猪链球菌病及其防控要点

本文就猪链球菌病的病原特点、流行病学、临床症状与病理变化、毒力因子及当前防控要点进行概述,旨在为该病防控提供一定参考。

猪链球菌病的防控

在养殖场的疫病防控过程中,猪链球菌病常被列为重点防控的疫病之一。猪链球菌病能造成猪多种病理变化,急性败血症型死亡率可达80%~90%。同时,链球菌2型还可以感染人,对人类公共卫生安全存在着严重的威胁。本文对猪链球菌病的流行特点、发病原因、病猪临床表现以及诊断、治疗和防控等方面进行了全面阐述,旨在为预防猪链球菌病的发生提供参考。

应用多重PCR检测屠宰猪扁桃体中的猪链球菌

从广东省部分地区肉联厂采集屠宰猪扁桃体401份,用两个多重PCR检测样品中猪链球菌(SS)及其主要致病血清型。检出SS阳性样品154份(38.4%),其中69份(17.2%)携带SS2,35份(8.7%)携带SS9,而SS7和SS1分别为9份(2.2%)和3份(0.7%)。不同血清型SS菌株可混合感染同一头猪,但比例均小于5%。在地区分布上,粤西地区SS阳性率(18.3%)明显低于其他地区(p<0.01),其余各地区之间均无显著差异(p>0.05),在35%～70%之间。对全部样品进行细菌分离,共分离到SS53株,分离率为13.21%;其中SS225株(6.23%),SS93株(0.75%),SS71株(0.25%),未定型SS24株(5.99%),细菌分离的阳性率远比PCR检测结果要低。此检测结果证实了华南地区猪群中广泛存在SS,并呈多个血清型混合感染,而且流行呈地域性的特点,凸显了SS流行的复杂性。

猪链球菌2型引致脑炎及败血症的豚鼠模型

选用不同日龄的健康豚鼠 132只 ,分组经不同途径接种对猪具有致病性的猪链球菌 2型江苏分离株 HA980 1,引致脑炎及败血症 ,建立了动物模型。试验表明 ,小于 2 4日龄提前断奶的豚鼠对该菌株较易感 ,最佳感染途径是皮下注射 ,腹腔、鼻腔次之。感染豚鼠表现出典型脑炎的临床症状及病理变化。经重复试验测得该菌株对豚鼠的 L D50 为 5 .5× 10 6cfu,从感染死亡豚鼠脑脊液、大脑、血液及各实质器官均可分离出该病原菌 ,与仔猪自然感染情况相似。该动物模型的建立为进一步探究猪链球菌 2型感染的体内动态分布、感染机制。

重庆地区表观健康猪中猪链球菌的检测

本研究旨在调查重庆地区表观健康猪的猪链球菌带菌情况,并揭示健康猪群携带猪链球菌的公共卫生学意义。随机采集重庆市17个区县(市)定点屠宰场表观健康猪的腭扁桃体1 360份,进行猪链球菌的分离鉴定,并对致病性较强的1、2、7、9、14型及1/2型进行分型与毒力因子分析。结果共分离到225株猪链球菌,分离率为16.54%;检出猪链球菌2型4株,猪链球菌7型3株,猪链球菌9型3株,猪链球菌1/2型1株;毒力因子谱分析发现多数(10/11)分离株缺失部分毒力因子,但也存在具有全部已知毒力因子的强毒株,且在国内首次检出小片段mrp型猪链球菌1/2型1株和7型2株。结果提示,重庆地区健康猪群带菌现象普遍,且流行菌株具有与国外不同的特点,对屠宰场工作人员健康造成威胁。

猪链球菌14型的分离鉴定及生物学特性研究

为了检测确定2019年5月河南某规模化猪场一栋保育仔猪发病猪群的病原,本研究从送检的发病猪关节液中分离获得1株细菌。通过细菌纯化培养、革兰氏染色、形态学观察及猪链球菌gdh基因PCR扩增,确定该分离菌株为猪链球菌。用猪链球菌分型引物对该菌株进行PCR扩增分型鉴定及软件比对分析,结果表明该分离菌株为猪链球菌14型,与猪链球菌JS14株(GenBank登录号:CP002465.1)同源性为100%。毒力基因检测结果表明,该菌株的同时携带有epf、mrp、sly、fbps、orf2毒力基因,属于高致病性菌株。小鼠致病性试验结果也证明该菌株是一株高致病性猪链球菌。药物敏感性试验结果显示,该菌株对β内酰胺类和喹诺酮类药物敏感,对氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类和磺胺类高度耐药,表现出多重耐药现象。对该菌株进行5大类24种耐药基因检测,该菌株同时携带有blaTEM、aadA1、strA、strB、aacC2、aphA1、tet(B)、gyrA、parC、sul2耐药基因。该研究为后续进一步开展猪链球菌14型流行特点和致病机制研究奠定了基础,为猪链球菌14型临床防控提供了理论依据,同时具有重要的公共卫生意义。

对32例感染猪链球菌病的临床分析

目的观察成都地区32例人感染猪链球菌病患者的临床特征。方法收集患者流行病学、临床表现、细菌培养、毒力基因鉴定结果等并进行分析。结果6例患者血液及脑脊液的分离培养的细菌中,均含猪链球菌2型毒力基因;全部患者在发病前均以宰杀、加工等方式直接接触病、死猪史,25例(78.12%)患者皮肤有明显伤口。临床分型以脑膜炎型患者居多(65.6%,21例),其次为普通型(12.5%,4例)、混合型(15.6%,5例)、休克型(6.2%,2例);普通型、脑膜炎型预后良好;混合型预后较差,其总死亡率为6.25%(2/32)。结论患者通过直接接触病、死猪而受染猪链球菌2型,无第2代病例发生;青霉素和头孢菌素可作为首选治疗药物。

正常屠宰猪致病性猪链球菌9型的鉴定和特性研究

从江苏某地正常屠宰猪扁桃体分离到1株细菌HA070725,呈链球菌的特征形态,β溶血,药敏试验表明该菌对多种抗生素产生耐药性。经PCR及序列分析,为猪链球菌9型。其毒力因子基因型为mrp-/epf-/sly-/orf2+/gdh+/ fbps+/impdh+。动物致病性试验表明,该菌对ICR小鼠和断奶仔猪有较强的致病性,对ICR小鼠的半数致死量为2.67×10~6cfu。结果表明:在正常猪扁桃体中可携带高致病性的猪链球菌9型。

浙江部分地区屠宰场待宰猪链球菌的检测及药敏试验

对浙江部分地区屠宰场中猪链球菌的分布和耐药情况进行调查。结果表明,猪链球菌的携带率为13.1%(38/290),其中2型猪链球菌为0.69%(2/290);不同地区之间待宰猪的猪链球菌携带率存在明显的差异,义乌地区的猪链球菌携带率为21.0%(22/139),而江山为0;各地区不同分离株的耐药性无明显差异,均对β-内酰胺类药物敏感,50%以上分离株对四环素、强力霉素、红霉素、麦迪霉素等几种药物表现为多重耐药。

猪链球菌微滴数字PCR定量检测方法的建立

根据猪链球菌(Streptococcus suis,SS)gdh基因的保守序列设计特异性引物和Taq Man探针,通过反应条件优化和特异性、敏感性、重复性试验以及临床样品的检测,建立可对其准确定量的微滴数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)检测方法,并与实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)检测方法进行比较分析。结果表明,该方法特异性良好,与猪传染性胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪圆环病毒2型和伪狂犬病毒无交叉反应;灵敏度优于qPCR,线性相关系数(R2)为0.991,呈良好线性关系,最低可检测到2.692 copies/μL的阳性质粒;稳定性好,变异系数为1.66%。临床样品定量检测结果表明,dd PCR具有敏感性高、特异性好等优点,能对qPCR检测的可疑样品进行精确定量。本研究建立的dd PCR能够准确定量检测SS,将为SS相关研究提供有益参考。

猪链球菌2型感染猪和人的现状及研究进展

猪链球菌2型可引起人和猪的感染,甚至死亡,是一种严重的人兽共患病病原,其引起的疫病在我国被列为二类疫病。它能引起仔猪脑膜炎、支气管肺炎、败血症、关节炎及人的化脓性关节炎、眼内炎和心内膜炎等。在世界上许多国家和地区广泛分布,已发现的致病因子有十多种,但致病机理尚未彻底阐明。由于该菌引起的疫病危害性大,所以对该菌的快速诊断检测和防治方法也在不断改进。论文对猪链球菌2型病的流行状况、致病性、检测方法、防治等研究现状进行综述。

江西省表观健康猪群携带猪链球菌状况分析

目的了解江西省表观健康猪群携带猪链球菌的情况,为有效防控猪链球菌病提供科学依据。方法选取景德镇市、崇仁县为采样点,采集表观健康猪群鼻咽拭子和扁桃体进行猪链球菌病原分离鉴定。结果共采集表观健康猪群鼻咽拭子和扁桃体样本301份,检出2株猪链球菌2型,其毒力基因mrp、sly、ef均为阴性。结论本次调查中江西省表观健康猪携带猪链球菌的带菌率为0.66%。

猪链球菌2型两代表性分离株感染小型猪后对部分免疫指标的影响

为探讨致病性猪链球菌2型(SS2)感染后对猪外周免疫系统的影响,作者选用SS2两代表性分离株(即四川分离株ZY05719和江苏分离株HA9801)建立具有典型症状和病理组织特征的小型猪感染模型,分析感染后不同时间猪血液中细菌含量和白细胞变化,以及相关免疫指标的变化。结果表明,猪链球菌2型感染会引起小型猪的急性死亡、亚急性感染和慢性迁延。急性死亡猪的血液中细菌含量高达106CFU/mL。感染后的12 h即可见IL-1I、L-8、TNF-α、IFN-γ分泌量显著增加,其中以TNF-α增幅最显著。同时可见CD4+T细胞的水平明显下降,CD8+T细胞的水平上升,急性死亡猪出现CD4+/CD8+T细胞比值倒置,即感染猪处于免疫抑制状态。急性死亡猪血液中的淋巴细胞转化能力变化无规律,亚急性感染猪的淋转指数在下降1周后逐渐恢复。结果提示:ZY05719和HA9801菌株的致病性有差异;外周血中各相关免疫指标和SS2感染进程有一定相关性。

猪链球菌2型感染SPF小型猪模型的构建

构建了致病性猪链球菌2型(SS2)感染模型。通过典型临床症状观察、剖检病变和组织学观察及病原分离鉴定,证实该模型能成功模拟自然感染状态下SS2引起的典型临床症状和病理变化特点,稳定性好,可进一步用于致病性SS2在动物体内动态分布规律、致病机制和机体免疫应答以及疫苗的效果评价和相关药物筛选等方面的研究,对于猪链球菌2型感染的防控具有重要意义。

猪繁殖与呼吸综合征病毒及混合感染的诊治

针对贵州省遵义市某规模化猪场的发病情况,通过病理学观察、血液学和细菌学检查及病原核酸检测等方法,确诊该猪场发生了猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒、猪瘟病毒、猪链球菌与猪附红细胞体的混合感染,经采取综合防治措施,控制了疫情。为进一步了解PRRS在贵州省各地区的流行情况、多种病原的混合感染情况及探索PRRS有效的防治方法提供理论依据。

苄青霉素在猪链球菌实验性感染的猪体内代谢动力学研究

本文报道苄青霉素在健康猪(8头)和人工感染猪链球菌病猪(6头)体内代谢动力学的比较研究。按每公斤体重肌肉注射15000单位苄青霉素后,不同时间采血,用微生物法测定血清药物浓度。两组猪的药时数据均符合有吸收因素二室开放模型。 除了动力学参数α、Ka、K_(12)、t1/2α、t1/2Ka和Tmax外,其他参数在健康和感染猪间具有显著差异。猪链球菌实验性感染猪的动力学参数B、β及K_(21)的值显著增加,而参数A、K_(10)、t1/2β、Cmax、AUC与Tcp(ther)的值显著减小。

育成猪对猪链球菌的免疫应答

取 7周龄长大杂交猪 12头 ,随机均分为试验组和对照组。试验组按每公斤体重 4.5亿个菌腹部皮下接种猪链球菌 C551 2 6复制猪链球菌病 ,接种后 0、7、14、2 1、2 8d,自前腔静脉采血 ,计数红、白细胞总数和白细胞分类 ,用硝基蓝四氮唑 (NBT)还原试验定量检测嗜中性粒细胞吞噬功能 ,噻唑蓝 (MTT)比色法检测外周血中淋巴细胞转化 ,单向免疫扩散法测定血清 Ig G浓度 ,5 0 %溶血试验测定血清中补体总活性 ,同时 ,用植物血凝素 (PHA)皮肤试验检测迟发型超敏(DTH)反应。结果表明 ,接种后 7d开始 ,试验组白细胞总数升高 ,接种后 14d嗜中性粒细胞百分含量低于对照组 ,淋巴细胞百分含量则升高 ;嗜中性粒细胞还原硝基蓝四氮唑 (NBT)能力均极显著高于对照组 (P<0 .0 1) ,PHA诱导的淋巴细胞转化则极显著降低 (P<0 .0 1) ,DTH只在接种后 2 1d显著低于对照组 (P<0 .0 5 ) ,血清中 Ig G总量接种后 7d降低 (P<0 .0 5 ) ,14d却极显著升高 (P<0 .0 1) ,此后恢复正常 ,血清补体总活性只在接种后 7d降低 (P<0 .0 5 )。可见 ,猪对猪链球菌的免疫应答除了常见的抗原抗体反应外 ,还表现在免疫细胞数及其功能的变化 ,以及补体活性的改变。

猪链球菌2型1910RR蛋白多克隆抗体的制备

通过原核表达系统表达了猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)1910RR蛋白,并制备了多克隆抗体。结果表明,猪链球菌2型1910RR重组蛋白以上清形式表达,Western-blot检测证实了1910RR蛋白具有良好的免疫学活性,1910RR多克隆抗体效价为1∶4,为进一步研究1910RR蛋白功能奠定了良好基础。

链球菌2型对恩施黑猪和美系纯种长白猪的致病性研究

猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)病是一种能够引起人和多种动物发病的重要人畜共患病,其中以2型(SS2)流行最广,致病力最强,不仅可引起猪脑膜炎、关节炎、心内膜炎、败血症、肺炎和突然死亡,还可以感染人并致其死亡,严重地威胁着人类的公共卫生安全。本研究对恩施黑猪和美系长白猪进行猪链球菌2型的攻毒试验,观察其病理损害,进而探讨其致病机制。20头猪分A、B、C、D四个组,A组为5头恩施黑猪,B组为5头美系长白猪,C、D两组作为空白对照组。A、B组感染猪链球菌2型菌株,攻毒后都出现出现体温升高、跛行和神经症状,但A组恩施黑猪更加明显,出现3头死亡,解剖后各组织器官病变也比美系长白猪明显。通过对病理器官组织切片、细菌学检验、细菌计数等结果,恩施黑猪对链球菌2型的易感性比美系长白猪更强,从而证实了猪链球菌2型对鄂西黑猪的致病性比美系长白猪更强。

上海市屠宰生猪丹毒丝菌、猪链球菌和副猪嗜血杆菌分离情况调查

为了解上海市屠宰场屠宰生猪丹毒丝菌、猪链球菌和副猪嗜血杆菌的分离情况,采取传统方法进行细菌分离,利用全自动微生物生化鉴定系统、全自动快速微生物质谱检测系统、普通PCR方法进行细菌鉴定。结果发现猪丹毒丝菌分离率为61%,猪链球菌分离率为7%,副猪嗜血杆菌分离率1%;猪丹毒丝菌从肺脏、扁桃体中均分离到,分离率高,猪链球菌和副猪嗜血杆菌从扁桃体中分离到,分离率低。