PinX1基因在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

目的分析Pin2/TRF1结合蛋白X1(Pin2/TRF1-interacting protein X1,PinX1)基因在非小细胞肺癌组织中表达,探讨PinX1基因在肺癌发生发展中的作用及其临床意义。方法对56例肺癌组织及癌旁正常组织应用半定量反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测其中的PinX1的mRNA表达水平,应用端粒重复序列扩增(telomeric repeat anplication protocol,TRAP)-酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测其中的端粒酶活性。结果 PinX1在不同病理类型的肺癌组织中表达无显著性差异,与临床分期和预后之间呈显著相关性,与端粒酶活性呈负相关。结论 PinX1的下调可能与肺癌的发生、发展过程中端粒酶激活有关。检测PinX1的表达水平对评价肺癌预后有重要的临床价值。

PinX1在食管鳞状细胞癌中的表达及其与临床病理特征的关系

目的探讨Pin2/TRF1结合蛋白X1(PinX1)与食管癌发生发展及与临床病理特征的关系。方法采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术方法(FCM)检测50例原发性食管癌患者的癌组织及食管切缘正常黏膜(距离癌5 cm以上)中PinX1的表达。结果 PinX1mRNA和蛋白在食管癌组织中表达显著低于食管正常组织(P<0.01)。且在食管癌中的表达与癌细胞分化程度、浸润深度及淋巴结转移呈负相关(P<0.05),但与患者年龄、性别无关(P>0.05)。结论 PinX1作为一种潜在的抑癌基因,其表达下调可能参与了食管鳞状细胞癌的发生和发展,是判定癌分化程度、浸润转移和判定预后的分子标志物。

PinX1的原核表达、纯化及其与hTERT的相互作用

目的:原核表达人Pin2/TRF1结合蛋白X1(PinX1),确定该蛋白与人端粒酶逆转录酶(hTERT)催化亚基的相互作用。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增PinX1基因的编码序列,克隆至pET-32a载体构建重组质粒pHisPinX1,经双酶切鉴定后转化大肠杆菌BL21并进行诱导表达,SDS-PAGE和Western印迹检测His-PinX1的表达;用His磁珠纯化His-PinX1,在人肾胚细胞293T内检测His-PinX1与hTERT的相互作用。结果:扩增得到980 bp的PinX1基因;Western印迹检测表明,相对分子质量约57×103的His-PinX1获得表达,且纯化的His-PinX1与hTERT具有相互作用。结论:表达并纯化得到了与hTERT相互作用的His-PinX1,为深入研究PinX1的功能奠定了基础。

1-苯基2-硫脲对Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼肿瘤多重耐药相关基因表达的影响

目的探讨去色素药物1-苯基2-硫脲(PTU)对Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼肿瘤多重耐药相关基因abcb4及其标记基因egfp表达的影响及可能机制。方法选取受精后24 h(24 hpf)Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼胚胎做药物暴露实验,分为Control、PTU以及PTU+RES 3个组;持续用药96 h,通过荧光显微镜拍照检测各组斑马鱼胃肠道荧光强度;RT-qPCR检测abcb4、egfp及pxr基因mRNA,Western Blot检测abcb4、egfp蛋白(Abcb4、eGFP)的表达,罗丹明B积累实验检测不同组Abcb4功能。结果与Control组相比,PTU组Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼荧光表达增强(P<0.01),PTU+RES组荧光变化不明显(P>0.05);PTU组abcb4、egfp及pxr基因mRNA表达均增加(P<0.005),PTU+RES组pxr基因mRNA表达增加(P<0.005),abcb4、egfp基因mRNA表达无明显变化(P>0.05);PTU组abcb4、egfp蛋白表达均增加(P<0.005),PTU+RES组无明显变化(P>0.05);PTU组Abcb4功能增强(P<0.01),PTU+RES组无明显变化(P>0.05)。结论PTU可诱导Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼abcb4和egfp表达增加,核因子pxr可能参与PTU对abcb4和egfp的诱导调节过程,在应用PTU去色素处理的Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼进行药物筛选时需注意PTU对abcb4和egfp表达的影响。

Bax、Bag-l、Bcl-2在乳腺肿瘤组织中的表达及意义

目的:探讨Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2结合抗凋亡基因(Bag-1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)在乳腺肿瘤组织中的表达及临床意义。方法:选取本院乳腺浸润性导管癌及其癌旁组织各85例、乳腺导管内癌及其癌旁组织各70例,采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(S-P)免疫组化法检测Bax、Bag-l、Bcl-2蛋白在各组织中的表达。结果:Bax蛋白在浸润性导管癌组织中的表达与癌旁正常组织及导管内癌组织比较,差异无统计学意义(P>0.05);Bag-1、Bcl-2蛋白在浸润性导管癌组织中的表达高于在癌旁正常组织,差异具有统计学意义(P<0.05);浸润性导管癌组织中Bag-1、Bcl-2蛋白阳性表达率明显高于导管内癌癌组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:乳腺癌组织中Bag-1、Bcl-2蛋白表达高于癌旁正常组织,在浸润性导管癌中的表达高于导管内癌组织,Bag-1、Bcl-2高表达可作为判断乳腺疾病良、恶性及预后的指标之一。