基因PimM在金褐链霉菌SYAU0709中的表达

将纳他霉素生物合成基因簇中的基因PimM置于PermE之下进行整合性表达,克隆至大肠杆菌-链霉菌穿梭质粒载体pSET152中,构建表达载体PBJPIM,将PBJPIM接合、转移、转化金褐霉素产生菌——金褐链霉菌SYAU0709,通过摇瓶发酵和HPLC检测分析发现,有些转化子的金褐霉素产量比野生型菌株提高3～4倍,说明PimM基因在金褐链霉菌中有促进金褐霉素合成的作用,并且遗传性能稳定。

金褐链霉菌SYAU0709中AURJ3M基因的克隆和序列分析

以金褐链霉菌SYAU0709的DNA为模板,根据GenBank中公布的PimM的序列设计引物,通过PCR扩增方法从金褐链霉菌中扩增出约579bp的目的片段。将PCR产物克隆至PMD19-T Vector中,通过PCR扩增及测序分析发现,金褐链霉菌SYAU0709来源的AURJ3M基因和纳塔尔链霉菌PimM基因的序列具有95%的相似性。通过摇瓶发酵显示AURJ3M基因能促进金褐霉素的生物合成。