Influence of different inoculation methods on the evaluation of the resistance to rice sheath blight(Rhizoctonia solani Kuhn)

To establish a standard system for geneticstudies on sheath blight resistance, a field testwas conducted at the experimental farm ofYangzhou University to compare several pro-cedures for inoculating rice plants with R.solani Kuhn (RH9). The varieties used wereJasmine 85, Teqing (resistant or moderatelyresistant), and Lemont (susceptible). They

Construction and Application of a High-throughput Method for Identifying Maize Resistance to Aspergillus flavus in the Field

In order to establish a fast and effective high-throughput method for identifying maize resistance to Aspergillus flavus infection in the field,5 conidial concentrations and 3 inoculation methods were compared and optimized. A correlation model between disease levels and aflatoxin B1 accumulation was established. The results showed that inoculating maize inbred lines with the optimal conidial concentration of 1.0×10^6 c/mL could accurately show the different resistance levels of maize to A.flavus infection,and the spiral quantitative inoculation technique could effectively avoid the defect of calculation error caused by commonly used methods. The positive correlation model of resistance level and aflatoxin B1 accumulation could effectively predict the capability of maize being resistant to A.flavus. 8 resistant and 9 medium resistant maize inbred lines of the RIL population were identified.The spiral quantitative identification method realized the high-throughput identification of maize inbred lines resistant to A.flavus infection in the field,and the results have shown high accuracy,stability and repeatability.

马铃薯后代材料晚疫病的抗性鉴定

为筛选出农艺性状优良且抗病性较好的后代材料,本试验对60份马铃薯“青薯9号”与“大西洋”杂交后代材料的离体叶片进行4种不同菌株的接种,分析4种菌株接种后的病斑面积及抗性等级,并利用LAMP技术对接种不同天数的离体叶片进行扩增检测。结果表明在60份后代材料中,高抗有6份,抗性有11份,中抗有17份,感病有24份,高感有2份。表现抗病的后代材料一共有34份,均具有广谱性,其中18份后代材料对4种菌株均产生抗病,16份后代材料对3种或2种菌株产生抗病,对4种菌株表现抗性的后代材料的广谱性比对3种或2种菌株表现抗性的后代材料高。利用LAMP技术检测接种1~5 d内及5 d后离体叶片的晚疫病菌,其扩增检测结果一致,均呈蓝色,为阳性。综上,本研究筛选的马铃薯后代材料可为抗病育种提供品种参考,LAMP技术能够对马铃薯晚疫病达到早期鉴定及预警的目的,为马铃薯晚疫病早期防治提供技术支持。

田间水稻纹枯病抗性鉴定体系的确立与完善

建立科学的田间水稻纹枯病抗性鉴定体系,是开展水稻抗纹枯病遗传研究的关键环节之一。描述了田间水稻纹枯病发生、发展的特点,强调只有在充分认识并依据这些特点所建立的抗性鉴定体系才具科学性。分析认为Rush的总体抗性鉴定体系最为合理。为适应抗性QTL精细定位的精度要求,在Rush的总体思想体系基础上,提出并试行了以“最高病斑达到的叶鞘位”为基础的新的病情评定标准,以进一步完善水稻纹枯病抗性鉴定体系。

辣椒疫病三种接种方法的比较

通过比较离体叶片接种、切茎接种、游动孢子液灌根接种等 3种不同接种方法对 8个辣椒品种 (品系 )的影响 ,发现这 3种方法均能用于鉴定辣椒对辣椒疫霉菌的抗性。其中离体叶片接种法是从田间采集叶片进行室内鉴定 ,能够在短时间内检测多个品种 ,并且对植株的生长无明显影响 ,最适合对种质资源稀少的品种进行抗疫病鉴定 ;切茎接种法操作简单 ,可以测量病斑的长度 ,反映病斑的扩展速度 ,适宜对抗性进行量化 ;游动孢子液灌根接种法基本上模拟田间病害的发生过程 ,最能反映品种的真实抗性 ,但工作量大 ,操作较复杂。研究者可以根据自己的研究目的 ,采取适当的接种方法对辣椒品种进行抗疫病鉴定。

辣椒疫病抗性离体叶鉴定法研究

通过比较疫病抗性不同的2个辣椒Capsicum annuum L．品种的离体叶接种浓度、发病温光条件及叶位对抗性鉴定结果的影响，确定了辣椒疫病抗性离体叶鉴定技术，即在辣椒初花期至始果期以自生长点倒数的第4～6展开叶作为测定叶，用0．1 mL游动孢子2×10^4～3×10^4mL^-1接种，在25℃、光照（3000 lx）12h／d的发病条件下，可获得理想的抗性鉴定效果．利用该鉴定法对38份辣椒材料进行了抗性鉴定，并与喷雾法和灌根法的鉴定结果进行了比较，结果表明离体叶法能有效地区分出辣椒品种对疫病的抗性．根据抗级划分，离体叶法的鉴定结果与两者的吻合率分别为76．3％和68．4％．

棉花抗黄萎病鉴定与评价标准的商榷

【目的】通过系统研究黄萎病抗病鉴定的关键技术和评价标准,解决现有棉花品种黄萎病抗性评价标准中存在的问题,建立新的田间棉花黄萎病分级标准和评价标准。【方法】以14个2014年国家主推棉花品种为试验材料,从接种量、可靠样本量、病情分级和评价方法 4个方面系统研究黄萎病抗性鉴定的关键技术和评价标准。【结果】确定了小区接种和行沟接种的最佳接菌量分别为60 g·m-2和10 g·m-1,小区调查最低样本量为50株;制定了新的分级标准为0级(0%)、1级(1%~33%)、2级(34%~66%)、3级(67%~99%)和4级(100%)。连续2年利用相对病程发病面积和发病高峰期的相对病情指数2种评价方法判定品种抗病性,前者作为抗病性评价的依据更为科学可靠,一致率达到100%。【结论】本试验为完善抗病鉴定技术操作规程,规范抗性评价方法,促进棉花抗病品种的选育、审定和推广提供了科学依据。

一种基于菌丝悬浮液的核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)接种方法的建立

通过分析核盘菌(Sclerotiniasclerotiorum)菌丝培养时间、菌丝体浓度以及接种后的保湿时间等因子对接种后油菜植株发病的影响,建立了一套有效的基于菌丝悬浮液的核盘菌喷雾接种方法体系.主要步骤包括:从在平板活化3 d后核盘菌菌落边缘打取菌碟(Φ6 mm),按10块?100 mL-1加入液体培养基中,25℃、200 r?min-1下振荡培养4 d,用匀浆机匀浆30 s制成菌丝悬浮液,终浓度调至600 nm波长下吸光度值为1.0～2.0,用空压机喷雾接种油菜植株,保湿48 h.该方法适用于油菜苗期对菌核病的抗病性评价,还可用于立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)的接种研究.

西瓜疫病苗期灌根接种抗性鉴定方法的研究

以不同抗性西瓜品种为材料，用游动孢子液灌根接种法进行西瓜疫病苗期抗性研究。结果表明：采用游动孢子液灌根接种法进行西瓜疫病苗期接种适宜浓度是1×10^6个孢子／mL；适宜的接种苗龄为2片真叶期；调查和鉴定苗期抗病性的最适时期为接种后的12-15d。

快速鉴定瓜类疫病抗性方法的建立及黄瓜种质资源鉴定

【目的】为方便研究瓜类疫病,快速筛选抗疫病的瓜类材料,建立快速安全有效的瓜类疫病抗性鉴定体系。【方法】通过灌根、喷雾、浸根、菌块离体接种等4种接种方法对黄瓜抗病材料和感病材料幼苗进行接种,通过比较发病率、发病时间及操作程序等确定最简便有效的鉴定方法。【结果】4种接种方法均能鉴定黄瓜疫病抗感情况,但是鉴定效果差异显著。浸根法、喷雾法、灌根法接种合适浓度均为10~2个孢子/mL,操作复杂,接种效率低。菌块离体接种方法利用2 mm直径菌块直接接种于离体子叶背面,放置于有润湿滤纸的培养皿中,保湿24 h即可观察表型,通过计算病斑大小快速鉴定瓜类材料的抗性;利用该方法对40份不同抗性的黄瓜材料进行鉴定,发现栽培黄瓜抗疫病材料极少,只有PE40、PE119、PE120、PE185等4份材料具有抗性,90%的材料均为感病或高感。【结论】菌块子叶离体接种法是瓜类疫病鉴定的快捷有效方法,该方法无需诱孢,能够一次性鉴定数百份材料,且能够保存感病材料或中间材料,大大提高鉴定效率,为瓜类疫病抗性育种奠定基础。

辣椒品种抗疫病评价及不同砧木嫁接效果

以9个辣椒接穗品种和3个辣椒砧木品种为试材,采用苗期盆栽鉴测法,评价了不同辣椒品种及不同辣椒砧木对辣椒疫病的抗性效果。结果表明:供试辣椒品种中"BLD"、"DYQQ""PRMND"3个品种对辣椒疫病表现高抗,"DNP56"和"BT33"2个品种表现中抗,"科星六号"、"豫园新16-A"、"新机遇"、"绿冠"4个品种表现高感;供试的3个砧木"RS1"、"RS2"和"RS3"与接穗品种"新机遇"之间亲和力比较好,3个嫁接苗的成活率分别达到86.6%、83.3%和87.6%,3种砧木嫁接苗在苗期和移栽后的生育指标与接穗品种的自根苗没有显著差异,同时3种砧木嫁接苗均对辣椒疫病表现中抗以上抗性。

湖北板栗品种对栗疫病抗性的鉴定与筛选

分别于夏季和冬季2个时期,在31份湖北板栗(Castanea mollissima)品种(类型)资源的离体枝条上接种栗疫病病菌菌株C(Cryphonectria parasitaca),观察各品种(类型)资源感染栗疫病的潜伏时期,测定接种20 d时的发病率和病斑面积,综合评价各品种(类型)对栗疫病的抗性,筛选出抗性品种(类型)。综合夏季和冬季2个时期试验,结果表明,红毛早、中迟栗、鄂栗1号、罗田浅刺、红光油栗5个品种(类型)为高抗栗疫病材料,宣化红、罗田乌壳栗、腰子栗、大果中迟栗、金优3号、母圃1号、京山浅刺、青毛早8个品种(类型)为抗性材料;夏季接种栗疫病病原菌的板栗品种枝条对栗疫病抗性程度强于冬季。

棉铃疫病人工接种方法优化及应用

【目的】棉铃疫病是严重危害棉花生产的铃部病害。本研究旨在优化棉铃疫菌(苎麻疫霉,Phytophthora boehmeriae)的人工接种方法并有效应用。【方法】在室内保湿培养条件下,比较了棉株不同部位健康成铃自身携带棉铃疫菌的情况;利用贴接棉铃疫菌菌盘的方法,比较了棉铃表面消毒和不消毒、有伤和无伤接种对棉铃疫病发病情况的影响;建立棉铃疫病人工接种方法并应用于防治棉铃疫病化学药剂筛选、棉花品种抗病性鉴定和棉铃疫菌致病力检测。【结果】田间棉株下部第1~3果枝铃的棉铃疫病发病率显著高于中部第4~6果枝铃、中部第7~9果枝铃和上部第10~12果枝铃;75%(体积分数,下同)酒精浸泡棉铃2 min能够有效杀死棉铃表面携带的棉铃疫菌和其他真菌等杂菌;有伤接种棉铃疫菌,棉铃疫病发病快且均匀。建立了棉铃疫病快速人工接种方法:选取棉株中部第4~9果枝上的健康带柄成铃,去掉苞叶,用75%酒精浸泡消毒2 min,在棉铃中上部铃缝处针刺接种棉铃疫菌,25℃保湿培养3~7 d即可完全发病。应用优化的棉铃疫病人工接种方法筛选、鉴定结果表明,12种化学杀卵菌剂中,对棉铃疫病防效理想的药剂为25%(质量分数,下同)甲霜·霜霉威可湿性粉剂、70%丙森锌可湿性粉剂和52.5%噁酮·霜脲氰水分散粒剂;16个棉花品种对棉铃疫病存在抗性差异;10个棉铃疫菌菌株中JP18-4的致病力最强,JP15-2对棉铃的致病力最弱。【结论】本研究优化建立了棉铃疫病人工接种方法。该方法在7 d内即可完成棉铃疫病相关试验的评价,为加快棉铃疫病防治药剂筛选、棉花品种抗病性鉴定和棉铃疫菌致病力检测提供可行的技术。

茄子黄萎病苗期抗性鉴定技术的优化及抗源筛选

【目的】建立快速、有效的茄子黄萎病苗期抗性鉴定技术,并对茄子资源进行苗期接种鉴定,为抗病育种提供理论依据。【方法】采用温室人工接种,分别对茄子黄萎病苗期接种鉴定的接种菌株、浓度、方法、接种苗龄及接种时间进行系统筛选与比较,并应用筛选出的最佳技术对50份不同来源的茄子资源进行抗黄萎病鉴定与评价。【结果】25株强致病力的黄萎病菌株中有7株产孢效率高,从中选取4种不同培养性状的菌株用于接种,最佳接种浓度为10^(6)个孢子/mL及以上,其中菌株“2015-61”致病力最强,接种浓度10^(5)个孢子/mL的致病结果与其他菌株最佳浓度的接种结果相当,提高了试验整体效率;接种方法以无底钵伤根法为最佳,最适接种苗龄为3~4片真叶期,浸根时间为10 min。利用此抗性鉴定方法从50份不同来源茄子资源中筛选出免疫品种2份,中抗品种3份,耐病品种12份。该优化接种技术的发病情况与田间病圃结果基本一致,较准确地反映了茄子资源对黄萎病的真实抗性。【结论】茄子黄萎病苗期最佳接种技术的确立以及抗黄萎病资源的筛选为抗病育种提供依据。

冬瓜和节瓜疫病的离体叶片接种方法研究

【目的】评估离体叶片接种法对冬瓜疫病抗性鉴定的可行性,建立一种快速高效的冬瓜疫病抗性鉴定方法,并筛选抗疫病的冬瓜和节瓜品种,为培育及利用抗病品种提供参考。【方法】以注射灌根接种法为对照,采用离体叶片接种法对9份冬瓜品种进行抗病性鉴定和比较,评估离体叶片接种法的可行性;并采用所建立的离体叶片接种法对23份冬瓜品种和18份节瓜品种进行抗病性鉴定,从中筛选抗、耐疫病的冬瓜和节瓜品种。【结果】离体叶片接种后,发病症状主要表现为叶片呈现暗绿色水渍状病斑,后期变成黑色病斑,有的会长出白色霉层。9份供试冬瓜品种中,铁柱168、B184和P33等7份冬瓜品种分别采用两种方法进行抗感性评价,反应类型结果完全一致。两种鉴定方法对冬瓜疫病的抗性鉴定结果一致性高达77.78%:注射灌根接种法发病率的平均值是54.6%,病情指数的平均值是29.6;离体叶片接种法发病率的平均值是60.2%,病情指数的平均值是31.5。对两种接种法的发病率和病情指数进行相关性分析,结果表明注射灌根接种法和离体叶片接种法的相关性达极显著水平(P<0.01),两种接种方法的发病率与病情指数相关系数分别为0.953和0.993。节瓜普遍比冬瓜更抗疫病,初步筛选出3份高抗冬瓜品种,分别是连环杂交大冬瓜、铁心999黑皮冬瓜和黑娃四号小冬瓜,病情指数分别为5.9、9.2和1.7;5份高抗节瓜品种,分别是佳庆338节瓜、玲珑节瓜、翠秀节瓜、新粤农8号和5号黑毛节瓜,病情指数分别为4.2、5.0、5.8、6.7和7.5。【结论】与注射灌根法相比,离体叶片接种法具有发病症状明显、操作方便、速度快、不伤害植物等优点,离体叶片接种法可作为冬瓜品种疫病抗病性鉴定的辅助手段,用离体叶片接种法筛选出3份高抗冬瓜品种和5份高抗节瓜品种可作为培育及利用抗病品种的资源。

辣椒抗疫病鉴定方法初探

为了快速简便有效地进行辣椒资源抗疫病筛选,对游动孢子灌根接种法、疫病毒素离体叶片接种法、毒素灌根接种法进行了比较研究。结果表明:离体叶片毒素接种法鉴定结果与游动孢子灌根接种法有极显著的正相关,可以作为辣椒抗疫病鉴定的有效方法,对大批材料进行快速接种鉴定。

柑橘轮斑病抗性鉴定方法的建立

【目的】探究柑橘轮斑病最适宜接种条件,建立一种快速鉴定柑橘轮斑病抗性的方法。【方法】以柑橘轮斑病菌为接种体,运用离体叶片接种法,在室内不同温度下对离体柠檬叶片的不同部位进行接种,探讨柑橘轮斑病的最适宜接种条件。随后采用前期确立的接种体系对27个主栽柑橘品种进行轮斑病抗性评价。【结果】针刺接种易发病,最适宜的接种温度为10℃,最适宜接种部位为叶片背部。27个柑橘品种中沙田柚为免疫品种,091无核沃柑最易感病。【结论】研究建立了叶片背面针刺、10℃条件下保湿培养28 d的抗性鉴定体系。并利用此技术体系鉴定出柚类抗病力最强,杂柑类相对最感病,而橙类、柑类与橘类抗性处于柚类与杂柑类中间。

梨火疫病抗性鉴定方法的比较及抗病砧木种质的筛选

以杜梨容器苗为试材,采用浸渍法、针刺法和喷雾法3种人工接种方法,通过调查发病时间、发病率、病情指数,比较不同接种方法下杜梨接种效果,筛选梨火疫病菌接种的适宜方法,并优化最佳接种方法的接种浓度,以期筛选梨火疫病准确快速的鉴定方法和了解不同砧木种质对梨火疫病的抗性水平。结果表明:3种接种方法的发病率和病情指数均表现为幼苗浸渍法>幼苗喷雾法>幼苗针刺法,调查感抗情况的最短天数依次为7~9、12~33、33~38 d。幼苗浸渍法接种发病速率最快、均匀度好、操作简便,能有效缩短接种时间,提高接种效率。菌液OD600值为1.2时,发病率和病情指数随时间变化比较稳定,波动幅度相对较小,可作为幼苗浸渍法较适宜的接种浓度。在此基础上对收集的5份不同来源地的杜梨种质进行苗期火疫病接种鉴定,结果表明5份种质均表现为感病或高感,抗病杜梨砧木资源仍需要进一步挖掘。

接种方法和接种时期对不同玉米杂交组合穗腐病抗性鉴定的影响

为研究不同接种方法和接种时期对玉米拟轮枝镰孢穗腐病(Fusariumverticillioides ear rot,FER)抗性鉴定的影响,选取高抗×高抗、高抗×高感、高感×高感组合各3份,2022年在北京顺义和河南新乡分别用针刺果穗注射法与双牙签法在玉米吐丝后5、10、15d进行接种。结果表明,吐丝后5、10和15d接种,针刺果穗注射法分别比双牙签法的平均病情严重度高6.3%、3.9%和1.8%;吐丝后5d接种,不同组合采用针刺果穗注射法接种未达到显著差异,采用双牙签法达到极显著差异(P<0.01);吐丝后10d和15d接种,不同组合使用针刺果穗注射法均达到极显著(P<0.01)差异,牙签法均未达到显著差异。采用双牙签法接种时,建议吐丝后5d接种;采用针刺果穗注射法接种时,建议吐丝后10~15d接种。

水稻抗纹枯病遗传育种研究进展

纹枯病是世界性水稻病害,在中国南方部分水稻种植区已成为水稻第一大病害.但对水稻抗纹枯病遗传育种研究却进展缓慢.抗性鉴定方法、抗病基因定位和抗性资源发掘是抗病遗传育种研究中的最重要内容,亦是抗病品种选育的基础.本文综述了近年提出的水稻纹枯病抗性鉴定方法,对抗病基因QTL进行物理图谱整合,分析了抗病QTL的定位概况,同时对抗源发掘和抗病育种方面的新进展进行了归纳与讨论,最后提出下一步研究方向,以期为加速水稻抗纹枯病遗传育种进程提供帮助.