Pim-1蛋白激酶与3,5-二取代吡唑并吡啶衍生物的分子识别研究

具有丝/苏氨酸激酶活性的Pim-1蛋白激酶(Pim-1 protein kinase,PPK)的过度表达能导致肿瘤的发生,是一个有效的抗肿瘤药物作用靶点.对PPK与3,5-二取代吡唑并吡啶衍生物(3,5-Disubstituted pyrazolopyridine derivatives,DPD)的复合物进行了20 ns的分子动力学模拟,从能量角度分析了二者结合的主要驱动力以及I 185在识别过程中的重要作用,并对复合物体系在模拟过程中的构象变化进行了分析.结果表明,PPK的核心区的保守性是其发挥生理功能的重要机制,模拟结果对基于PPK抑制剂的药物设计具有一定参考作用.

PIM-1蛋白激酶在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨PIM-1蛋白激酶在乳腺癌组织、乳腺非典型增生组织及正常乳腺组织中的表达及生物学意义。方法利用免疫组织化学、Westernblot方法检测乳腺癌组织、乳腺非典型增生组织和正常乳腺组织中P1M-1蛋白激酶的表达水平。结果乳腺癌组织、乳腺非典型增生组织和正常乳腺组织中PIM-1蛋白激酶的阳性表达率分别为78．75％（63／80）、42．00％（21／50）、23．33％（7／30）；乳腺癌组织中PIM-1的蛋白水平明显高于癌旁正常乳腺组织（灰度值：118．807±19．99VS103．062±13．51，t=8．578，P〈0．05）；PIM-1蛋白激酶的表达与乳腺癌的P-TNM分期和淋巴结转移密切相关（P：0．004，P=0．003），与年龄和肿块大小无关（P=0．654，P=0．084）。结论PIM-1在乳腺癌中表达阳性率明显高于非典型增生的乳腺组织和正常乳腺组织，PIM-1可能是乳腺癌形成过程中的早期分子事件，其表达增强与乳腺癌的浸润性发展密切相关，有可能成为新的早期筛查和判断乳腺癌生物学行为的诊断指标。利用石蜡标本检测指标是可行的，具有方便，易得，经济的特点。

STAT3介导了血小板源性生长因子BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞Pim-1表达

目的:观察血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)是否可以诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)表达Pim-1及Pim-1对VSMCs增殖的影响,探讨STAT3信号分子在这一过程中的作用,为血管重建性疾病(VRD)的研究提供实验依据。方法:不同浓度PDGF-BB作用不同时间刺激体外培养的VSMCs,用细胞计数法检测增殖;用re-al-time RT-PCR检测Pim-1 mRNA表达水平;Western blotting检测STAT3的活性变化;用放线菌素D(actinomycinD)、AG490(JAK特异性抑制剂)及siRNA沉默Pim-1和STAT3进行干预。结果:PDGF-BB(20μg/L)作用VSMCs24 h,可以诱导细胞增殖,Pim-1沉默抑制了这一过程;正常未经处理的VSMCs Pim-1 mRNA表达量较低,不同浓度PDGF-BB(10μg/L～50μg/L)作用VSMCs 1 h,Pim-1 mRNA表达明显增加,其中以20μg/L最显著;用PDGF-BB(20μg/L)作用VSMCs不同时间(0.5 h～4 h),可显著上调Pim-1 mRNA表达,以0.5 h最显著。用actinomycin D及AG490预处理后Pim-1 mRNA表达随之降低。PDGF-BB可激活VSMCs中磷酸化STAT3水平,AG490和转染STAT3-siRNA可抑制STAT3的磷酸化以及相应的Pim-1 mRNA表达。结论:PDGF-BB可通过Pim-1调节VSMCs增殖;STAT3可能参与了PDGF-BB诱导的VSMCs Pim-1表达。

PIM-1基因沉默对前列腺癌细胞生长抑制作用的研究

目的:探讨RNA干扰(RNAi)沉默PIM-1基因表达对前列腺癌细胞体外生长的影响。方法:将RNAi重组质粒(PPIM1-shRNA-3)经脂质体介导转染前列腺癌PC-3细胞,用G418筛选稳定转染、PIM-1基因沉默的PC-3细胞。用空质粒载体(pRNAT-U6.1/Neo)稳定转染的PC-3细胞和正常培养的PC-3细胞作为对照,进行体外研究。利用细胞计数法分别检测3组PC-3细胞的增殖能力。利用流式细胞技术分别检测3组PC-3细胞的细胞周期及凋亡情况。结果:与两对照组PC-3细胞相比,PIM-1基因沉默组的PC-3细胞在培养48、72和96h的细胞计数显著减少(P<0.01),细胞周期中G1期细胞的比例显著升高,而S期细胞的比例显著降低(P<0.01),发生早期凋亡的细胞比例明显升高(P<0.01)。结论:PIM-1基因沉默可以使得PC-3细胞的细胞周期进程受阻,抑制细胞增殖,并诱发细胞凋亡。PIM-1可以作为前列腺癌基因治疗的有效靶点,具有潜在的临床应用价值。

Pim-1、RON在贲门癌中的表达及临床意义

目的:探讨Pim-1、RON在贲门癌组织中的表达及临床意义。方法:采用免疫组化方法分别检测18例贲门正常组织、21例贲门肠上皮化生组织、56例贲门癌组织中Pim-1及RON两种蛋白的表达情况,并分析二者与贲门癌临床病理学特征的关系。结果:Pim-1、RON在贲门正常组织、贲门肠上皮化生组织及贲门癌组织中的阳性表达率分别为5.6%、38.1%、78.6%和11.1%、33.3%、66.1%,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。Pim-1的表达与浸润深度、淋巴结转移相关(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤分化程度、TNM分期无关(P>0.05),RON的表达与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期相关(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤分化程度无关(P>0.05)。二者在贲门癌中的表达无相关性(r=0.085,P>0.05)。结论:Pim-1及RON可能参与贲门癌的发生发展,对贲门癌的诊疗及预后判断具有一定的临床价值。

原癌蛋白Pim-1激酶-GST融合蛋白的纯化及其激酶活性的分析

在大肠杆菌中成功表达了人原癌蛋白Pim 1激酶 GST融合蛋白 ,并对其激酶活性进行了分析。结果 :Pim 1 GST融合蛋白具有激酶活性 ,体外能使人工底物组蛋白H1发生磷酸化。其激酶活性发挥的适宜条件为pH7 5 ,10mmol/LMgCl2 的反应体系。过高的离子浓度和过高或过低的pH值均抑制其激酶活性的发挥。

Pim-1在肿瘤及相关信号通路中的作用

原癌基因蛋白质c—pim-1（Pim-1）在肿瘤组织中常表达增高且与肿瘤分期、预后密切相关。研究表明，Pim-1不仅参与调控细胞增殖和凋亡，在肿瘤转移过程中也发挥重要作用。多个信号传导通路可以调控Pim-1表达与活化，同时Pim-1也可影响通路中多个重要因子，其在肿瘤发生发展中作用十分广泛，已成为肿瘤治疗的潜在靶点。