杀菌-通透性增强蛋白对分泌性中耳炎大鼠中耳黏膜TNF-α和IL-6表达的影响

目的 :探讨杀菌 -通透性增强蛋白 (BPI)对分泌性中耳炎 (OME)大鼠中耳黏膜 TNF- α和 IL- 6 m RNA及蛋白表达的影响和意义。方法 :采用大鼠中耳腔注射脂多糖 (L ipopolysaccharide,L PS)制备 OME模型 ,动物分为 L PS实验组和 BPI治疗组。利用 EL ISA和 RT- PCR方法检测中耳黏膜组织 TNF- α和 IL- 6 m RNA及其蛋白的表达。结果 :L PS实验组和 BPI治疗组在第 1、 2天均有 IL- 6的表达 ,但 L PS组表达量高于 BPI组 (P<0 .0 5 )。在第 7天后两组均无表达 ;而 TNF- α的表达贯穿于两组实验的始终 ,但 L PS组表达量高于 BPI组 (P<0 .0 5 )。结论 :IL- 6和 TNF- α在中耳炎病变的形成中起作用 ;BPI通过抑制细胞因子表达和分泌 ,减轻炎症刺激 ;BPI是一个潜在的治疗 OME的有效药物 ,可能预防慢性

杀菌/渗透性增强蛋白功能及应用前景

杀菌/通透性增强蛋白(BPI)是存在于中性粒细胞中的阳离子蛋白,约为55 kD.BPI能与革兰氏阴性菌外膜上的脂多糖结合,增加外膜对抗菌药的通透性,具有特异性杀灭革兰氏阴性菌及结合/中和内毒素的生物学功能,在革兰氏阴性菌感染的治疗方面有良好的发展前景.近年来,国内外对BPI研究颇多,并逐渐发现BPI还具有调理作用、抗真菌、抗原虫和抑制血管生成等许多功能,被学者称为未来的"超级抗生素".本文主要就BPI的结构、分布、生理功能、作用机理及临床研究方面的研究进展作一综述.

杀菌/通透性增加蛋白研究现状及应用前景

杀菌/通透性增加蛋白（BPI）是中性粒细胞内存在的一种碱性蛋白,是一个分子质量介于50-60 ku的阳性蛋白,它主要存在于人、牛、兔等哺乳动物多形核粒细胞（PN4NL）的嗜天青颗粒中及其表面,它能与革兰氏阴性菌脂多糖（LPS）结合,具有中和内毒素和杀灭细菌的作用,在革兰氏阴性菌感染的治疗方面有良好的应用前景,人类最初注意杀菌性/通透性增加蛋白是因其具有杀菌作用,但随后发现它还具有较强的颉颃内毒素的作用。近年来国外对其研究颇多,并逐渐发现其还具有很多其他功能,如抗真菌、杀灭寄生虫等作用,其被学者称为未来的“超级抗生素”。

猪源杀菌性/通透性增加蛋白对烧伤大鼠绿脓杆菌菌血症的保护作用

目的：观察猪源杀菌性／通透性增加蛋白（ＢＰＩ）对大鼠烧伤绿脓杆菌菌血症的作用。方法：将８４只Ｗｉｓｔａｒ大鼠烧伤后经静脉注射绿脓杆菌悬液（１０６ｃｆｕｋｇ－１）随机分为烧伤绿脓杆菌菌血症组与烧伤绿脓杆菌菌血症ＢＰＩ（２ｍｇｋｇ－１）实验组，观察大鼠存活情况、全血细菌计数、血浆内毒素、血清ＴＮＦ－α、葡萄糖及乳酸浓度的改变。结果：保护组大鼠全血细菌计数、血浆内毒素、血清ＴＮＦ－α、葡萄糖浓度较对照组明显低。

小鼠BPI N端功能片段(muBPI_(25)蛋白)体外杀菌和中和内毒素作用研究

目的:建立胞内杀菌和体外中和内毒素实验模型,检测muBPI25目的蛋白对胞内寄生菌的抑杀作用和对内毒素的中和作用。方法:将pcDNA3.1(+)-muBPI36-259质粒导入RAW264.7细胞,用胞内寄生G+/G-菌感染上述细胞建立muBPI25目的蛋白胞内杀菌实验模型;将pSecTag2B-muBPI36-259与双荧光素酶报告基因质粒共转染RAW264.7细胞,建立体外检测muBPI25蛋白中和内毒素实验模型。结果:胞内杀菌实验模型证实muBPI25目的蛋白对G-伤寒杆菌具有抑杀作用;中和内毒素实验模型证实muBPI25目的蛋白对内毒素具有中和作用。结论:首次证实小鼠BPI N端功能片段,即muBPI25目的蛋白对G-菌具有抑杀作用,对其裂解产物内毒素具有中和作用。

杀菌性通透性增强蛋白对失血性休克的保护作用及其机理

分别在失血和复苏开始即刻ｉｖ杀菌性／通透性增强蛋白（ＢＰＩ）１．５和３．５ｍｇｋｇ－１，观察ＢＰＩ对大鼠失血性休克转归的影响．结果显示，ＢＰＩ治疗能明显改善失血性休克大鼠肝肾功能，提高休克动物存活率（ＢＰＩ组８１％ｖｓ休克对照组４４％，Ｐ＜０．０５），ＢＰＩ组大鼠复苏后与休克前的血浆内毒素（０．２０±０．０４ｖｓ０．２４±０．０５ｋＵＬ－１）水平无明显变化，血浆肿瘤坏死因子α和白介素６水平较休克前明显升高，但均显著低于休克对照组．提示ＢＰＩ对失血性休克大鼠具有一定的保护作用，其机理可能与ＢＰＩ拮抗休克时内源性内毒素活性，抑制细胞因子反应有关．

杀菌/通透性增加蛋白研究进展

杀菌/通透性增加蛋白(bactericidal permeability increasing protein,BPI)是一种主要存在于中性粒细胞内的阳离子抗菌蛋白,具有杀菌及中和内毒素作用,在革兰氏阴性菌感染的治疗方面有很好的应用前景。作者主要对BPI分子结构、生物学功能、作用机制及应用前景等方面进行综述。

BPI基因生物信息学分析及其在不同猪群体中的遗传变异情况

【目的】明确猪杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)基因中可能存在的SNP位点,并探讨BPI基因外显子10在上海地区5个猪群体中的多态性及其与抗病相关的优势基因型,为揭示BPI基因在仔猪腹泻抗病机制中的作用及开展猪抗病育种提供理论依据。【方法】采用在线生物信息学软件分别从碱基序列、SNP位点和蛋白氨基酸序列等角度比对分析猪BPI基因全长cDNA序列与电子克隆序列的差异,采用PCR-RFLP检测分析猪BPI基因外显子10的多态性,并检测BPI基因外显子10在杜洛克、长白、大白、申农和梅山猪群体中的基因型及基因频率。【结果】猪BPI基因电子克隆编码区(CDS)序列长度1452 bp,编码483个氨基酸,存在44个SNP位点,其中22个为同义SNP位点、22个为非同义SNP位点。猪BPI基因全长cDNA序列(EF436278.1和FJ810853.1)与电子克隆序列相比存在14处碱基差异,而对应的翻译蛋白序列存在4处氨基酸差异。猪BPI基因外显子10存在AA、BB和AB 3种基因型,各基因型在杜洛克猪、长白猪、大白猪、申农猪和梅山猪群体中的分布情况各不相同。在杜洛克猪群体中AA基因型和AB基因型呈中度多态分布(0.404和0.416),BB基因型检出比例较低(0.180);在长白猪和申农猪群体中均未检测出AA基因型,BB基因型检出比例较高,而AB基因型检出比例较低;在大白猪和梅山猪群体中均以BB基因型检出比例较高,AB基因型次之,AA基因型检出比例最低。总体来看,除了杜洛克猪群体的A等位基因频率较高外,其他4个猪群体均以B等位基因频率较高。【结论】猪BPI基因外显子10 AA基因型频率在杜洛克猪群体中最高,在大白猪和梅山群体中较低,在长白猪和申农猪群体中未检出,即AA基因型在杜洛克猪群体中比例高与其仔猪腹泻发病率低的情况一致。因此,在大白猪和梅山猪育种过程中需提高AA基因型比例,而在长白猪和申农猪育种过程中需引进AA基因型个体,降低BB和AB基因型比例,以增加仔猪的抗病能力。

杀菌/渗透增强蛋白功能区抗菌肽与内毒素亲和性的SPR技术检测

目的:研究杀菌/渗透增强蛋白(BPI)不同功能区抗菌肽与内毒素(LPS)结合的能力。方法:设计、合成来自杀菌/渗透增强蛋白N端不同功能区的3段抗菌肽,分别为BPI22-36、BPI85-99和BPI147-161,将其固定于CM5蛋白质芯片上,使用表面等离子共振(SPR)仪检测3种抗菌肽与LPS和类脂A(Lipid A)相互作用的情况。结果:3种抗菌肽中,BPI147-161与LPS和Lipid A结合的能力最强,BPI85-99次之,但BPI22-36与其不结合;BPI147-161与Lipid A的亲和常数KA为1.12×106L/mol,相比,多黏菌素B(PMB)的亲和常数KA为5.58×106L/mol。结论:来自杀菌/渗透增强蛋白的抗菌肽BPI147-161能有效地中和内毒素,这可能为败血症休克的治疗提供一种新的策略。

天然抗感染分子-细菌透性增加蛋白

革兰氏阴性菌细胞外壁中的脂多糖结构即内毒素,经常是引发脓毒症、菌血症等系统性炎症反应的“元凶”。近十余年的研究发现,细菌透性增加蛋白(bactericidal／permeability-increasing protein,BPI)具有特有的中和内毒素和拮抗革兰氏阴性菌的能力,是一种抗感染的天然的分子靶。大量的临床研究结果已经显示其用药的有效性和安全性。近几年来国外生物药业公司正努力将重组人BPI推向市场。

杀菌性/通透性增加蛋白对大鼠移植肝脏缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的通过观察预先使用杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)的SD大鼠移植肝脏的转氨酶水平、TNF-α、白介素1(IL-1)水平的变化,探讨BPI预处理是否具有肝脏缺血再灌注损伤保护作用及其可能的相关机制。方法雄性SD大鼠96只,随机分为生理盐水对照组和BPI组,Kamada's袖套法经行肝移植。对照组切取供肝前10min经腰静脉注射NS1.5m L;BPI组切取供肝前10min经腰静脉注射BPI(100μg/m L)1.5 m L。于再灌注后0h、3h及6h,酶联免疫吸附试验测定血清TNF-α及IL-1的含量;全自动血清自动生物化学仪检测血清转氨酶;光镜切片检测肝脏组织学。结果再灌注后0h,AST、ALT、TNF-α及IL-1含量两组间差异无统计学意义(P>0.05);再灌注后3、6h,NS组及BPI组各项指标水平逐渐升高,但BPI组各项指标水平明显低于NS组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 BPI对大鼠移植肝脏的缺血再灌注损伤有明显抑制作用。

杀菌性/通透性增加蛋白和脂多糖结合蛋白基因多态性与易感性的相关研究

目的:检测杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)和脂多糖结合蛋白(LBP)基因单个核苷酸多态性(SNP)的频率分布。方法:选择该院部分科室ICU病房并发全身性感染的患者112例,并以100名正常健康者为对照组,取外周血白细胞提取基因组DNA,用聚合酶链反应-限制性内切酶长度多态性分析(RFLP-PCR)法检测BPI基因上Lys216G lu、PstⅠin intron 5和G545C、LBP基因上Cys98G ly和Leu436Pro共5个位点SNP。结果:全身性感染组BPI Lys216G lu G/G纯合子及G等位基因出现的频率明显高于对照组;死亡组BPI Lys216G lu G/G纯合子及G等位基因出现的频率也明显高于存活组。结论:BPI Lys216G lu SNP的差异可能是全身性感染患者易感原因之一。

猪杀菌性/通透性增强蛋白(BPI)的功能及其在抗病育种中应用的研究进展

杀菌性/通透性增强蛋白(bactericidal/permeability-increasing protein,BPI)有较强的杀菌作用(主要为革兰氏阴性菌)和中和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)的活性,以及增强单核细胞和嗜中性粒细胞对病原菌的吞噬功能。近年来,BPI的生物学功能受到广泛关注,被称为机体内的"超级抗生素",BPI基因被很多学者作为抗病候选基因进行探索。作者综述了猪BPI基因的结构、生物学功能及其与猪抗性的关系等,阐述了BPI基因在猪抗病育种中的研究进展及应用前景,为下一步猪BPI基因的功能研究及其在抗病育种实践中的应用提供理论依据。

BPI-LL37抗菌融合蛋白质表达载体的构建与功能鉴定

目的构建杀菌/通透性增加蛋白和LL37抗菌蛋白的融合蛋白（BPI-LL37）表达载体,获得针对脓毒症治疗的多效抗菌融合蛋白,为脓毒症治疗提供新的措施。方法通过PCR方法从杀菌/通透性增加蛋白（bactericidal/permeability-increasing protein,BPI）和LL37基因的c DNA中扩增并修饰获得需要的r BPI21和LL37活性片断,构建r BPI21-LL37/LL37-r BPI21融合蛋白的表达载体,构建的表达载体（p LVX-Tight-Puro）上的BPI和LL37基因之间通过柔性片段（GGSGG）连接。之后使用Poly JetTM体外DNA转染试剂转染人肺腺癌细胞A549。通过Western blot检测真核细胞A549表达融合蛋白的水平,通过抑菌试验验证此融合蛋白的分泌与抗菌能力。结果经限制内酶切酶切、DNA电泳和DNA测序证明融合蛋白表达载体（p LVX-Tight-Puro-BPI-LL-37）构建成功;Western blot检测结果表明融合蛋白r BPI21-LL37/LL37-r BPI21能被真核细胞A549细胞表达,融合蛋白大小介于25～30×10^3;抑菌试验进一步验证此融合蛋白具有抑制细菌生长的生物学效应。结论构建的两种r BPI21-LL37/LL37-r BPI21表达载体能够成功转染入人的体细胞,并表达和分泌具有抗菌活性的融合蛋白,该融合蛋白有潜力成为治疗脓毒症的新药。

人类粒细胞杀菌蛋白治疗脓毒症小鼠

目的通过对脓毒症模型的治疗过程，观察人类杀菌蛋白（ＢＰ）的治疗作用，并与抗ＬＰＳ单克隆抗体１Ａ比较。方法脓毒症模型采用ＮＨ１雄性小鼠腹腔注射Ｏ１１１Ｂ４大肠杆菌悬液。给药分三组，ＢＰ０１ｍｇ，１Ａ１０ｍｇ，生理盐水（ＮＳ）０５ｍｌ。结果各组生存率无显著性差异（Ｐ＞００５）。第二次攻击后３小时外周血白细胞计数，ＮＳ组稍高于其他两组，分别为１９６±５７×１０６／ｍｌ、１５５±３８×１０６／ｍｌ和１５２±３０×１０６／ｍｌ，差异未达到显著性界值。血浆ＬＰＳ水平：ＢＰ和ｌＡ组明显低于ＮＳ组（Ｐ＜００５）。血浆细胞因子活性：ＢＰ组对细胞因子的抑制作用较强，分别在不同时间点对ＩＬ－１、ＩＬ－６和ＴＮＦ的数据低于ＮＳ组，有显著性差异（Ｐ＜００５）；ｌＡ只在一个时间对ＩＬ－６有抑制作用（Ｐ＜００５）。结论抗ＬＰＳ单抗和ＢＰ对ＬＰＳ均具有阻断作用，但是，ＢＰ的作用更强。两者均不能明显改善动物的生存率，应作为辅助治疗。

脂多糖结合蛋白和杀菌/通透性增加蛋白:脓毒症的潜在治疗靶点

脓毒症是严重感染、创伤、烧伤和休克等损伤的常见并发症和主要死因。革兰氏阴性菌细胞壁成分脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)导致的内毒素血症是导致脓毒症的主要原因之一。包括脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide-binding protein, LBP)和杀菌/通透性增加蛋白(bactericidal permeability increasing protein, BPI)在内的多种血浆蛋白参与调控LPS激活的信号通路。两种蛋白属于同类蛋白家族,结构相似但生物学效应差异很大:LBP能协助LPS与靶细胞CD14受体结合增加宿主对LPS的敏感性,而BPI可中和LPS致炎作用并加速LPS从循环内清除。本文就LBP与BPI的结构、功能、治疗脓毒症的潜力及基因多态性与脓毒症的相关性等方面的研究进展进行综述。

杀菌/通透性增加蛋白防治创伤后内毒素血症及其增敏效应

目的：探讨脂多糖结合蛋白（ＬＢＰ）在严重创伤后肠源性内毒素血症诱发多器官损害中的作用及杀菌／通透性增加蛋白（ＢＰＩ）的防治效应。方法：采用大鼠重度失血性休克（３０～３５ｍｍＨｇ，１８０ｍｉｎ）、３５％Ⅲ°烫伤模型，观察应用重组ＢＰＩ（ｒＢＰＩ２１）对血浆内毒素含量，肺、肝、肠、肾等组织ＬＢＰｍＲＮＡ表达，多器官病理改变及动物存活率的影响。结果：给予ｒＢＰＩ２１可完全防止休克所致内毒素血症的发生，血浆内毒素峰值显著低于对照组〔７４．０±２２．５）对（１３．８±６．８）ｐｇ／ｍｌ，Ｐ＜０．０５。〕烫伤８小时治疗组血浆内毒素均值降低４２．４％。同时，ｒＢＰＩ２１处理不同程度地抑制动物肺、肝、肠、肾等组织ＬＢＰｍＲＮＡ表达水平（Ｐ＜０．０５～０．０１）。病理形态学检查显示治疗组严重休克后脏器损害明显减轻，动物４８小时存活率提高３１．３百分点（６８．８％对３７．５％，Ｐ＝０．０８）。结论：严重创伤早期应用ｒＢＰＩ２１能减轻内毒素血症诱发的多器官损害及改善动物预后。

杀菌/通透性增加蛋白对脓毒症大鼠组织TNF-α表达的影响及意义

目的 探讨杀菌 /通透性增加蛋白 (BPI)对脓毒症动物肝、肺肾组织肿瘤坏死因子 α (TNF -α)表达及多器官功能障碍的影响与意义。方法 采用大鼠盲肠结扎穿孔 (CLP)造成脓毒症模型。动物分为正常对照组 (10只 )、CLP组 (2 0只 )及BPI治疗组 (2 0只 )。CLP后 12h和 2 4h处死动物 ,分别检测肝、肺、肾组织TNF αmRNA表达、TNF α蛋白水平和器官功能指标。结果 CLP后 12h动物肝、肺、肾组织TNF αmRNA表达均显著增强 ,分别为伤前基础值的 2 4 6倍 (P <0 0 5 )、 2 86倍 (P <0 0 1)、 2 2 7倍 (P<0 0 1) ,同时各组织TNF α水平迅速升高 (P <0 0 1)。重组BPI治疗可不同程度地抑制肝、肺、肾组织TNF -αmRNA表达上调 (P <0 0 5 ) ,12h各组织TNF α水平显著降低 (P <0 0 5 ) ,均恢复至伤前正常范围。此外 ,BPI组动物血清丙氨酸转胺酶、肌酐水平在CLP后 12h显著低于未治疗组 ,CLP后 2 4h肺组织髓过氧化物酶活性也明显下降 (P <0 0 1)。结论 严重腹腔感染早期应用重组BPI治疗有助于下调TNF α的过量表达 ,从而抑制机体过度炎症反应 。

严重外科感染患者杀菌/通透性增加蛋白水平的变化规律及意义

目的观察外科严重感染患者内源性杀菌/通透性增加蛋白(BPI)的变化规律及其临床意义。方法筛选外科严重感染患者19例,分别于感染前和感染后第1、3、5、7、14天采集血标本。采用 ELISA 方法测定血浆 BPI、脂多糖结合蛋白(LBP)和白细胞介素-6(IL-6)水平;内毒素含量采用改良基质显色法鲎试验检测。同时检查感染前及感染后第1、3、5、7、14天的中性粒细胞计数,并观察患者预后。结果与正常对照组比较,脓毒症组患者感染后第1～5天血浆中 BPI/LBP 比值明显降低(P<0.01),第7天恢复至正常范围;严重脓毒症组患者感染后第1～7天其比值显著降低(P<0.01)。此外,感染后第1～3天严重脓毒症组血浆中 BPI/LBP 比值显著低于脓毒症组(P<0.05)。结论外科感染时机体内源性 BPI 和 LBP 水平迅速升高,但 BPI 的增幅明显低于 LBP;感染早期BPI/LBP 比值与脓毒症病情的严重程度密切相关。

猪源杀菌性/通透性增加蛋白对大鼠烧伤脓毒症模型的治疗作用

目的观察猪源杀菌性／通透性增加蛋白（ＢＰＩ）对大鼠烧伤脓毒症的治疗作用。方法将８４只Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为烧伤脓毒症组与烧伤脓毒症治疗组，观察大鼠存活情况，全血细菌计数、血浆内毒素、血清ＴＮＦ－α、葡萄糖及乳酸浓度的改变。结果经ＢＰＩ治疗后，大鼠全血细菌计数、血浆内毒素、血清ＴＮＦ－α、葡萄糖及乳酸浓度明显降低。