铜绿假单胞菌单PilZ结构域蛋白PA0012和PA4324突变体生物学表型的初步筛选

目的 本研究以铜绿假单胞菌单PilZ结构域的环二鸟苷酸受体蛋白PA0012和PA4324为研究对象,研究这2个蛋白对生物学表型的影响。方法 本研究首先利用同源重组的方法对编码PA0012和PA4324蛋白的基因进行了敲除,得到敲除突变体菌株ΔPA0012和ΔPA4324。然后,将实验分为3组,以野生型菌株PAO1为对照,用这2个突变体进行了表型筛选,包括群集运动能力、感染生菜的能力、对线虫的致病力和蛋白酶活性等,采用单因素方差分析对各组间的差异进行统计分析。随后对这2个突变体和野生型菌株进行了RNA测序,分析2个单PilZ结构域蛋白突变导致的基因差异表达,在转录水平上综合分析2个蛋白对生物学表型的影响。结果 本研究发现这2个单PilZ结构域蛋白的突变均能导致铜绿假单胞菌的群集运动增强,感染生菜的能力减弱,对线虫的毒性和蛋白酶活性的影响则无显著变化。RNA测序结果表明,这2个蛋白突变均可导致铜绿假单胞菌中大量基因的差异表达,且有一些共同的差异基因。结论 铜绿假单胞菌的PA0012和PA4324突变均能增强其群集运动和减轻其对生菜的感染,为后续机制研究奠定了基础。

铜绿假单胞菌含Pilz结构域蛋白基因的克隆及原核表达

目的克隆铜绿假单胞菌含Pilz结构域蛋白基因并构建其原核表达载体,为进一步研究这七种含Pilz结构域蛋白是否为第二信使c-di-GMP潜在的受体分子奠定实验基础。方法提取铜绿假单胞菌PAO1基因组DNA,用PCR方法从中扩增出七种功能未知的含Pilz结构域蛋白基因,将其克隆到原核表达载体pET32a中,在大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定。结果成功扩增出七种含Pilz结构域蛋白基因并构建其原核表达载体,测序结果与NCBI数据库收录序列相一致。SDS-PAGE检验证明目的基因在大肠杆菌BL21中获得高效表达。结论从铜绿假单胞菌基因组中成功地克隆了七种含Pilz结构域蛋白基因,其构建的原核表达载体在大肠杆菌BL21中获得了高效表达。

Pilz继电器的控制与应用

本文介绍Pilz继电器在电路的监控、测量、延时等方面的控制及应用。

海假交替单胞菌(Pseudoalteromonas marina)pilZ基因缺失抑制厚壳贻贝附着变态

为探究海假交替单胞菌pilZ基因的缺失对生物被膜形成及突变菌生物被膜对厚壳贻贝幼虫附着变态的影响,本文通过同源重组构建pilZ基因缺失菌,分析了基因缺失菌生物被膜的细菌密度、膜厚、c-diGMP水平和胞外产物含量等特性的变化及其对厚壳贻贝幼虫附着变态的调控作用。结果表明:与野生型菌株相比,pilZ基因缺失菌形成的生物被膜膜厚增加、细菌数量增多,胞外产物中β-多糖、蛋白含量减少,抑制了厚壳贻贝幼虫的附着变态(p<0.05);而c-di-GMP水平、α-多糖和脂质含量无显著变化(p>0.05)。由此可见,海假交替单胞菌pilZ基因的缺失可调控细菌生物被膜形成和胞外产物包括β-多糖、蛋白质的含量,从而抑制厚壳贻贝幼虫的附着变态。

基于PILZ安全控制器的冶金急停系统

文章介绍了PILZ PSS3000技术原理,文章给出了某钢铁生产线急停系统详细的硬件设计过程.该方案简单、实用,对由其它类型PLC和上位机组成的系统的紧急停车及安全停车的实现有一定的参考价值。

PILZ可编程安全系统PSS3000在冶金自动化系统中的应用

文章介绍了PILZ PSS3000技术原理,以及某钢铁生产线急停系统详细的硬件设计过程。该方案简单、实用,对由其它类型PLC和上位机组成的系统的紧急停车及安全停车的实现有一定的参考价值。

Pilz安全产品在单张纸胶印机上的应用

一、引言 随着科技的发展和自动化技术的提高，用户对胶印机的品质要求也越来越高：在不断提高印刷质量的同时还必须具有更快的运转速度，对自动化水平的要求也相应提高，随之而来的是对安全的要求也越来越严格，特别是出口至欧洲国家的机器更要符合CE标准。

皮尔磁功能安全解决方案之 PILZ三维摄像安全系统SafetyEYE

为什么全球机械抓手装备世界霸主Zimmer集团的生产车间里,不需要防护围栏、光栅、压敏垫……?那是因为Safety EYE具有可变的系统结构和可定义的虚拟监测区域,可提供更加强大的响应性能。不论何时,只要点击一下鼠标,即可对Safety EYE配置器确定的区域进行修改和调整。即使是不同区域和功能的复杂组合也可轻松配置,投入使用,无需任何额外的软硬件。

坚持"德国制造"的精神——访德国Pilz有限公司销售总监WilliStange先生德国Pilz上海代表处首席代表王己妍小姐

与制造技术发达国家相比,中国制造业在工业安全领域的投入可谓差强人意。作为率先进入中国工业安全市场的供应商之一,Pilz不但在中国扮演着"安全大使"的角色,在培育市场的过程当中,将安全制造的观念、产品与安全解决方案引入中国,更重要的是,他们还引进了一种认真执著的"德国制造"精神。

Pilz自动化系统PSS 4000让安特卫普地铁更准时

随着铁路控制系统的老化,故障和损坏情况越来越频繁,经常导致地铁运行中断,从而对本地公共交通运输产生较大影响。Pilz基于软件的创新控制与安全解决方案在不干扰复杂外围电气设备的前提下,用达到SIL 4要求的自动化系统PSS 4000取代了安特卫普市中心三条地铁线路地下路口处过时的电子板。此后,中央火车站附近的地铁运行一直较为稳定可靠。

基于Pilz全套解决方案的叉车制造自动化装备群

工业安全自动化解决方案。为德国叉车、运输车和牵引车制造商Still公司综合管控1000平方米安全区。安全区设备由两个用来输送空输送架的输送段、两台竖立装置和一段长为32 m的缓冲线段组成两个装载站。Pilz公司ascal安全计算器让安全功能的计算更容易理解。这一工具根据所用组件计算器和设备中能够达到的PL(性能级)和SIL(安全完整性等级)安全功能,结果采用EN ISO 13849中要求的性能级别和EN/IEC 62061中要求的安全完整性等级进行验证。带有诸多监控安全功能的复杂现场设备需要远程解决方案,安全和自动化的PSS 4000系统成为最终选择,实现硬件、软件、网络组件以及实时以太网SafetyNETp的完美结合。

Pilz模块化安全继电器PNOZmulti简介及案例

Pilz安全继电器在我们公司的欧洲进口设备中应用很广泛,但一般都是些比较简单的双通道安全继电器,分别用于监控设备的急停开关、安全光栅等。而较为复杂的、可编程的模块化安全继电器则用得相对较少,我们部门只有两台DMG加工中心上有安装,另外三厂涂装的机器人也有用到。这种功能较为强大又少见的安全继电器,平常很少出现故障,设备维修人员也很少去关注。一旦出现故障,如果厂家的技术支持不到位,难免急得手忙脚乱。本文结合本部门的一些实际应用,简单介绍了Pilz模块化安全继电器PNOZmulti的硬件构成、模块类型、设备联机、程序备份以及故障案例。

皮尔磁功能安全解决方案之利用Pilz自动化系统PSS 4000实现电源系统的安全切换

所有医院都希望拥有100%稳定可靠的电源。即使供电系统有冗余设计,若无合格的安全管理,各电源之间的切换也可能使人员及设施面临危险。一体化合作伙伴White Technics在澳大利亚墨尔本市的一家医院使用了Pilz的模块化自动化系统PSS 4000。

多轴同步-Pilz伺服驱动在国内烟厂成功应用

工业安全自动化解决方案。在现代流程工业,尤其石油化工、冶金等领域,生产环境往往具有高温高压、易燃易爆等特征,一旦发生事故都是灾难性的,所以对安全系统的可靠性有非常高的要求。而且,由于生产过程的连续性,每停一次车给企业造成的损失也十分巨大,所以也需要安全系统具有良好的可用性。

Pilz PSS 4000自动化系统在哈里发港集装箱中转监控中的应用

在全球集装箱运输业务中,时间就是金钱;缩短装载/卸载时间意味着节约成本。阿布扎比酋长国哈里发港展示了智能装卸如何缩短货船和集装箱货轮的等待时间。现代集装箱港口的运营在本质上与复杂的生产工厂无异,正因为如此,Pilz的PSS 4000自动化系统在其久经考验的工业环境以外得到成功应用。在极端气候条件下,它为港口运营的各个领域实现了高效的自动化过程,并保证了安全的人机协作。

SadC合成的c-di-GMP信号通过PilZ和FlgZ调节铜绿假单胞菌的泳动能力

【目的】探究铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)鸟苷酸环化酶(diguanylate cyclase,DGC)SadC合成的环二鸟苷酸(cyclic di-GMP,c-di-GMP)信号与PilZ结构域受体间的信号传递关系,分析鉴定出特定PilZ结构域受体的调控功能和机制。【方法】SadC突变株和过表达菌株的构建及泳动能力分析;SadC过表达背景下,PilZ结构域受体突变各菌株的泳动表型分析和筛选;基因敲除和过表达解析筛选出的PilZ结构域受体功能;定点突变和遗传互补检测筛选出的PilZ结构域受体是否参与SadC合成c-di-GMP对泳动能力的调控。【结果】SadC通过影响鞭毛功能而非鞭毛形成抑制铜绿假单胞菌的泳动能力;PilZ结构域受体突变菌株筛选发现PilZ、FlgZ这2个受体参与了SadC介导的泳动能力抑制;功能分析发现ΔpilZ或ΔflgZ的泳动能力相比野生型PA14显著增强,而过表达PilZ或FlgZ则抑制了泳动能力;定点突变和回补实验发现PilZ第10位和FlgZ第140位氨基酸R对其介导SadC负调控泳动能力至关重要,多序列比对分析表明这些位点是其保守的c-di-GMP结合位点。【结论】SadC合成的c-di-GMP信号通过PilZ和FlgZ调控铜绿假单胞菌的泳动能力。

短短芽孢杆菌GZDF3中PilZ结构域基因的挖掘和糖基转移酶的原核表达

【背景】PilZ结构域是最早发现的环二鸟苷酸(Cyclic diguanylate,c-di-GMP)受体信号分子,与c-di-GMP结合后可以调控目标基因或者蛋白的活性,在细菌的生长过程中发挥着至关重要的作用,而短短芽孢杆菌中PilZ结构域的研究相对缺乏。【目的】挖掘短短芽孢杆菌GZDF3菌株中的PilZ结构域蛋白基因,并进行重组表达,为研究其功能奠定基础。【方法】从Pfam数据库中下载PilZ结构域模型,HMMScan软件扫描GZDF3全基因组序列,在保守结构域数据库(Conserved domain database,CDD)中分析蛋白保守结构域,Protein BLAST比对分析;采用ExPASy在线软件预测蛋白的基本理化性质;构建重组表达载体进行蛋白重组表达。【结果】GZDF3基因中存在5个含有PilZ结构域的蛋白编码基因,其中命名为Gene4836的基因经Protein BLAST比对分析显示其编码糖基转移酶,Gene1423为YcgR超家族蛋白编码基因,Gene1723编码透明质酸合成酶,属于糖基转移酶超家族2,其余Gene2571、Gene2956编码假定蛋白;Gene4836的编码产物分子量为24.08 kD,等电点为6.39,为酸性亲水性蛋白;C端有一个PilZ结构域;0.5 mmol/L乳糖诱导、30°C培养20 h,表达出一大小约为25kD的重组蛋白,与生物信息学预测结果相符。【结论】首次对短短芽孢杆菌含有PilZ结构域蛋白编码基因进行原核表达,并成功纯化出重组蛋白,为后续研究其功能奠定了基础。

猕猴桃溃疡病菌中PilZ结构域类蛋白在致病力和运动性上的功能研究

含PilZ结构域蛋白是目前最大的一类c-di-GMP受体,但该类受体在猕猴桃溃疡病菌(Pseudomonas syringae pv.actinidiae,Psa)中的功能及其作用机制都未见报道,揭示其在Psa中的功能及调控机制,为猕猴桃溃疡病的防治提供新思路。首先对PsaM228进行全基因组分析及序列比对,对PilZ结构域蛋白进行鉴定及c-di-GMP结合保守位点分析;同源重组法构建单基因缺失突变体,叶盘真空渗透、软琼脂平板和生长曲线测定法分别测定突变体与野生型的致病力、运动性及生长速率差异;qRT-PCR测定T3SS和鞭毛相关基因的转录量分析PSA_2195是否对Psa的致病力和运动性存在转录调控。结果显示PsaM228中共有8个含PilZ结构域蛋白,其中PSA_2195和PSA_1975没有与c-di-GMP结合的保守基序RxxxR和(D/N)xSxxG。8个含PilZ结构域蛋白存在功能分化,与野生型M228相比,△APsa_1116、△Psa_2195、△Psa_2203、△Psa_762、△Psa_4490和△Psa_4763的致病力显著减弱,△Psa_2195、△Psa_762、△Psa_1116和△Psa_3989的泳动和群集运动能力显著减弱,生长速率之间没明显差异。其中,PSA_2195通过在转录水平上调控鞭毛合成、T3SS等相关基因影响Psa的运动性和致病性。总而言之,本研究对PsaM228中的8个含PilZ结构域蛋白功能进行了系统研究,并重点揭示了PSA_2195调控运动性和致病性的分子机制。

无梁板桥的抗震分析

用有限元法对无梁板桥进行了抗震性能分析。

无梁板桥的结构优化

对无梁板桥进行了结构优化，由优化结果可获得正史无梁板桥主要尺寸的选择规律及推荐方案，为这种新型桥梁设计时各部分尺寸的选择提供了有价值的参考。