抗鸽IgG单克隆抗体的制备及鉴定

鸽卵黄经硫酸铵盐析、酒精沉淀及凝胶 ( Sephadex G- 1 0 0 )柱层析后 ,得到较纯的鸽Ig G。以其免疫 BAL B/C小鼠 ,取其脾细胞与骨髓瘤细胞 ( SP2 /0 )进行细胞融合 ,经过酶联免疫吸附试验 ( ELISA)筛选 ,得到两株能稳定分泌抗鸽 Ig G的单克隆抗体 (以下称单抗 ) ,分别命名为 1 E5和 4C2。经亚类鉴定 ,该单抗均为 Ig G1亚类。在鸽 Ig G包被的 96孔板上用间接 ELISA方法测定单抗腹水的 ELISA效价 ,结果表明 ,单抗 1 E5和 4C2的 ELISA效价分别为 1∶ 1 60 0和 1∶ 640 0。免疫印迹试验结果表明 ,两株单抗均识别 Ig G重链 (分子量约为 66KD)。将单抗分别与鸡、鸭、鹅、鹌鹑和鸽等禽类血清包被的酶标板作间接 ELISA,结果表明单抗只与鸽血清的蛋白发生特异性反应 ,而不与其它禽类血清的蛋白反应。这说明抗鸽 Ig

禽流感灭活抗原与佐剂配合鼻腔免疫对鸽呼吸道抗体分泌细胞的影响

通过禽流感灭活抗原配合黏膜免疫佐剂鼻腔免疫乳鸽,研究鸽呼吸道各段抗体分泌细胞的分布和数量。结果显示,首免后第3、5周,应用CpG免疫后肺IgG分泌细胞面积显著高于对照组(P<0.05),首免后第5,7周,应用CpG免疫后肺IgA分泌细胞面积显著高于对照组(P<0.05);首免后第3、5、7周,应用灭活禽流感抗原免疫后,鸽呼吸道各部位IgG分泌细胞和IgA分泌细胞面积与对照组无显著差异;应用禽流感抗原配合CpG和胆酸钠免疫后鸽呼吸道各部位单位面积中IgA分泌细胞和IgG分泌细胞面积均显著或极显著高于对照组(P<0.01,P<0.05)。结果表明,灭活禽流感抗原配合黏膜免疫佐剂通过鼻腔免疫能够提高呼吸道中IgA分泌细胞和IgG分泌细胞的面积,增强局部呼吸道体液免疫应答水平。