马氏珠母贝外套膜中央膜与边缘膜荧光定量PCR分析中内参基因的筛选

为筛选能在马氏珠母贝外套膜边缘膜与中央膜区域稳定表达的内参基因,应用荧光定量PCR技术,对3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、β-肌动蛋白(β-actin)、胆色素原脱氨酶(PBGD)、微管蛋白(TUB)、TATA盒结合蛋白(TBP)、磷脂酶A2(PLA-2)、葡萄糖苷酶(GUSB)、18S核糖体r RNA(18Sr RNA)等8个常用的内参基因在马氏珠母贝外套膜边缘膜与中央膜区域的表达情况进行分析,并利用ge Norm、Norm Finder、Best Keeper及Ref Finder软件对8个内参基因的表达稳定性进行分析。结果表明:8个内参基因均可获得特异性扩增产物,但稳定性各异,其在外套膜边缘膜和中央膜区的表达稳定性顺序依次为PBGD/TBP>TUB>GUSB>18Sr RNA>PLA-2>GAPDH>β-actin;在荧光定量PCR中,PBGD和TBP在马氏珠母贝外套膜边缘膜和中央膜区的表达比较稳定,为研究贝壳矿化机制中理想的内参基因。