外源添加方法,比较了不同酚酸和有机酸对黑胫病菌菌丝生长、孢子囊产生量及游动孢子的影响。【结果】不同酚酸物质在低浓度时促进了黑胫病菌菌丝生长和孢子囊产生量,但随着浓度增加促进作用减小甚至转变为抑制作用;除高浓度香草酸和香豆酸直接抑制游动孢子释放,其他酚酸各浓度均表现为促进作用。除添加0.05 g/L苹果酸表现为促进作用外,其他有机酸对黑胫病菌菌丝生长具表现为抑制作用;苹果酸、乳酸和富马酸对孢子囊产生和游动孢子释放表现为低浓度促进高浓度抑制,而草酸、酒石酸和丁二酸在各浓度下均表现为抑制作用;另外,乙酸基本完全抑制孢子囊产生和游动孢子释放。【结论】不同酚酸和有机酸对黑胫病生长的影响存在差异,其促进或抑制作用取决于酚酸和有机酸种类及浓度。

土壤中黑胫病菌荧光定量PCR快速检测体系的建立及初步应用

为建立土壤中黑胫病菌的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR快速检测方法,依据疫霉菌特异性par A1基因序列差异位点,设计1对特异性引物。通过构建含有目的片段的重组质粒,建立标准曲线,以SYBR GreenⅠ荧光染料法对烟草黑胫病菌进行荧光定量PCR检测,检测灵敏度达1×102个/g土壤,建立了基于SYBR GreenⅠ荧光染料法的荧光定量PCR的快速定量检测体系,并对云南、四川烟草主要栽培区土壤进行检测。表明该体系可以对烟草不同时期的田间土壤黑胫病菌的数量进行动态监测,可用于烟草黑胫病的预测和防治。

5种杀菌剂对3种烟草疫霉拮抗菌的抑菌试验

杀菌剂是影响生防菌应用的重要因素,抗药性实验是评价生防菌耐受杀菌剂作用的基础工作。本研究采用牛津杯法和平板菌落计数法,测定5种常用杀菌剂对烟草疫霉菌有拮抗作用的地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌3个菌株的抑菌作用。结果表明:(1)35%甲霜灵、80%代森锰锌、722 g/L霜霉威盐酸盐对3种拮抗菌无抑制作用,表明可以和供试的3种拮抗菌混配使用;(2)58%甲霜·锰锌和68%精甲霜·锰锌对3种细菌有抑制作用,甲霜·锰锌对3种细菌的EC50值平均为221.9μg/m L,精甲霜·锰锌对3种拮抗菌的EC50值平均为195.5μg/m L,表明不能和供试的3种拮抗菌混配使用。