2种昆虫病毒混合悬液对菜粉蝶的增效作用

在温度为20～22℃的实验室条件下,用AfMNPV和PrGV的混合病毒悬液感染3龄期菜粉蝶幼虫,可有效降低2种病毒的用量,并显示出良好的增效作用,PrGV和AfMNPV毒力倍数分别为单剂的600倍和400倍以上.不同浓度混合病毒悬液的LT50分别比AfMNPV和PrGV单剂的LT50缩短1.10～2.06 d和0.40～1.93 d.用PrGV病毒悬液感染4龄期菜粉蝶幼虫,其LT50比3龄期增加3.43～6.06 d.

茶蚕颗粒体病毒及其利用研究

1980年从安徽舒城县晓天茶园的茶蚕罹病虫体中分离获得一种颗粒体病毒,经鉴定为茶蚕颗粒体病毒（AbGy）,为我国首次发现。对茶蚕3龄幼虫的半致死浓度LC50为1.23×107mg/ml,半数死亡时间LT50为5.4～8天。经感染试验,以1龄幼虫最敏感,感病死亡率随病毒浓度增大而相应提高。在感染12种昆虫中,只感染茶蚕,对桑蚕及天敌昆虫安全无伤害作用。AbGV制剂经田间防治试验示范结果,防治适期以1～2龄为宜,每亩喷施AbGV有效剂量为100～200mg,防治效果可达75.5％～97.45％,若与微量化学农药混用则有明显增效作用,病毒后效作用长达2～3年,自然感病死亡率18.76％～55.94％,AbGV的防治效果显著。

两种昆虫病毒制剂对菜粉蝶和小菜蛾的田间防治效果

采用菜粉蝶(Pierisrapae)颗粒体病毒和芹菜夜蛾(Anagraphafalcifera)核型多角体病毒制剂及两者的混合制剂对菜粉蝶和小菜蛾(Plutellaxylostella)进行了田间防治试验.结果表明,两种病毒制剂对菜粉蝶具有良好的防治效果,15d最终防效在93%以上;芹菜夜蛾核型多角体病毒制剂及两者的混合制剂对小菜蛾也有良好的防治效果,15d最终防效在89%以上,其效果均分别优于化学农药毒死蜱88%和84%的防效.

菜粉蝶颗粒体病毒与化学杀虫剂混用防治菜青虫及其增效机制研究

菜粉蝶颗粒体病毒(PrGV)与多种低浓度的化学杀虫剂混用,对莱青虫的毒力具有明显的增效作用。PrGV与乙酰甲胺磷混用对菜青虫的防治效果和作物的保护率均优于单用PrGV或乙酰甲胺磷,并且混剂中化学杀虫剂的用量也可减少30％～50％。初步认为PrGV感染对虫体乙酰胆碱酯酶(AChE)。多功能氧化酶(MFO)活性的降低是混剂增效的内在原因之一。经PrGV感染的5龄虫,AChE活性降低了37.94％,MFO活性也下降了55.37～78.78％。病毒感染也影响到杀虫剂对MFO活性的诱导作用。由于MFO活性较低,其对药剂的降解力也随之下降,因此有更多杀虫剂可到达作用靶标AChE,进一步抑制原来活性已较低的感染病毒虫体的AChE的活性。

菜粉蝶颗粒体病毒和浓核病毒混合感染菜青虫细胞系

菜粉蝶颗粒体病毒(Pieris rapae granulosis virus,PrGV)属于杆状病毒科(Baculoviridae)本干状病毒属B亚群。菜粉蝶浓核病毒(Pieris rapae densonucleosis virus,PrDNV)属于细小病毒科(Parvoviridae)浓核病毒属。这两种病毒经常混合感染菜青虫,对菜青虫有很高致死率。我们用PrGV感染幼虫并收集其血淋巴,用以攻毒菜粉蝶细胞(来自虫卵)时,出现PrGV和PrDNV同时感染了菜粉蝶细胞的现象。 给菜青虫2龄幼虫喂饲涂有PrGV的苞菜叶,第3天收集病虫取其血淋巴。

两种昆虫病毒混合使用试验

室内试验,将菜粉蝶颗粒体病毒(2×10^(-3))和银纹夜蛾核型多角体病毒(2.52×10~6)两株病毒液,等量混合后浸菜叶,5次共喂养菜青虫3964头和银纹夜蛾幼虫1601头,其死亡率分别为96.2％和96.3％。经3年大田试用,结果基本一致。1990年在泰安市郊使用这两株病毒混合液喷洒甘蓝,混施区总虫口下降率91.5％,而单独使用区PrGV(3×10^(-3))、PaNPV(1.5×10~6)以及氧化乐果(1000倍液)的虫口下降率分别为65.1、37.9和73.1％。

小菜粉蝶颗粒体病毒颗粒体蛋白基因的序列测定及在大肠杆菌中的表达

根据颗粒体病毒颗粒体蛋白(Granulin)基因在其起始密码子上游的12个碱基高度保守序列(TATAAGGAATTT)以及大菜粉蝶颗粒体病毒(PbGV)的颗粒体蛋白基因的序列[1]设计引物,PCR扩增得到850bp左右大小的片段,核苷酸序列测定结果表明该病毒的granulin基因全长为855bp,起始密码位于第38～40位碱基,终止密码位于779～781位碱基,编码框序列全长为744;推测该基因编码一段由247个氨基酸组成的多肽,分子质量约为2.9178×104道尔顿.与其它颗粒体病毒颗粒体蛋白基因进行同源性比较,核苷酸同源性都在70%以上,氨基酸同源性都在75%以上,最高的为大菜粉蝶颗粒体病毒(PbGV),核苷酸同源性为97%,氨基酸同源性为98%.构建了重组表达载体pet-28a-Gran,IPTG诱导后经SDS-PAGE检测,表明获得了颗粒体蛋白基因在大肠杆菌BL21中的特异表达.

菜粉蝶颗粒体病毒对菜青虫细胞系的感染

用感染菜粉蝶颗粒体病毒的菜青虫血淋巴作为病毒接种物,感染菜青虫(pieris rapaepr)细胞系,结果发现,光镜下,pr细胞发生明显病变,细胞聚集成团,细胞核膨大,细胞质膜模糊,质中颗粒增多,电镜切片观察发现,感染6天后的pr细胞质中,有许多pr GV蒴状体,病毒粒子以及正在包埋的颗粒体,细胞中颗粒体呈椭园形。其大小约为400×250nm,颗粒体中包含一个病毒粒子,大小约为200×50mm,还有一些畸形颗粒体,呈方形。

菜粉蝶颗粒体病毒对哺乳动物的实验感染

昆虫病毒作为生物防治的一个重要方面而被日益广泛地使用。在自然环境中和在生产病毒制剂的过程中,人们与病毒的长期接触,昆虫病毒是否会感染人及哺乳动物,一直是国内外昆虫病毒研究人员的重要研究内容。1975年,联合国世界卫生组织在日内瓦召开的一次有关医学病毒学的讨论会上,将病毒杀虫剂的潜在生态危险列为一项课题。因此,多年来国内外学者做了大量的昆虫病毒的安全性试验,认为昆虫病毒对人、畜等哺乳动物以及家禽、植物等均安全。特别是颗粒体病毒的宿主专一性。

菜青虫体内颗粒体病毒的早期检测

用ＥＬＩＳＡ从感染１６ｈ后的菜青虫血淋巴中检出颗粒体病毒，检出率为４８％．检出率随感染时间延长而递增，感染后２４ｈ高达８０％以上，远早于感染病症出现的时间．用血淋巴检测优于组织提取液，阳性滴度高．以１头虫检测较多头虫好．试验证明ＥＬＩＳＡ比对流免疫电泳灵敏．

菜粉蝶颗粒体病毒京农801株生物学特性研究

PrGV“京农801株”,在24～26℃条件下,对4龄菜粉蝶幼虫的LC50为10^(3·57)颗粒体/毫升。颗粒体具整体抗原性,凝集反应出现肉眼可见的细小颗粒沉淀。试验表明:京农801株与毒力较低的分离株京农802株(LC50为10^(4·92)颗粒体/毫升)属同一血清型。血清型相同而毒力不同的现象颇似苏云金杆菌。PrGV与NPV间无交叉抗原性。颗粒体对高温有一定耐受力。