海风藤提取物对脑缺血再灌注模型大鼠神经细胞凋亡和线粒体膜电位变化的干预作用

目的观察脑缺血再灌注2h后大鼠神经细胞凋亡和线粒体膜电位的变化及海风藤提取物的干预作用。方法应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,流式细胞术分别观察假手术组、模型组、二甲基亚砜组和海风藤组缺血灶周神经细胞凋亡和线粒体膜电位的变化。结果与模型组神经细胞凋亡率(72.7%±6.5%)和线粒体膜电位(0.117±0.011)比较,海风藤组神经细胞凋亡率(47.0%±3.8%)明显下降(P<0.01),线粒体膜电位(0.182±0.023)明显升高(P<0.01);而假手术组神经细胞凋亡率(5.8%±1.8%)和线粒体膜电位(0.331±0.016)与模型组比较差异均有显著性(P<0.01)。结论海风藤可以减轻脑缺血再灌注后早期神经细胞凋亡,并对线粒体膜电位有稳定作用,可以保护缺血脑组织。

单细胞凝胶电泳技术检测大鼠脑缺血再灌注后DNA损伤及海风藤提取物的干预作用

目的用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测局灶性脑缺血再灌注(I/R)大鼠神经细胞DNA损伤及海风藤干预作用。方法应用线栓法建立Wistar大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,单细胞凝胶实验技术分别观察假手术组、模型组、二甲基亚砜(DMSO)组、海风藤提取物治疗组缺血灶周神经细胞DNA损伤的变化。结果与假手术组比较,模型组和DMSO组DNA损伤率6～72h明显增加,但海风藤组DNA损伤率与其他组比较24、72h有明显下降(P<0.01,P<0.05)。结论海风藤可以减轻I/R后神经细胞DNA损伤,对缺血脑组织有保护作用。

海风藤提取物对Aβ_(1-42)寡聚体诱导阿尔茨海默氏病模型鼠认知功能障碍干预的可能机制

目的:探讨海风藤提取物(kadsura ohwi extract,PKO)对Aβ_(1-42)寡聚体(AβO)诱导阿尔茨海默氏病(Alzheimer disease)模型大鼠认知功能障碍干预的可能机制。方法:健康雄性SD大鼠36只,随机数字表法分为6组:正常对照组(Control组)、假手术组(Sham组)、载体组(高密度脂蛋白和轻乙基哌嗪乙磺酸组)、AβO组、AβO+海风藤组(AβO+PKO组)、AβO+DMSO组。采用微渗泵向侧脑室持续灌注AβO法制作动物模型。应用水迷宫实验观察大鼠的学习记忆功能变化,电镜下观察海马CA1区神经细胞超微结构,免疫印迹法(Western blot)检测NF-κB,TLR4表达,酶标记免疫吸附法(ELISA)检测TNF-α的表达。结果:水迷宫实验结果显示,与Control组、Sham组和载体组比较,AβO组、AβO+DMSO组和AβO+PKO组逃避潜伏期显著延长、穿越平台的次数显著减少、时间比率和路程比率也显著减低(P均<0.05);与AβO组、AβO+DMSO组比较,AβO+PKO组逃避潜伏期显著缩短、穿越平台的次数显著增加、时间比率和路程比率也显著增高(P均<0.05)。电镜下Control组、Sham组、载体组海马CA1区神经细胞超微结构未见明显异常,AβO组和AβO+DMSO组均见到大量凋亡神经细胞,存活的神经细胞线粒体、内质网、终池结构呈现不同程度的损伤。AβO+PKO组可见少量凋亡神经细胞,细胞肿胀轻,细胞器较完整,存活的神经元细胞较多。WB、ELISA结果显示,AβO组、AβO+DMSO组与Control组、Sham组、载体组相比,TLR4、NF-κB、TNF-α表达均显著增多,A0O+PKO组TLR4、NF-κB、TNF-α表达较AβO组、AβO+DMSO组减少(P均<0.05)。偏相关分析显示,TLR4、NF-κB、TNF-α与穿越平台次数均呈负相关(P均=0.00),TLR4、NF-κB、TNF-α之间均为正相关(P均=0.00)。结论:PKO通过降低朋0诱导的TLR4、NF-κB、TNF-α表达,减轻细胞损伤的机制,改善AD模型鼠认知功能。

海风藤提取物对激活的小胶质细胞IL-1β和TNF-α表达的影响

目的研究海风藤提取物对不同聚集状态的β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)诱导小胶质细胞中炎性因子白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法体外培养小鼠小胶质细胞株BV2,制备寡聚体和纤丝状Aβ1-42,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的海风藤提取物对BV2细胞活力的影响;BV2细胞分为4个实验组,分别采用寡聚体Aβ1-42、寡聚体Aβ1-42+海风藤提取物、纤丝状Aβ1-42、纤丝状Aβ1-42+海风藤提取物干预48 h,并设空白对照组,应用实时荧光定量PCR测定各组IL-1β和TNF-α的表达水平。结果海风藤提取物在10～80 g/L范围内对细胞活性无影响;实时荧光定量结果显示,4个实验组的小胶质细胞表达IL-1β和TNF-α的水平均高于空白对照组。寡聚体Aβ1-42+海风藤提取物组IL-1β和TNF-α的表达水平低于寡聚体Aβ1-42组,纤丝状Aβ1-42+海风藤提取物组IL-1β和TNF-α的表达水平低于纤丝状Aβ1-42组。结论炎性指标IL-1β和TNF-α的表达增高证明寡聚体和纤丝状Aβ1-42均能激活小胶质细胞;IL-1β和TNF-α的表达降低,表明海风藤提取物可以抑制寡聚体和纤丝状Aβ1-42对小胶质细胞的激活。

海风藤对活化的新生大鼠小胶质细胞的影响作用

目的研究海风藤提取物对纤丝状和寡聚体p淀粉样蛋白（B—amyloid，Ap）诱导的活化新生大鼠小胶质细胞可能的影响。方法原代培养新生大鼠小胶质细胞，分别用纤丝状A[325—35、寡聚体A^25-35、纤丝状A[325-35＋海风藤提取物、寡聚体A[325-35＋海风藤提取物干预小胶质细胞，并设立空白对照组。干预48h后，以CD68作为小胶质细胞活化的特异性抗原标志，利用免疫细胞化学染色方法，对小胶质细胞的活化率进行检测，并比较不同处理组间的差异。结果四个实验组的小胶质细胞CD68表达阳性率均高于空白对照组（5．1％，P〈0．05）。纤丝状AB＋海风藤提取物组CD68表达阳性率（52．1％）低于纤丝状AB组（60．8％，P〈0．05）。寡聚体A[3组（71．2％）和寡聚体A[3＋海风藤提取物组（67．0％）的CD68表达阳性率无明显差异（P=0．101）。结论纤丝状和寡聚体AB均能激活小胶质细胞；海风藤提取物能够抑制纤丝状Ap对小胶质细胞的激活作用，对寡聚体Ap的激活作用无明显影响。

海风藤提取物对Aβ寡聚体激活的小胶质细胞释放炎性因子的抑制作用

目的探讨Aβ寡聚体(Aβo)激活小胶质细胞释放相关炎性因子的作用及海风藤提取物对该过程的影响。方法取Wistar乳鼠的大脑皮层,进行小胶质细胞原代培养、分离、纯化并鉴定;采用醇提取法制备海风藤提取物,将提取物与DMSO按4∶1混合后加生理盐水并用0.22μm微孔滤膜过滤;将纯化后的小胶质细胞按相同密度种植于48孔板,分为空白对照组、Aβo组、Aβo+海风藤提取物组和Aβo+DMSO组;采用酶联免疫吸附法(ELISA)分别测定培养基上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的浓度。结果与空白组对照相比,经Aβo处理的小胶质细胞产生的炎性因子明显增加;Aβo+海风藤提取物组的炎性因子浓度低于Aβo组(P<0.05)。结论 Aβo能激活小胶质细胞并导致其释放大量炎性因子,而海风藤醇提取物能抑制该过程中炎性因子的释放。