重组PinX1真核表达载体的构建及其对胃癌MKN28细胞增殖的抑制作用

目的探讨PinX1基因对胃癌MKN28细胞生长及周期的作用,初步探讨该基因用于胃癌治疗方面的可能性。方法构建重组PinX1真核表达载体,酶切及测序鉴定无误后,应用脂质体转染法转染入胃癌MKN28细胞,建立稳定转染PinX1基因的MKN28细胞系;应用Western blot技术从蛋白水平检测转染前后目标蛋白PinX1的改变;MTT法检测转染前后细胞生长曲线的变化;流式细胞仪检测转染目的基因后细胞生长周期的改变。结果成功构建重组PinX1真核表达载体;建立了稳定转染入PinX1基因的胃癌MKN28细胞系;转染PinX1基因后,胃癌细胞细胞生长明显减缓(P<0.05),增殖变慢(P<0.05),细胞生长阻滞于G0/G1期。结论PinX1基因可抑制胃癌MKN28细胞的生长和增殖。

PinX1基因对结直肠癌预后及5-FU化疗敏感性的影响

目的探讨PinX1(Pin2/TRF1 interacting protein X1)基因表达对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)预后及5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)药物敏感性的影响。[JP2]方法GEPIA2在线工具分析PinX1在CRC组织的表达及预后。构建pEGFP-C3-PinX1过表达质粒,分别转染CRC细胞株LoVo和HT29细胞,CCK-8法检测细胞增殖、测定5-FU量效曲线并计算IC 50,实时定量PCR检测相对端粒长度(relative telomere length,RTL),流式细胞术检测细胞凋亡。结果PinX1高表达与CRC分期早及较好的总生存(overall survival,OS)有关。Western blot证实基因转染成功。PinX1过表达组LoVo和HT29细胞的增殖指数降低,5-FU的IC 50值降低,RTL降低,凋亡率增[JP2]加;联合小剂量5-FU(0.5 mg/L)干预后,RTL降低和凋亡增加更为显著。结论CRC患者PinX1基因高表达提示预后较好;PinX1过表达可抑制CRC细胞增殖,提高5-FU化疗敏感性,其机制可能与缩短端粒长度、诱导凋亡有关。

白血病细胞中端粒酶抑制因子Pinx1的表达与端粒酶活性关系的研究

目的:研究端粒酶抑制因子Pinx1在急性白血病细胞中的表达和在急性早幼粒白血病细胞株细胞NB4分化过程中的表达改变,分析其表达与端粒酶逆转录酶hTERT表达的关系,以了解白血病细胞中Pinx1对端粒酶的作用及可能机制。方法:荧光定量RT-PCR检测30例急性白血病细胞中Pinx1与hTERTmRNA的表达,进一步在ATRA诱导的急性早幼粒白血病细胞株细胞NB4分化过程中检测Pinx1及hTERTmRNA表达,分析两者之间的相关性。结果:Pinx1在急性白血病细胞中的表达(0·00312,5·42×10-4-0·024)明显高于正常人骨髓单个核细胞(7·89×10-4,0-0·00863,P<0·01),与hTERT的表达呈正相关(r=0·296,P<0·05)。Pinx1表达随NB4细胞分化逐渐下降,与hTERT呈正相关(r=0·900,P<0·05)。结论:Pinx1虽然为端粒酶活性的抑制因子,但在白血病细胞中与端粒酶活性的调控方向一致,提示Pinx1的表达改变可能是继发于hTERT的一种负反馈反应,目的是保持端粒酶活性的稳定,具体机制尚待进一步研究。

PinX1可通过Mad1/c-Myc途径抑制端粒酶活性

目的探讨PinX1基因抑制端粒酶活性可能的新机制。方法设计针对靶基因的干扰序列和阴性对照序列,应用脂质体法导入胃癌细胞中,G418筛选出抗性克隆;结合前期已建立稳定表达PinX1基因的细胞系,检测各细胞系中PinX1、Mad1及c-Myc的表达;应用流式细胞技术检测转染入PinX1基因后,胃癌细胞凋亡的改变。结果转染入PinX1基因后,Mad1的水平发生上调性改变;反之,抑制PinX1基因的表达后,Mad1的水平发生下调性改变;而c-Myc的变化与之相反。转染入PinX1基因后,胃癌细胞发生早期凋亡的改变。结论PinX1基因能通过Mad1/c-Myc抑制端粒酶活性。

Pinx1、hTERT mRNA在三种皮肤肿瘤组织中的表达及意义

目的探讨内源性端粒酶抑制基因PinX1及端粒酶逆转录酶hTERT在基底细胞癌、鳞状细胞癌、日光性角化病组织中的表达及其意义。方法实时定量PCR检测实验组36例3种皮肤肿瘤组织中内源性端粒酶抑制基因PinX1及端粒酶逆转录酶hTERT的mRNA表达水平，并以15例正常人皮肤组织作为对照组。结果实验组PinX1基因的mRNA表达水平（2．53±1．57）低于对照组（4．25±2．02），差异有统计学意义（t=3．273，P〈0．05）；hTERT基因的mRNA表达水平（6．37±3．81）明显高于对照组（1．62±0．99），差异有统计学意义（t=6．927，P〈0．05）；Pinx1的表达水平与hTERT表达的相关性无统计学意义（P〉0．05）。结论PinX1的下调及hTERT上调可能与3种皮肤肿瘤形成过程中端粒酶激活及维持机制有关。