不同采收期枇杷叶中氨基酸的组成与分析

目的 对12个月份采收期枇杷叶的氨基酸成分组成及含量变化进行分析,为确定枇杷叶采收期及资源利用提供理论依据。方法 采用异硫氰酸苯酯柱前衍生化高效液相色谱法测定不同月份枇杷叶氨基酸组成及含量;采用SPSS22.0版软件进行数据统计学差异及相关性分析;根据世界卫生组织(WHO)和联合国粮农组织(FAO)提出的理想模式及朱圣陶提出的氨基酸比值系数法,对不同采收期的枇杷叶氨基酸进行评分。结果 不同采收期枇杷叶中均含有17种氨基酸,7种人体必需氨基酸(EAA)、9种儿童必需氨基酸(CEAA)及9种药用氨基酸。17种氨基酸分别是天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸,它们的平均含量分别为3.41~7.23、4.64~9.66、2.05~3.75、2.99~4.95、0.01~1.56、2.33~4.85、2.10~4.03、2.67~5.48、5.37~7.64、1.45~3.49、2.70~5.53、0.01~0.48、3.64~4.78、1.91~4.15、3.96~7.83、2.39~4.60、1.85~3.65 mg·g^(-1)。不同采收期枇杷叶中17种氨基酸、总氨基酸(TFAA)、EAA总量、CEAA总量、药用氨基酸、苦味氨基酸的含量间差异有统计学意义(P<0.05);苦味氨基酸在总氨基酸中的百分含量较稳定。不同采收期枇杷叶的EAA含量为44.26%~50.33%,明显高于WHO/FAO模式值(35.00%);EAA/非必需氨基酸(NEAA)均值(55.67%)和EAA/TFAA均值(35.74%)分别接近WHO/FAO模式值的60%、40%;不同采收期枇杷叶的17种氨基酸含量峰值前2位是7月和11月;氨基酸比值系数分(SRC)值为62.53~76.17,前3位为11月、8月及7月。赖氨酸为枇杷叶的第一限制氨基酸。苦味氨基酸与药用氨基酸、TFAA呈正相关(P<0.01)。结论 枇杷叶中氨基酸种类齐全,组成合理,具有较佳开发利用价值;不同月份氨基酸的含量差异大,7月和11月是枇杷叶氨基酸合理开发利用的较佳时期。

含有苹果亚科药材的中药制剂质量控制

苹果亚科植物,我国产16属275种。《中国药典》2020年版收录山楂、山楂叶、木瓜和枇杷叶4种苹果亚科药材。通过对历版《中国药典》收录的苹果亚科药材标准变化情况及《中国药典》2020年版含有苹果亚科药材的中药制剂情况进行分析,提出对含有苹果亚科药材中药制剂质量控制的建议,为相关制剂的质量控制研究提供参考。

枇杷叶三萜酸的抗炎作用

目的研究枇杷叶三萜酸(TAL)对急、慢性炎症的抑制作用。方法采用二甲苯诱导的小鼠耳肿胀、冰醋酸诱导的小鼠腹腔毛细血管通透性实验、角叉菜胶诱导的大鼠足爪肿胀、棉球诱导的大鼠肉芽肿和福氏完全佐剂诱导的大鼠佐剂性关节炎模型,观察TAL的抗炎作用。结果TAL(75、225、675mg/kg)ig给药对二甲苯诱导的小鼠耳肿胀和冰醋酸引起的腹腔毛细血管渗出有明显的抑制作用;TAL(50、150、450mg/kg)ig给药可明显减轻角叉菜胶诱导的大鼠足爪肿胀、棉球诱导的大鼠肉芽肿和AA大鼠的原发性、继发性炎症病变。进一步研究表明,TAL(0.05、0.5、5、50mg/L)体外给药可增加ConA、LPS诱导的AA大鼠脾淋巴细胞增殖反应和IL-2的产生,同时抑制AA大鼠PMФ产生过高的IL-1。结论TAL具有良好的抗炎作用。

超声波提取枇杷叶总黄酮及其鉴别

目的为充分利用枇杷叶植物资源,避免资源的浪费,探讨枇杷叶总黄酮的提取及鉴别方法。方法采用超声波乙醇浸提法从枇杷叶中提取黄酮类物质,对所提取的黄酮类物质进行验证,并用紫外分光光度法测定含量。结果测得样品中总黄酮的含量C=0.909 0 mg/m l,回收率为100.9%,其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程,无任何污染,是提取枇杷叶黄酮类物质的有效途径。

枇杷叶三萜酸对慢性支气管炎大鼠肺泡巨噬细胞一氧化氮合酶及一氧化氮表达的影响

目的观察枇杷叶三萜酸(TAL)对慢性支气管炎(CB)大鼠肺泡巨噬细胞(AM)一氧化氮合酶(iNOS)和一氧化氮(NO)生成的影响,探讨其对慢性支气管炎抗炎作用的部分机制。方法应用卡介苗联用LPS的方法复制大鼠CB模型,观察TAL对CB大鼠AM iNOS表达、活性及NO释放的影响。结果在卡介苗联用LPS诱导大鼠CB模型中,TAL能降低AM iNOS的mRNA及蛋白的表达,并且抑制NO的释放。结论TAL抑制CB大鼠AM iNOS的表达及其活性,从而减少NO的释放可能是其对慢支的治疗与防治作用机制之一。

枇杷叶化学成分和药理活性研究进展

归纳、总结枇杷叶的化学成分和主要药理活性的研究进展,以期为枇杷叶的研究开发和应用提供参考。枇杷叶具有清肺止咳、降逆止呕的功效;枇杷叶主要含有黄酮类、三萜酸类、有机酸类、挥发油类等化学成分,具有抗炎、祛痰、止咳、抗肺纤维化、抗氧化、降血糖、抗肿瘤、止呕等药理作用。

响应面法优化云霄产枇杷叶三萜酸类成分的提取工艺

目的:采用响应面法优化福建云霄产枇杷叶三萜酸类成分的提取工艺。方法:以干浸膏得率、总三萜酸含量、齐墩果酸与熊果酸的含量进行无量纲化处理,得综合评价指标,考察了乙醇体积分数、液料比、提取时间、提取次数、饮片宽度对三萜酸提取综合评价的影响,根据Box-Behnken进行试验设计与结果分析,对提取工艺参数进行优化。结果:各考察因素对三萜酸的提取效果影响顺序为提取次数>提取时间>乙醇体积分数>液料比。饮片宽度对枇杷叶三萜酸的提取效果影响差异无统计学意义。得到最佳提取工艺为乙醇体积分数95%、液料比16∶1、提取时间2 h,提取数2次,综合评价值0.838 (RSD为2.54%)。结论:通过响应面分析法优化得到的福建云霄产枇杷叶三萜酸的最佳提取工艺,该工艺稳定、高效、可行,可为其资源开发利用提供参考。

非离子表面活性剂萃取-高效液相色谱法测定枇杷叶中的绿原酸、槲皮素和山奈酚

目的:以5g/100mL非离子表面活性剂Triton X-100为萃取剂,建立一种简单快速的采用超声提取,高效液相色谱法测定枇杷叶中的绿原酸、槲皮素和山奈酚的方法。方法:采用Phenomenex C18色谱柱(250mm×4.6mm,5.0μm),以甲醇-0.25%乙酸溶液为流动相梯度洗脱,流速1.0mL/min,紫外检测波长350nm。结果:绿原酸、槲皮素和山奈酚分别在0.011～220μg/mL(r=0.9997)、0.065～130μg/mL(r=0.9999)、0.068～136μg/mL(r=0.9999)线性关系良好,检出限(RSN=3)依次是1.94、0.22、0.27ng/mL;样品的加标回收率为90.40%～96.82%。结论:该方法具有样品前处理简单、绿色环保、灵敏快速等优点,可为枇杷叶中一些黄酮类物质和绿原酸的检测提供一个有效的方法。

不同采收季节枇杷叶中黄酮类成分的含量考察

目的考察不同采收季节枇杷叶药材中总黄酮类成分的变化规律。方法采用高效液相法测定不同采收季节枇杷叶中槲皮素和山柰酚的含量。结果总黄酮及槲皮素的含量随月份的变化较大,其中4月份含量最高;山柰酚的含量随月份变化较小,其中5月份含量最高。结论不同季节采收的枇杷叶中总黄酮类成分及槲皮素、山柰酚的含量变化有一定的规律。

枇杷止咳颗粒中枇杷叶、薄荷脑和罂粟壳薄层鉴别的研究

目的通过对枇杷止咳颗粒中枇杷叶、薄荷脑和罂粟壳薄层鉴别条件的研究,建立该制剂中这三味中药的鉴别方法,完善枇杷止咳颗粒质量控制。方法采用薄层色谱(TLC)方法对制剂中的枇杷叶、薄荷脑和罂粟壳进行鉴别试验。结果 TLC法能鉴别出枇杷止咳颗粒中枇杷叶、薄荷脑和罂粟壳。结论该法简便可行,专属性强,阴性无干扰,重现性好,能为枇杷止咳颗粒的质量评价提供科学依据。

应用C_(30)色谱柱高效液相色谱法同时分析枇杷叶中三萜酸类同分异构体

建立了一种快速、简便测定中药枇杷叶中4种三萜酸成分的液相色谱分析方法。枇杷叶经甲醇提取并定容后，采用C30色谱柱进行分离，以乙腈-水（95：5，v／v）为流动相进行洗脱，流速为1．0mL／min，于210nnl波长下检测。对不同产地枇杷叶中的山楂酸、科罗索酸、齐墩果酸和熊果酸4种同分异构体进行了测定和比较。结果表明，该方法分离度好（分离度（R）≥2．2），精密度高（RSD≤1．1％），线性关系良好（r≥0．9992），重现性良好（RSD≤4．4％），加标回收率范围为95．4％～101．7％（RSD≤4．8％），满足定量要求。该方法简便、快速，结果可靠，可作为枇杷叶质量评价的方法。

响应面法优化微波辅助提取枇杷叶熊果酸和齐墩果酸工艺

以枇杷叶为原料,研究微波辅助提取熊果酸和齐墩果酸的最优工艺。采用高效液相色谱法测定熊果酸和齐墩果酸含量,以熊果酸和齐墩果酸的总得率为评价指标,在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken设计-响应面法优化提取工艺。结果表明,熊果酸和齐墩果酸的分离度为2.67,浓度分别在0.2~1.2mg/mL、0.02~0.12mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系;最优提取工艺为提取时间11.5min、提取温度75℃、料液比1∶20g/mL、乙醇体积分数100%、微波功率500W,在此工艺条件下熊果酸和齐墩果酸的总得率为0.928%,与模型预测值相对误差为1.25%。优化的提取工艺条件稳定、可靠,适用于枇杷叶中的熊果酸和齐墩果酸的提取。

强力枇杷露质量标准的提高和优化

目的:优化和提高强力枇杷露的质量标准。方法:删去原质量标准中的化学反应,应用TLC法对处方中的罂粟壳、枇杷叶和桔梗进行鉴别;用HPLC法测定来源于罂粟壳的吗啡和磷酸可待因的含量。吗啡含量测定色谱条件为:色谱柱:Inertsil ODS-3(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-0.01 mol·L^(-1)庚烷磺酸钠溶液与0.02 mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液的等量混合液(用10%磷酸溶液调节p H至2.8)(13∶87),检测波长:220 nm,柱温:30℃,流速:1.0 ml·min^(-1);磷酸可待因含量测定色谱条件为:色谱柱:Inertsil ODS-3(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-0.01 mol·L^(-1)庚烷磺酸钠溶液与0.02 mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液的等量混合液(用10%磷酸溶液调节p H至2.8)(15∶85),检测波长:220 nm,柱温:30℃,流速:1.0 ml·min^(-1)。结果:TLC法可用于鉴别罂粟壳、枇杷叶和桔梗;吗啡在3.14~62.80μg·ml^(-1)的浓度范围内线性关系良好(r=1.000 0),平均回收率96.69%(RSD=2.41%,n=9);磷酸可待因在3.52~87.94μg·ml^(-1)范围内线性关系良好(r=1.000 0),平均回收率为95.68%(RSD=2.64%,n=9)。结论:改进了强力枇杷露的质量标准,建立的方法操作简易、精密度和准确度都好、专属性也强。

枇杷叶科罗索酸抑制人低密度脂蛋白氧化修饰及保护血管内皮细胞氧化损伤作用

从枇杷叶中提取分离制备科罗索酸,采用体外Cu^(2+)诱导低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)氧化损伤的体外化学反应模型及2,2’-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐(2,2’-azobis-2-methyl-propanimidamide dihydrochloride,AAPH)诱导人主动脉内皮细胞(human aortic endothelial cells,HAECs)氧化损伤的细胞模型,考察枇杷叶科罗索酸对LDL氧化过程的抑制作用及对动脉血管内皮细胞氧化损伤的保护作用。体外实验结果表明,枇杷叶科罗索酸在体外10~100μmol/L剂量范围内能有效延长LDL氧化过程中的迟滞期,降低反应动力学曲线的曲线下面积以及降低脂质过氧化物的生成,表明科罗索酸在体外能有效抑制Cu^(2+)诱导的LDL氧化。细胞实验结果表明,在2~10μmol/L剂量范围内能有效降低AAPH所致HAECs的乳酸盐脱氢酶漏出量,维护细胞结构的完整性;提高受损细胞的超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性,从而提升内皮细胞抵抗氧化应激的能力;降低细胞处于sub-G1/G0状态的比例,减少AAPH所致细胞的坏死或凋亡。表明枇杷叶科罗索酸能在细胞水平有效保护HAECs免受AAPH氧化应激损伤。

不同采收期及气候因子对枇杷叶品质的影响研究

目的:比较不同采收期及气候因子对云霄枇杷叶质量的影响。方法:采用热浸法测定其醇溶性浸出物含量,紫外分光光度法测定总黄酮和总三萜酸含量,HPLC法测定野鸦椿酸、山楂酸、科罗索酸、齐墩果酸、熊果酸5个三萜酸类成分的含量;采用熵权TOPSIS法综合评价不同采收期枇杷叶的整体质量,灰色关联分析法分析不同月份气候因子对枇杷叶整体质量的影响。结果:不同采收期的云霄枇杷叶中醇溶性浸出物、总黄酮、总三萜酸及上述5个三萜酸类成分的含量分别为27.29%~34.33%、10.77~13.96 mg/g、46.30~68.23 mg/g、4.671~9.366 mg/g、2.578~4.537 mg/g、4.635~10.323 mg/g、1.832~2.590 mg/g、8.473~11.185 mg/g;其中醇溶性浸出物含量以11月份采集样品最高,总黄酮、野鸦椿酸、山楂酸、科罗索酸含量以10月份最高,总三萜酸含量以5月份最高,齐墩果酸和熊果酸含量以12月份最高。熵权TOPSIS法分析结果显示综合质量评价排名前2位的采收期分别为10、12月。灰色关联度法分析结果显示日照时数是影响枇杷叶综合质量的首要因素。结论:枇杷叶的采收期以上半年5月或全年10月为佳,日照时数充足适合枇杷叶生长。

枇杷叶HPLC特征图谱研究及主要成分含量测定

目的:建立枇杷叶的HPLC特征图谱,并测定其中主要成分金丝桃苷、槲皮苷的含量。方法:色谱柱为CAPCELL PAK MG C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱;流速1.0 mL·min-1;检测波长355 nm;柱温30℃;进样量20μL。建立枇杷叶药材的特征图谱,并采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012年版)》进行分析。结果:从枇杷叶药材特征图谱中共标示出10个共有峰,各共有峰相对保留时间RSD均小于2.0%。主要成分金丝桃苷和槲皮苷分别在0.1026~0.8550、0.0858~0.7150μg线性关系良好,平均加样回收率分别为99.76%、95.56%,RSD分别为4.88%、4.84%。结论:所建立的方法操作简便、重复性好,可为有效控制枇杷叶药材的内在质量标准提供参考。

宁波产宁海白枇杷叶的药材品质分析

[目的]分析宁波产宁海白枇杷叶的药材品质。[方法]参考2015版《中华人民共和国药典》(一部),分别对4批不同采集地的宁海白枇杷叶进行水分含量、总灰分含量、浸出物含量、重金属检查、砷盐检查、薄层色谱鉴别及齐墩果酸和熊果酸的含量测定。[结果]4批不同采集地的宁海白枇杷叶的检查、鉴别和含量测定结果均符合中国药典的标准。[结论]宁波产宁海白枇杷叶药材品质较高,可以作为药用。

枇杷叶中齐墩果酸和熊果酸含量的毛细管电泳高频电导法测定

目的建立枇杷叶中齐墩果酸和熊果酸的含量测定方法。方法采用毛细管区带电泳,高频电导检测;未涂层弹性融硅石英毛细管柱55 cm×75μm ID,有效长度46 cm;1.2 mmol.L-1三乙胺-HCl(pH=10.60),0.24 mmol.L-1β-环糊精为运行缓冲液;分离电压12.5 kV;重力进样10 s(高度20 cm)。结果以布洛芬为内标,齐墩果酸、熊果酸线性范围分别为5.1～102.0 g/ml(r=0.999 7)和5.55～111.0 g/ml(r=0.999 3);平均回收率分别为96.0%和97.2%。结论该法简便、准确、快速、重现性好,可用于枇杷叶的质量控制研究。

蜜炙枇杷叶质量考察及标准初探

目的:对市场上及笔者自制的蜜炙枇杷叶进行质量比较分析。方法:采用重量法、滴定法。结果:从市场上所购蜜炙枇杷叶质量参差不齐,普遍欠佳。结论:若要较好地规范蜜炙枇杷叶的质量,尚须建立一个能有效控制其质量的标准并加以严格实施。

枇杷叶总黄酮提取工艺的优化

效应面法优化枇杷叶总黄酮的提取工艺。以乙醇浓度、料液比和提取时间为自变量,总黄酮提取率为因变量,通过自变量与因变量的完全二次响应面的回归拟合,用效应面法选取最佳工艺,并进行预测分析。结果表明:适宜的提取工艺是,提取液乙醇的体积分数为73%,料液比1∶11.5(g∶mL),提取2次,每次140 min。