Effects of Sucrose on Total RNA Concentration during Formation of Microtubers of Pinellia ternata in vitro

[ Objective] This study aimed to investigate the variation rule of total RNA concentration during formation of microtubers of PineUia ternata induced by sucrose. [ Method ] Plantlets of P. ternata were used as experimental materials. Total RNA concentration was determined with spectrophotometer, and the variation of total RNA was analyzed before and after formation of P. ternata microtubers treated with different concentrations of sucrose using DDRT-PCR technology. [ Result] Total RNA concentration of P. ternata treated with different concentrations of sucrose varied greatly, which showed an upward trend in the first 15 d, de- clined from 15~ d to 25th d, and slightly raised from 25＇h d to 30＇8 d. Microtubers formed under various sucrose treatments showed an increase in RNA concentration after induction, and it was assumed that the treatment of high concentrations of sucrose might have activated the expression of development-related＇ genes in P. ter- nata microtubers. [ Conclusion] This study provides the basis for revealing the related gene expression information and molecular mechanism during formation of P. ternata microtubers induced by sucrose.

高温胁迫下半夏倒苗前后内源激素的变化

目的:探讨在高温胁迫下半夏倒苗前后内源激素含量的变化,从而为延缓半夏倒苗提供信息。方法:在半夏植株高15 cm左右时,给予(30±1)℃的高温胁迫,于不同的胁迫处理天数分别测定半夏叶片、叶柄和块茎中内源激素(ABA,JA,GA3,ZR,IAA)的含量。结果:随着高温胁迫时间的延长,半夏叶片、叶柄、块茎中ABA和JA的含量明显增加。半夏叶片、叶柄中IAA的含量明显降低,而块茎中IAA的含量降低却不明显。高温胁迫后,ZR的含量逐渐下降。半夏叶片中GA3含量明显上升,但是叶柄、块茎中GA3含量却下降。结论:在高温胁迫下,内源激素ABA,JA,IAA,ZR和GA3在半夏倒苗前后起着重要的调控作用。

半夏提取液对大豆蚜虫生物活性及活性剂量的初步筛选

以半夏的球根茎为试材,基于均匀设计法研究了半夏球根茎的不同提取液对大豆蚜虫的触杀和拒食作用。结果表明:乙醇浸提液对大豆蚜虫具有较高的触杀作用。水蒸气蒸馏液对大豆蚜虫具有较强的拒食作用。乙醇浸提液对大豆蚜虫48h的致死中浓度(LC50)为9.7439g/L,水蒸气蒸馏液对大豆蚜虫24、48h的拒食中浓度(AFC50)分别为8.3756、7.9162g/L。丙酮浸提液对大豆蚜虫的触杀和拒食作用不显著。半夏球根茎的乙醇浸提液和水蒸气蒸馏液对大豆蚜虫54h的同时触杀和拒食活性质量浓度初步筛选结果表明:乙醇浸提液24.1955g/L和水蒸气蒸馏液23.0230g/L联合使用对大豆蚜虫同时触杀和拒食活性作用最好,死亡率达100%。

利用等位基因特异PCR鉴别虎掌南星及其部分混淆品

目的:建立中药材虎掌南星的分子鉴定方法,为天南星药材质量控制提供依据。方法:GenBank中下载半夏属、天南星属、犁头尖属物种的叶绿体rpl20基因序列,利用DNAMAN进行比对分析,发现半夏属和虎掌南星的SNP位点,并设计鉴别引物Ptrpl94F,Ptrpl708R和Pprpl148F,Pprpl484R,采用等位基因特异PCR方法对虎掌南星、半夏、水半夏3个物种的10个样品进行扩增。结果:引物Pprpl148F和Pprpl484R仅对虎掌南星扩增333 bp条带,半夏、水半夏均无扩增,能准确鉴别虎掌南星。引物Ptrpl94F和Ptrpl708R对半夏、虎掌南星均扩增611 bp条带,水半夏无扩增。结论:本实验建立的等位基因特异PCR方法能准确区别出虎掌南星和半夏、水半夏,为虎掌南星及半夏的正确用药提供了保障。

半夏药材中蛋白质IEF电泳图谱的研究

目的通过对半夏及其近缘植物的蛋白质电泳图谱比较,研究半夏药材的电泳鉴别方法。方法应用等电聚焦(isoe lectrofocus ing,IEF)技术,对不同产地半夏及其近缘植物块茎进行比较。结果半夏具有稳定的IEF电泳图谱,显示具有8条特征蛋白质带,并测定了其等电点(P I)值,半夏与其几种近缘植物的IEF谱有明显的区别。结论半夏IEF电泳图谱可作为半夏药材的鉴别依据,半夏特征蛋白质的P I值为半夏的鉴定和蛋白质分离纯化提供了参数。

不同叶型半夏蛋白质含量测定

目的研究并比较不同叶型半夏蛋白质含量。方法采用分光光度计测定药材中蛋白质含量。结果不同生境条件下,芍药叶型半夏间蛋白质含量差异明显,桃叶型半夏蛋白质含量差异不明显;同一生境条件下,芍药叶型半夏蛋白质含量高于桃叶型。结论半夏栽培生产中,应根据栽培生产需要提高种子纯度。

不同光照强度对半夏生长的影响

研究不同光照强度对半夏的叶面积、叶绿素含量、叶片的可溶性糖含量及不定根数量的影响。结果表明:在全光照处理下,半夏植株矮小,不定根数量较多;在遮荫95%处理下,半夏叶面积、叶绿素相对含量、叶片可溶性糖含量和不定根数量都是最高的,且叶面积、叶片可溶性糖含量和不定根数量达到极显著水平;在遮荫99%处理下,半夏叶面积、叶绿素相对含量、叶片可溶性糖和不定根数量都较低。因此,遮荫95%对半夏生长最有利。

三叶半夏组培苗的病毒检测

组织培养阶段植物细胞中的病毒含量较低,难以用常规方法进行可靠检测。本研究采用DAS-ELISA、RT-PCR和核酸杂交三种方法对不同来源的12个三叶半夏(Pinellia ternata(Thunb.)Breit.)组培苗样品中的黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)进行比较检测。结果显示:经DAS-ELISA检测,4个样品携带CMV,4个样品携带SMV,1个样品同时携带2种病毒;经RT-PCR检测,5个样品携带CMV,6个样品携带SMV,1个样品同时携带2种病毒;经核酸杂交检测验证,其结果与RT-PCR的检测结果一致。可见,对于三叶半夏组培苗,DAS-ELISA检测灵敏度不够高,需用灵敏度更高和特异性更强的核酸杂交方法来对其进行病毒检测,确保检测结果准确可靠。

半夏炮制品处方应付及处方剂量分析

目的:对半夏炮制品处方应付和处方剂量进行调查分析,为规范半夏炮制品的临床应用提供参考。方法:查阅全国各地中药饮片炮制规范,对半夏炮制品和处方应付进行梳理;以我院2016年7月1日~2017年6月30日的中药饮片处方为例,对法半夏、姜半夏、清半夏处方用量进行分析,比较不同剂量区间3种半夏炮制品的处方分布及构成比。结果:全国各地中药炮制规范共收载9种半夏炮制品,不同地区半夏炮制品处方应付不尽相同;我院法半夏、姜半夏、清半夏3种半夏炮制品超量应用现象比较常见,占24. 02%。结论:半夏炮制品处方应付全国各地尚不统一,处方剂量超量现象较常见,须加强临床应用管理。

川半夏生长期氮、磷、钾营养吸收特性研究

目的：在栽培条件下研究川半夏对氮、磷和钾营养吸收特性，为川半夏高产栽培和合理施肥提供依据。方法：定期采集川半夏s-29和s-33样品，分别测定其各自地上和地下部分氮、磷、钾含量，研究其氮、磷、钾分配和累积规律。结果：川半夏不同生育时期各部分对氮、磷、钾的吸收量不同，其中对钾的吸收量最大，对磷的吸收量最少；在半夏大面积“倒苗”的后，各部分氮、磷和钾含量以及累积总量总体上高于非“倒苗”期。生长期间半夏地上和地下部分磷、钾吸收量间相关系数均达显著水平（P〈0．05），且地下部分磷和氮吸收量问相关系数也达到显著水平（P〈0．05）。半夏生长过程中，每生产100kg千品，大约需要吸收氮5．02～5．64kg，P2O32．44～2．56kg，K2O11．62—13．49kg。结论：川半夏在大田栽培中应当施足底肥，并在6月中旬和8月下旬前后及时追施氮、磷和钾肥，并适当提高钾的比例。追肥方式可采用地下浇施和叶面喷施相结合的方式，川半夏地下部分对磷肥和氮肥的吸收有相互促进的效应。