Resistance risk and molecular mechanism associated with resistance to picoxystrobin in Colletotrichum truncatum and Colletotrichum gloeosporioides

Anthracnose,caused by Colletotrichum truncatum and C.gloeosporioides,is amongst the most serious diseases of soybean in China.Picoxystrobin,a quinone outside inhibitor fungicide,is commonly used for the control of anthracnose.Its resistance risk and mechanism in C.truncatum and C.gloeosporioides are unclear.In this study,the sensitivities of 128 C.truncatum and 121 C.gloeosporioides isolates to picoxystrobin were investigated,and unimodal distributions were observed with average EC_(50)values of 0.7740 and 1.1561μg mL^(-1),respectively.Eleven picoxystrobin-resistant mutants of C.truncatum and six mutants of C.gloeosporioides were acquired,with EC_(50)values varying from 5.40-152.96 and 13.53-28.30μg mL^(-1),respectively.Compared to the parental isolates,mutants showed similar or higher relative fitness in conidial production and germination,and pathogenicity.Collectively,the resistance risk of C.truncatum and C.gloeosporioides to picoxystrobin is moderate to high.There was positive cross-resistance between picoxystrobin and pyraclostrobin,but not between picoxystrobin and fluazinam,difenoconazole,or propiconazole.The G143S mutation in Cyt b protein was detected in seven high-resistant mutants of C.truncatum(RF>100),and G137R occurred in four moderate-resistant mutants(RF<_(50)).Contrastingly,there were no point mutations in Cyt b of any C.gloeosporioides mutants.Molecular docking confirmed that two mutations conferred different resistance levels to picoxystrobin.Under greenhouse trials,picoxystrobin did not control mutants with the G143S mutation,those bearing G137R or no point mutation were somewhat controlled,but at a lower level compared to wild-type isolates.These results showed that integrated management strategies should be implemented to preserve fungicide effectiveness.

香蕉中啶氧菌酯残留行为和膳食风险评估

香蕉生产中普遍使用啶氧菌酯,这可能对消费者健康造成潜在风险。为了评估膳食风险,我们拟研究香蕉中啶氧菌酯残留行为,在海南和云南两地分别开展香蕉中啶氧菌酯消解动态和最终残留试验,于施药后不同时间采样检测样品中啶氧菌酯残留,并计算膳食风险商。结果表明,在添加浓度0.02~1.0 mg/kg范围内,香蕉中啶氧菌酯的平均回收率为101.4%~109.2%,相对标准偏差为2.1%~4.0%,最小检出量为0.01 ng,最低检出浓度为0.02 mg/kg。香蕉中啶氧菌酯降解符合一级动力学方程,降解半衰期为8.7~13.8 d,最终残留量的最大值为0.045 mg/kg,施药60 d后香蕉中啶氧菌酯降解率大于99.62%。我国普通成人啶氧菌酯的估算每日摄入量估计为0.35 mg,风险商(RQ)为0.06,远远小于1。说明在该试验条件下,香蕉中啶氧菌酯的残留水平不会对普通成人造成膳食风险。

啶氧菌酯在香蕉及土壤中的残留分析方法研究

为研究啶氧菌酯在香蕉及土壤中的残留分析方法,采用外标法定量,试验样品经乙腈提取,固相萃取净化后经气相色谱仪-微电子捕获检测器检测,在0.02~0.10 mg/kg和0.01~0.10 mg/kg添加水平范围内,香蕉和土壤中啶氧菌酯的回收率分别为101.4%~109.2%和93.7%~105.0%,相对标准偏差(RSD)分别为2.5%~4.0%和2.8%~8.4%,最小检出量均为0.01 ng,最低检出浓度分别为0.02 mg/kg和0.01 mg/kg。该分析方法灵敏度、准确度、精密度均满足农药残留分析要求,可广泛用于啶氧菌酯残留检测。

意大利蜜蜂不同日龄工蜂对啶氧菌酯胁迫的生化和生理响应

【目的】啶氧菌酯是蜜蜂常接触到的杀菌剂,其对蜜蜂工蜂健康的影响常被忽视。研究明确啶氧菌酯胁迫对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica不同日龄工蜂的影响,为蜜蜂健康养殖和授粉安全提供理论依据。【方法】利用啶氧菌酯田间推荐浓度(113, 150, 225和281 mg/L)分别连续暴露处理意大利蜜蜂1, 8和21日龄工蜂7 d,测定各浓度处理组不同日龄工蜂存活率,测定保护酶超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和过氧化氢酶(catalase, CAT)及解毒酶羧酸酯酶(carboxylesterase, CarE),谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase, GST)和细胞色素P450单加氧酶(cytochrome P450 monooxygenase, CYP450)活性;利用RT-qPCR检测营养相关基因胰岛素样肽(insulin-like peptides, ILP)基因(ILP1和ILP2)和卵黄原蛋白(Vitellogenin)基因以及免疫相关基因蜂蛾抗菌肽(Abaecin)基因、蜜蜂抗菌肽(Apidaecin)基因、防卫素(Defensin1)基因和膜翅抗菌肽(Hymenoptaecin)基因的表达量。【结果】113, 150, 225和281 mg/L啶氧菌酯连续处理与对照组比可显著降低意大利蜜蜂1和21日龄工蜂的存活率。113, 150和225 mg/L啶氧菌酯处理使1和8日龄工蜂CAT和CYP450活性比对照组增加,使SOD, CarE和GST活性随处理浓度的增加而下降,比对照组诱导21日龄工蜂CAT, SOD和GST活性抑制CarE活性。啶氧菌酯各处理组1和21日龄工蜂ILP1和ILP2表达量比对照组均下调,而1和8日龄工蜂的Vitellogenin表达量均高于对照组。与对照组相比,啶氧菌酯可显著提高1日龄工蜂Apidaecin和Hymenoptaecin的表达量,但抑制8日龄工蜂Apidaecin和Hymenoptaecin的表达量,同时225和281 mg/L啶氧菌酯可显著抑制21日龄工蜂Abaecin,Apidaecin,Defensin1和Hymenoptaecin的表达量。【结论】田间推荐使用浓度的啶氧菌酯对意大利蜜蜂不同日龄工蜂具有显著的毒性,对工蜂的存活、酶活性、营养代谢和免疫能力产生胁迫,增加工蜂的生存压力,进而危害蜂群的健康。

30%丙硫菌唑·啶氧菌酯悬浮剂的高效液相色谱分析

对30%丙硫菌唑·啶氧菌酯悬浮剂测定方法进行研究。采用高效液相色谱法分析丙硫菌唑·啶氧菌酯复配制剂,使用C 18反相柱和紫外可变波长检测器,以乙腈-水为流动相,用外标法对有效成分进行分析和定量。高效液谱分析丙硫菌唑·啶氧菌酯测定的标准偏差分别为0.08和0.10,变异系数分别为0.39%和0.95%,平均回收率分别为99.4%和99.2%。方法具有简便、快捷、精密度和准确度高的特点。

30%啶氧菌酯·戊唑醇悬浮剂分析方法研究

文章中,建立了液相色谱法同柱分析30%啶氧菌酯、戊唑醇悬浮剂的含量的分析方法,以甲醇和水为流动相,使用Kromasil C_(18)/5μm为填充料的不锈钢柱,检测波长为220 nm。结果表明,啶氧菌酯、戊唑醇的标准曲线线性相关系数分别为0.99997和0.99992,标准偏差分别为0.0001和0.0002,变异系数分别为0.14%和0.11%,平均回收率分别为99.96%和100.01%。

超高效液相色谱-串联质谱法分析啶氧菌酯在葡萄果实和园地土壤中的消解动态

【目的】评价啶氧菌酯在葡萄上使用的安全性。【方法】采用超高效液相色谱-串联质谱法建立了葡萄果实和园地土壤中啶氧菌酯的残留检测方法,研究了啶氧菌酯在葡萄果实和园地土壤中的消解动态。样品中啶氧菌酯经乙腈提取,HLB小柱净化,超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测。【结果】啶氧菌酯在葡萄果实和园地土壤中的最低检测质量分数均为0.01 mg·kg^(-1),最小检出量均为4.0×10-13g。当添加质量分数为0.01~5.0 mg·kg-1时,添加回收率为85%~100%,相对标准偏差为2.1%~4.4%。啶氧菌酯在葡萄果实和园地土壤中的降解动态曲线符合一级动力学方程,半衰期分别为5.9~12.6 d和2.2~10.7 d。【结论】该方法能用于检测啶氧菌酯在葡萄果实和园地土壤中的残留。啶氧菌酯在葡萄果实和园地土壤中降解较快。

两种新杀菌剂对番茄灰霉病的作用方式及田间防效

采用离体叶片法测定了2种新杀菌剂42.8%氟吡菌酰胺·肟菌酯悬浮剂(SC)和22.5%啶氧菌酯SC对番茄灰霉病的作用方式及田间防效。结果表明:42.8%氟吡菌酰胺·肟菌酯SC和22.5%啶氧菌酯SC对番茄灰霉病保护作用的EC50值分别为4.04μg·mL^(-1)和10.79μg·mL^(-1),治疗作用的EC50值分别为26.30μg·mL^(-1)和45.93μg·mL^(-1)。田间试验结果表明,两种新药剂在推荐剂量下对番茄灰霉病防效可达80%以上,可用于番茄灰霉病的防治。

流动注射化学发光法测定啶氧菌酯

基于啶氧菌酯对鲁米诺-高锰酸钾化学发光体系的增敏作用,建立流动注射化学发光分析法测定啶氧菌酯的方法,确定测定的最佳条件。测定啶氧菌酯的线性范围为1～100 mg/L,检出限(3σ)为5 ng/mL,相对标准偏差(n=11)为1.8%。用于水样中啶氧菌酯的测定,结果满意。

西瓜和土壤中啶氧菌酯残留分析方法

本文建立了西瓜和土壤中啶氧菌酯残留检测方法。西瓜样品用乙腈提取,离心后用气相色谱ECD检测器检测。在添加0.05-1.0mg/kg水平时,啶氧菌酯在瓜瓤、全瓜和土壤中的添加回收率分别为89.3%～92.9%,91.2%～94.9%,85.4%～90.7%;RSD分别为6.6%-10.6%,7.1%-9.3%,7.3%-11.3%,检出限均为0.01mg/kg。该方法灵敏度高,检测限低,重现性好,完全能够满足西瓜和土壤中杀菌剂啶氧菌酯残留的检测。

新型杀菌剂啶氧菌酯对香蕉叶斑病的防治效果

【目的】香蕉叶斑病是香蕉产业的重要病害,化学防治仍然是当前最为有效的防治手段。于2015—2016年连续2年开展香蕉叶斑病的田间化学防治试验,为生产上推广应用新型杀菌剂啶氧菌酯提供依据。【方法】试验设22.5%啶氧菌酯悬浮剂125、150和187.5 mg·kg^(-1),对照药剂250 g·L-1吡唑醚菌酯乳油125 mg·kg^(-1),以及空白对照共5个处理,3次药后第12或13天调查正常叶数、病叶数及病级,计算平均病指及平均防效。【结果】22.5%啶氧菌酯悬浮剂(有效成分用量125、150和187.5 mg·kg^(-1))2015年的防治效果分别为64.70%、68.16%和71.29%,2016年防治效果分别为68.44%、72.36%和76.29%。此外,在试验期间香蕉嫩叶未见药害现象,叶片生长均正常。【结论】22.5%啶氧菌酯悬浮剂是防治香蕉叶斑病的优良药剂,对香蕉比较安全,值得在香蕉产区推广应用。

土壤和水中啶氧菌酯的环境行为研究

通过对啶氧菌酯在三种典型土壤(潮土、褐土和红壤土)和水中挥发性、光降解和淋溶性的研究,明确了其环境行为。啶氧菌酯在三种土壤表面和水中,24 h吸收液中未检测到挥发的啶氧菌酯;啶氧菌酯在三种土壤表面的光降解半衰期分别为潮土26.70h、褐土32.80 h和红壤土12.80 h,在水中的光解半衰期为3.20 h;啶氧菌酯在三种土壤中的迁移率分别为潮土0.083、褐土0.08、红壤土0.25。结果表明:啶氧菌酯在三种土壤和水中均难挥发,在土壤表面难光降解,而在水表面较易光降解;在潮土和褐土中移动性等级为不移动,而在红壤中移动性等级为不易移动。综上认为,啶氧菌酯在三种土壤中稳定性高、迁移率低,长期高频次施容易导致土壤中啶氧菌酯累积,而在水中易于降解,不容易累积。

辣椒炭疽病菌抗啶氧菌酯突变体渗透压敏感性及交互抗性

为了探讨辣椒炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides敏感菌株与抗啶氧菌酯突变体对渗透压敏感性的差异,室内诱导获得了C.gloeosporioides对啶氧菌酯的抗性突变体,在此基础上,对其抗感菌株渗透压敏感性及交互抗性进行了研究。结果表明,抗感菌株在供试葡萄糖浓度下均可生长,相比无糖培养基,在含有葡萄糖的培养基上菌落直径显著增加;随着培养基中NaCl浓度的升高,抗感菌株菌丝生长均受到抑制,且敏感菌株与不同抗性水平抗性突变体对高浓度NaCl渗透压均敏感,但渗透压敏感性没有显著差异。啶氧菌酯与嘧菌酯、醚菌酯、多菌灵、咪鲜胺的交互抗性测定结果显示,啶氧菌酯与同属甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的嘧菌酯、醚菌酯之间存在正交互抗性,与多菌灵、咪鲜胺之间均无交互抗性产生。该研究结果可为指导生产中合理用药提供理论依据。

啶氧菌酯原药中主要杂质的制备、鉴定和定量分析

建立了啶氧菌酯杂质制备和分析的方法。采用酯交换方法合成杂质，并通过柱层析法提纯，采用液相-质谱联用和液相色谱方法对啶氧菌酯杂质进行定性和定量分析。制备了啶氧菌酯原药中的主要杂质标准品，含量为97.0%。建立了啶氧菌酯主要杂质的定量分析方法，添加回收率为99.13%。当杂质的浓度为8.2~164.9 mg/L时，方法的线性相关系数为0.9975。本方法建立了啶氧菌酯原药中主要杂质的制备、定性和定量的分析方法，为啶氧菌酯原药质量分析和控制提供了依据。

250g/L啶氧菌酯悬浮剂防治葡萄霜霉病田间药效试验

为了寻找防治葡萄霜霉病的高效、低毒后备药剂,进行了田间药效试验。试验结果表明,250 g/L啶氧菌酯悬浮剂1 500～2 500倍,在葡萄霜霉病发病初期用药,间隔7～10 d施药1次,连续施药2～3次,能有效控制葡萄霜霉病的危害,是一种有较好发展前景的药剂。

广谱杀菌剂啶氧菌酯

介绍了防治杀菌剂啶氧菌酯的理化性质、毒性、专利、作用机理、生物活性、合成方法等。

啶氧菌酯降解菌的分离鉴定及其降解特性

通过富集培养法筛选分离到1株能以啶氧菌酯为唯一碳源的降解菌株PID-1,采用形态学、生理生化方法,并结合16S r DNA序列系统发育分析,将菌株PID-1初步鉴定为沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)。菌株PID-1降解啶氧菌酯的最佳条件为p H 7和35℃。在该降解条件下,培养5 d,菌株PID-1对100mg·L-1啶氧菌酯的降解率可达83.54%。将啶氧菌酯经PID-1降解后的物质经质谱扫描,通过谱库检索,发现其降解中间产物包括1-(1,5-dimethylhexyl-)-4-methyl-benzene、2,5-bis(1,1-dimethylethyl)-phenol、butyl 2-methyoxyethyl ester、bis(tert-butyldimethylsilyl)ester、1-(3-n-propoxyphenyl)-2-propanone oxime和2-nitro-4-(trifluoromethyl)phenol。

分散固相萃取-高效液相色谱法测定小麦中啶氧菌酯

建立分散固相萃取-高效液相色谱法测定小麦中啶氧菌酯残留的方法．应用分散固相萃取处理小麦样品,离心得到的上清液过滤膜后,用 HPLC-DAD 进行检测．采用岛津 wondasil C18-WR（5μm,250 mm ×4．6 mm）色谱柱,柱温30℃,乙腈-水（65∶35,V/V）为流动相,流速1．0 mL/min．啶氧菌酯在0．05～1．0 mg/L范围内呈良好线性关系（R＝0．9999）,变异系数为3．34％,平均回收率为89．32％．实验方法操作快速简便、重复性好,适用于小麦中啶氧菌酯的定量检测与分析．

啶氧菌酯环境归趋与生态风险研究进展

啶氧菌酯是一种对生态系统存在安全风险的甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂,从环境归趋,生态毒理的角度出发,综述了啶氧菌酯在土壤、水中、农作物中的归趋,阐述了啶氧菌酯对蚯蚓、蜜蜂和水生非靶标生物急/慢性毒性,和对组织、酶活、蛋白、基因等方面的影响进行了归纳,并讨论了啶氧菌酯未来的生态毒理学研究方向。以期为进一步研究啶氧菌酯对非靶标生物毒性效应和作用机理,并制定相关策略以减少其生态风险提供依据。