精胺预处理对离体灌流大鼠心肌缺血/再灌注损伤及细胞凋亡的影响

目的探讨精胺预处理对离体灌流大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响及其可能的抗凋亡作用。方法应用Langehdorff离体灌流大鼠心脏复制模拟心肌缺血/再灌注损伤模型。24只大鼠随机分为3组,每组8只:对照组(Con-trol)、缺血/再灌注组(IR)、精胺干预组(Spermine)。比色法测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)活力,心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性及心肌丙二醛(MDA)含量;多导生理记录系统记录心脏功能;HE染色光镜下观察心肌形态学变化;三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测心肌梗死面积;透射电镜和TUNEL方法检测细胞凋亡;免疫组化检测心肌Fas与Bcl-2蛋白的表达。结果 (1)与对照组比,IR组冠脉LDH漏出明显增多、心肌组织中MDA水平增加、SOD活性降低(P<0.01);心功能明显下降(LVDP,HR,CF均低于对照组,P<0.05);光镜下可见心肌细胞呈凝固性或带状坏死。与Control组比,IR组心肌梗死面积及心肌细胞凋亡率明显增加(P<0.01);心肌Fas蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调。透射电镜下心肌细胞核染色质浓缩、凝聚且边集,染色质在核膜周边聚集形成新月形,线粒体嵴排列紊乱。(2)与IR组比,Spermine组冠脉LDH漏出减少,心肌组织中MDA减少,SOD增加(P<0.01);心功能有明显改善(LVDP,HR,CF均明显高于IR组,P<0.05);光镜下心肌细胞结构清晰。Spermine组与IR组比心肌梗死面积及心肌细胞凋亡率均明显降低(P<0.01);心肌Fas蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调;电镜下可见心肌肌节结构清晰,线粒体嵴完整、基质致密,未见核染色质凝聚。结论外源性精胺能明显减轻离体灌流大鼠心肌缺血/再灌注损伤,其机制可能与精胺抑制细胞凋亡有关。

幽门螺杆菌诱导的胃黏膜上皮细胞凋亡机制的研究进展

胃上皮细胞不断发生凋亡和增殖,两者协同作用,从而维持了胃上皮的完整性。目前,已发现多种凋亡诱发因素。在幽门螺杆菌(HP)诱发的胃炎中,虽然上皮细胞凋亡和增殖均增加,但由于细胞凋亡占优势,破坏了胃上皮细胞的完整性而导致相关疾病的发生,其凋亡的发生机制复杂并且相互影响。由幽门螺杆菌引起的胃黏膜上皮细胞凋亡包括内源性和外源性通路,存在于这两种通路中的具有代表性的因子包括Toll样受体4、Bcl-2家族、肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体/受体和Fas/FasL等。

平阳霉素对人脐静脉内皮细胞系ECV304的抑制作用及其机制的实验研究

目的:探讨平阳霉素对人脐静脉内皮细胞系ECV304的抑制作用及其相关机制。方法:用不同浓度的平阳霉素作用ECV304细胞不同时间,以MTT法比较平阳霉素作用24、48及72 h后的细胞抑制率,应用DNA电泳实验、流式细胞术分析细胞凋亡、坏死情况、细胞周期及Fas、Bcl-2蛋白的表达。结果:MTT法显示随平阳霉素浓度升高和作用时间的延长,细胞生长抑制越明显;DNA电泳证实合适浓度平阳霉素作用下细胞发生凋亡,过高浓度细胞则发生坏死;流式细胞术显示细胞凋亡率和坏死率随药物浓度和作用时间增加而增高,过高浓度细胞坏死占主导;平阳霉素各浓度作用24 h后,G2-M期百分率增高,S期百分率降低,G0-G1期百分率无明显变化;Fas表达随药物浓度增加而递减,Bcl-2表达随药物浓度增加而升高。结论:平阳霉素能明显抑制ECV304细胞生长,并具有浓度和时间依赖性;平阳霉素可能通过诱导凋亡和坏死作用以抑制ECV304细胞的体外生长和增殖;细胞凋亡发生在G2-M期,是通过上调Fas蛋白并下调Bcl-2蛋白的表达来实现的。

平阳霉素抑制人脐静脉内皮细胞系ECV304的实验研究

目的探讨平阳霉素抑制人脐静脉内皮细胞系ECV304的量效和时效关系及其相关机制。方法用不同浓度的平阳霉素作用于ECV304细胞24、48、72 h,MTT法观察细胞增殖抑制情况,电镜及DNA电泳实验分析细胞凋亡情况,流式细胞术分析细胞凋亡率、细胞周期及Fas、Bcl-2蛋白的表达。结果MTT法显示不同浓度平阳霉素组间细胞生长抑制率有显著差异,浓度越高、作用时间越长,抗增殖效应越明显;流式细胞术显示细胞凋亡率随药物浓度和作用时间增加而升高,平阳霉素各浓度作用24 h后,G2-M期百分率增高,S期百分率降低,G0-G1期百分率无明显变化;Fas表达随药物浓度增加而递增,Bcl-2表达随药物浓度增加而递减。结论平阳霉素能明显抑制ECV304细胞生长,并具有浓度和时间依赖性;平阳霉素可能是通过上调Fas蛋白并下调Bcl-2蛋白的表达,从而诱导细胞在G2-M期发生凋亡。

当归拈痛汤对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织内外凋亡途径关键因子的影响

目的:观察当归拈痛汤对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜组织内、外凋亡途径中关键调控因子表达水平的影响,进一步探讨该方防治类风湿关节炎的作用机制。方法:将40只SPF级SD大鼠随机分为正常组、模型组、当归拈痛汤组(11.34 g·kg^(-1))和雷公藤组(9.45 mg·kg^(-1)),除正常组外,其余各组采用灭活结核分支杆菌佐剂建立佐剂性关节炎大鼠模型,于免疫当天开始按分组每日灌胃给药,正常组与模型组大鼠给予等体积生理盐水,持续28 d。观察大鼠一般情况和体质量改变,足趾容积测量仪检测受试大鼠足趾容积的变化,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠膝关节滑膜组织形态学改变,蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠滑膜组织肿瘤坏死因子受体超族成员6(Fas),Fas相关死亡域蛋白(FADD),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)及其共同下游效应分子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA和蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠足趾容积显著增加(P<0.01),滑膜细胞增生显著,滑膜组织Fas,FADD,Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,当归拈痛汤组和雷公藤组大鼠的足趾肿胀度显著减轻(P<0.01),滑膜增生情况明显改善,Fas,FADD,Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论:当归拈痛汤可以有效减轻AA大鼠关节肿胀情况,改善滑膜组织异常增生,其作用机制可能与调控内、外在凋亡途径相关因子Fas,FADD,Bax,Bcl-2,Caspase-3表达,促进滑膜细胞凋亡相关。