半夏提取物对淡色库蚊幼虫的杀虫活性

通过不同萃取相(石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水)提取半夏(Pinellia ternata)的活性物质,采用浸液法测定半夏提取物对淡色库蚊(Culex pipiens pallens)幼虫的杀虫活性。结果表明,半夏甲醇提取物对淡色库蚊幼虫具有显著的毒杀活性;在0.5 mg·mL^(-1)浓度处理下,石油醚、氯仿萃取相对淡色库蚊幼虫具有显著的杀虫活性,致死率在50%以上。对石油醚、氯仿萃取相进行室内毒力测定,LC50分别为0.21和0.31 mg·mL^(-1)。研究结果可为新型植物源农药综合利用提供参考。

半夏多糖的分离提取及其药理活性研究进展

半夏作为我国传统的大宗药材,具备祛湿化痰、降逆止呕以及消痞散结的功效。半夏富含生物碱、凝集素、多糖和有机酸等多种活性成分,多糖作为半夏的主要活性成分,有抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗炎及免疫调节等多种药理活性。从半夏多糖的分离提取、结构表征、药理活性角度出发,系统综述半夏多糖的研究现状,以期为未来半夏多糖广泛应用于各个领域提供理论基础。

半夏提取物与Bt对小菜蛾的联合毒力研究

为减缓小菜蛾对Bt的抗药性,提高防效,以半夏提取物为增效剂与Bt进行混配,通过室内毒力测定,筛选二者的最佳混配比例。结果显示,72 h内,半夏提取物和Bt对小菜蛾3龄幼虫的致死中浓度(LC_(50))分别为388.354 g/L和0.0687 g/L。半夏提取物和Bt分别按LC25致死浓度进行不同体积比混配,毒力测定结果显示,复配比例为2∶8和1∶9时,毒效比率分别为1.32和1.36,均大于1.25,共毒系数分别为231和275,均大于200。半夏提取物对Bt具有明显增效作用,具有开发为Bt混配制剂的潜力。

半夏乙醇提取物体外抑菌实验的初步研究

探讨半夏乙醇提取物对常见微生物(细菌、酵母菌、霉菌)的抑菌效果,以得出抑菌谱。分别用75%、95%乙醇对生半夏进行回流提取并用琼脂扩散法和液体混合法测定了半夏提取液对一系列供试细菌和真菌的最低抑菌浓度(MIC)。75%乙醇提取半夏的提取率为5.24%,而95%乙醇提取半夏的提取率为2.73%;75%乙醇半夏提取液对供试细菌和真菌存在一定的抑制作用,对各种菌的最低抑菌浓度分别为:大肠杆菌25mg/mL,恶臭假单胞菌12.5mg/mL,藤黄微球菌12.5mg/mL,金黄色葡萄球菌12.5mg/mL,枯草芽孢杆菌10mg/mL,酿酒酵母10mg/mL,裂殖酵母20mg/mL,黑曲霉菌12.5mg/mL,甜瓜枯萎霉菌25mg/mL。半夏醇提液具有广谱的抗菌活性,可以有效的抑制革兰氏阳性和革兰氏阴性菌,对真菌的抑菌作用也有一定的效果。

半夏基因组DNA的提取及鉴定

目的探讨不同DNA提取方法对半夏DNA质量及RAPD-PCR标记结果的影响。方法对用不同方法提取的DNA进行电泳、紫外吸收A260/A280和RAPD-PCR分析。结果不同方法提取的DNA质量和产率差异不显著,对RAPD结果无影响。结论半夏在DNA提取前加入氯仿对材料预处理,可获得较高质量的DNA进行PCR扩增。

半夏药材炮制品DNA提取方法的优化及分子鉴定

目的:优化炮制半夏基因组DNA提取方法并进行市售炮制药材的分子鉴定。方法:以半夏药材炮制品为试验材料,对CTAB水浴后沉淀试剂进行筛选,并优化样品用量、沉淀试剂和裂解时间3个参数,建立半夏炮制品DNA提取方法;采用该法提取市售13份姜半夏和法半夏基因组DNA,用基于ITS2序列的PCR扩增法进行分子鉴定。结果:以CTAB水浴后加入甲醇处理可有效促进DNA沉淀,起始半夏药材0.5 g、水浴裂解时间1 h即可快速高效获得基因组DNA。对所提取DNA样品进行PCR扩增,所有样品全部成功测序。相似性搜索法分析表明,13份样品中10份为掌叶半夏,3份为半夏。结论:该研究建立了简易快速的半夏药材炮制品DNA提取技术,所提DNA满足半夏药材的分子鉴定要求。该结果也提示市售半夏药材混伪情况较多,值得重视。

半夏提取物对桃蚜生物活性的研究

用石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇提取半夏干粉中的活性物质,研究不同溶剂提取物对桃蚜的生物活性。结果表明,3种溶剂半夏提取物对桃蚜均有较好的拒食、毒杀和内吸活性,其中无水乙醇提取物的效果最好;100.0 mg/ml 3种溶剂半夏提取物处理48 h对桃蚜的拒食率和毒杀校正死亡率分别在90.00%和40.00%以上;半夏提取物浓度越高、作用时间越长,对桃蚜的生物活性越好。

半夏块茎高质量总RNA提取的一种有效方法

目的：探讨一种有效提取半夏块茎总RNA方法。方法：以半夏试管苗的叶片、叶柄和块茎为试验材料，将常规的异硫氰酸胍提取植物总RNA的方法做了改进，在RNA提取缓冲液中加入高浓度的β-巯基乙醇以除去酚类物质，用酸酚／氯仿抽提去除蛋白质污染，以及利用异丙醇和醋酸钠联合沉淀多糖等手段，建立了一种简单实用的从富含多酚类和多糖等物质的植物材料中提取总RNA的方法。结果：该方法所提RNA的A260/A230均大于2．0，A260/A230的值为1．7～2．0，电泳条带清晰，RNA完整性好。结论：利用本方法提取的半夏试管小块茎总RNA具有很高的质量和纯度，且得率很高，完全满足后续的DDRT-PCR和反向Northern blotting等分子生物学研究，而且简单经济、实验结果稳定，重复性好，适合富含多酚类和多糖等物质的药用植物组织总RNA的提取。

半夏叶片总RNA四种提取方法及效果的比较

目的 针对三叶半夏成熟叶片化学成分复杂，富含多糖、酚类及其他多种化学物质的特点，选择优化一种简便、经济、高效的半夏成熟叶片高质量总RNA提取方法。方法 用4种不同的RNA抽提方法如异硫氰酸胍法、皂土法、CTAB—LiCl法和改进的SDS／酚法提取总RNA，通过电泳、紫外分光光度计检测以及RT-PCR验证等对提取结果进行分析比较。结果 4种方法均能从半夏成熟叶片中提取到总RNA。其中皂土法的提取过程只需3～4h，是其他3种提取方法所用时间的一半。提取1g叶片的成本只有其他3种方法的1／13～1／14。此法提取的总RNA18S、28S带型清晰无弥散，完整性好，无严重的蛋白质和其他杂质污染，A260/A280为1．8～2．O，A260／A230大于2．O，且总RNA的产率高，为365．744μg／g鲜重，提取的总RNA适用于RT-PCR试验。结论 皂土法提取的RNA完全适用于DDRT-PCR、Northern blotting、cDNA文库构建等分子生物学研究，是一种快速、经济，适于抽提半夏总RNA的好方法。

不同采收时间半夏浸出物及粗多糖的含量测定

目的：比较不同采收时间半夏浸出物及粗多糖的含量变化,为确定半夏适宜的采收时间提供依据。方法：浸出物含量测定采用药典规定的水溶性浸出物中的热浸法;粗多糖含量测定采用硫酸-苯酚法。结果：10~11月份所采收的五批药材的水溶性浸出物含量分别为：26.85%、26.40%、26.12%、25.55%、26.39%;粗多糖含量分别为：10.90%、9.37%、10.99%、11.05%、12.16%。结论：半夏集中倒苗期其水溶性浸出物及粗多糖含量较高。

半夏叶片总RNA的提取研究

[目的]为了获得高产高质的半夏RNA,为半夏分子生物学方面的研究打下基础。[方法]采用改进的CTAB法提取半夏叶片RNA。用紫外分光光度计测定所提RNA样品的OD260、OD280和OD230的值,用RNA浓度计算公式:RNA(μg/μl)=OD260×40×稀释倍数/1000,求出RNA浓度。[结果]紫外分光光度计的测定结果表明:OD260/OD280介于1.7～2.0之间。用改进的CTAB法提取的半夏叶片RNA质量较好,经变性胶电泳后,有较明显的3条带,分别是28S、18S和5S,28S、18S清晰可见,5S稍有弥散,但在亮度上28S与18S差别不大。[结论]此方法简便易行,成本较低,适合于富含多糖、多酚植物材料的RNA提取。

半夏提取物调节Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达诱导白血病细胞凋亡

背景:温热中药半夏拥有可人工广泛种植、易提纯等优势,其提取物可抑制慢性髓系白血病、急性髓系白血病、急性T淋巴白血病细胞增殖,但是作用机制尚不明确。目的:探讨中药半夏提取物对3种白血病细胞凋亡的作用机制。方法:慢性髓系白血病细胞株(K562)、急性髓系白血病M3细胞株(HL-60)、急性T淋巴白血病细胞株(C8166)在半夏提取物5种浓度梯度中分别作用24,48,72 h,采用CCK-8法评估3种白血病细胞增殖情况并从中筛选出有明显抑制作用的中(300 mg/L)、高(500 mg/L)质量浓度。然后进一步采用流式细胞术检测3种白血病细胞早期凋亡发生率,采用RT-PCR与Western blot检测Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA及蛋白水平。结果与结论:①5种质量浓度的半夏提取物作用3种白血病细胞具有细胞增殖抑制作用,中(300 mg/L)、高(500 mg/L)质量浓度半夏提取物增殖抑制率较高,与低质量浓度组(100 mg/L)、对照组比较差异有显著性意义(P<0.01);②中、高质量浓度半夏提取物可诱导3种白血病细胞早期凋亡;③中、高质量浓度半夏提取物可以下调3种白血病细胞的Bcl-2 mRNA表达,上调Bax及Caspase-3 mRNA表达(P<0.05;P<0.01);④中、高质量浓度半夏提取物作用72 h后,K562、C8166细胞的Bcl-2蛋白条带明显减弱,而HL-60细胞无减弱变化;Bax及Caspase-3蛋白条带明显增强;⑤结果表明,半夏提取物能有效抑制髓系白血病、T淋巴细胞白血病细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与其调节Bax/Bcl-2、Caspase-3蛋白表达有关。

半夏生物碱提取方法及抗氧化性研究

研究了不同提取方法对半夏生物碱含量的影响,并对半夏生物碱的抗氧化性进行分析。结果表明,最佳提取方法为热浸,最佳提取时间为1 h,最佳温度分为35~40℃,稳定性、精密度和回收率分别为0.341%、0.052%和102.56%。半夏DPPH自由基清除活性显著高于超氧自由基清除活性和羟自由基清除活性。该提取方法简单、省时、稳定,该方法可以应用于大学生综合性实验中。

半夏化感物质浸提液对8种作物的化感效应

为探明半夏连作障碍的化感物质释放途径和构建半夏高效种植制度提供参考,以半夏、生菜、莴笋、高粱、决明子、小麦、油菜和玉米8种作物为受试材料,采用生物测试方法研究半夏植株腐解液、半夏根系分泌物浸提液和半夏根际土壤浸提液对受试材料的化感效应。结果表明:半夏植株腐解液对受试材料均有强烈的化感抑制作用,半夏根际土壤和根系分泌物浸提液对受试材料有微弱的化感促进或抑制作用,3种浸提液化感作用强度为半夏植株腐解液>半夏根系分泌物浸提液>半夏根际土壤浸提液,半夏植株腐解液含有丰富的化感物质,可能是半夏自毒物质的主要来源之一,是半夏化感物质研究的可靠基础材料。半夏化感物质对受试材料的化感抑制作用强度表现为玉米>生菜>莴笋>小麦>高粱>油菜>半夏>决明子,决明子是8种受试材料中最耐化感胁迫的作物,可以用于构建半夏高效种植体系。在试验设置的浓度范围内,半夏化感物质对受试材料的抑制作用与其质量浓度呈正比,其中0.01g/mL是半夏自毒作用临界值,大于0.02g/mL就会产生强烈的自毒作用。

生半夏石油醚部位化学成分的GC-MS分析

目的:研究生半夏石油醚部位化学成分。方法:运用气相色谱-质谱(GC-MS)技术首次对生半夏石油醚提取物的化学成分进行分析。结果:经气相质谱分析工作站NIST2005谱库检索,并参考相关文献,确认了34个化合物,采用归一化法确定各成分的相对含量。结论:生半夏石油醚部位化学成分主要包括脂肪烃、脂肪酸、酯类、β-谷甾醇等,占汽化物总含量的60.89%。利用GC-MS技术,首次对生半夏石油醚部位的化学成分进行初步分析,为其进一步研究提供了实验性依据。

掌叶半夏有效提取物对宫颈癌大鼠癌组织中Survivin、Caspase-3及Caspase-7的影响

目的:探讨掌叶半夏有效提取物对宫颈癌大鼠癌组织中Survivin、Caspase-3、及Caspase-7的影响。方法:选取Wistar大鼠(雌性)50只,随机选10只为对照组,其余40只建宫颈癌模型,建模成功大鼠(n=36)随机分为模型组、阳性对照组、观察组各12例。模型组未进行任何治疗,阳性对照组行顺铂2mg/kg腹腔注射,观察组用掌叶半夏有效提取物40mg/kg灌胃,均1次/d,8周后处死大鼠,取宫颈癌组织体积进行测量,并对癌组织中Survivin、Caspase-3及Caspase-7的表达进行检测。结果:与模型组比较,观察组及阳性对照组体积均明显减小(P<0.01);观察组体积与阳性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组与模型组比较,Survivin蛋白表达明显降低,Caspase-3及Caspase-7蛋白表达明显升高(P<0.05);观察组Survivin、Caspase-3及Caspase-7蛋白表达与阳性对照组比较(P>0.05);癌病灶体积与Survivin蛋白表达呈正相关,与Caspase-3及Caspase-7蛋白表达呈负相关。结论:掌叶半夏有效提取物能使宫颈癌大鼠病灶的体积缩小,其作用机制之一可能是能够降低癌组织Survivin表达、升高Caspase-3、Caspase-7表达等细胞凋亡蛋白所致。

半夏生物碱提取工艺的研究

对半夏生物碱提取工艺进行了比较研究,结果表明,氯仿提取法和超声波辅助提取法的生物碱提取率没有显著性差异(t=2.109;df=10,p=0.061).这两种方法各有优缺点,氯仿提取法的生物碱提取率(0.0456±0.0003%)稍高,且提取率较稳定(SD仅为0.0002944),但所需提取时间较长.超声波辅助提取法大大缩短了提取时间,但生物碱提取率(0.0451±0.0005%)略低,提取率波动范围稍大(SD为0.0005007).

基于网络药理学和分子对接研究半夏散治疗慢性咽炎的作用机制

目的基于网络药理学及分子对接研究半夏散治疗慢性咽炎的作用机制。方法用LSP和TCMSP预测半夏散已知有效成分的作用靶点和慢性咽炎疾病靶点,使用Cytoscape3.6.1软件对半夏散进行中药—有效活性成分—靶点网络构建,STRING10.5数据库绘制蛋白互作(PPI)网络,采用Cytoscape3.6.1软件进行GO富集分析,KEGG通路注释分析,以及利用AutoDock软件进行分子对接。结果半夏散中有101个主要有效活性成分,作用于234个靶点蛋白;慢性咽炎有2289个靶点,得到共同靶点117个。通过KEGG通路分析得到20个有效信号通路,GO富集显示15个生物过程、15个分子功能、15个细胞成分。有3个活性成分与2个关键靶点蛋白有效结合。结论半夏散治疗慢性咽炎的作用机制是通过对炎症反应进行干预和调节,并对咽部内皮细胞的代谢和功能损伤进行修复。

生半夏化学成分的研究

目的 研究生半夏的化学成分。方法 采用正相硅胶、MCI、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和制备液相等方法,进行化合物的分离纯化,并根据化合物的理化性质和MS、NMR等波谱数据进行结构鉴定。结果 从半夏体积分数60%乙醇提取物中分离鉴定了16个化合物。分别为山柰酚-3-O-D-芸香糖苷(1)、肌苷(2)、拉卡那利I(3)、(2E,4E,1′S,2′R,4′S,6′R)-二氢红花菜豆酸(4)、色氨酸(5)、1-油酰-3-O-β-D-吡喃半乳糖基-sn-甘油(6)、6′-O-亚油酰蔗糖(7)、6′-O-棕榈酰蔗糖(8)、姜糖脂C(9)、(2S)-1-O-6′-O-(α-D-异硫氰酸酯)-β-D-异硫氰酸酯-3-O-十六烷酰甘油酯(10)、1-棕榈酰基-3-O-β-D-半乳糖基甘油酯(11)、天师酸(12)、4-(2-羟乙基)苯酚(13)、苯丙氨酸(14)、3-苯基乳酸(15)、反式桂皮酸(16)。结论 14个化合物1、2、3、4、6~13、15~16为首次从半夏属中分离鉴定。

基于Box-Behnken响应面法的半夏多糖双水相提取工艺优化研究

目的:采用Box-Behnken响应面法优化半夏多糖双水相提取工艺。方法:基于单因素试验,选取超声时间、聚乙二醇(PEG)6000用量和(NH)SO用量为考察指标,将分配系数、相比和提取率的总评归一值作为响应值,以Box-Behnken响应面法优化提取工艺。结果:最佳的半夏多糖双水相提取参数为超声时间44 min,PEG 6000用量1.3 g,(NH)SO用量2.3 g;基于该提取条件测得多糖平均提取率为44.76%,OD值平均值为0.8761,偏差为1.69%。结论:采用PEG 6000-(NH)SO双水相体系分离半夏多糖,其含量高于传统醇沉法,并具有操作简便、成本低、有机溶剂使用少等优点,具有良好的应用前景。