NEOLIGNANS FROM PIPER KADSURA(Ⅱ)

Two new bicyclo[3,2,1]octanoid neolignans,named as kadsurenin I and kadsurenin J were isolated from Piper kadsura(Choiey)Ohwi.Based on the spectros- copic analysis(UV,IR,MS and NMR)and chemical derivatization,their structures were established as 7R,8R,1'R,2'S,3'R-Δ~s'-3,4,5'-trimethoxy-2'-hydroxy-1',2',3',4'- tetrahydro-4'-oxo-7.3',8.1'-neolignan and 7R,8R,1'R,2'S,3'R-Δ~s'-3,4,5'-trimethoxy -2'-acetoxy-1',2',3',4'-tetrabydro-4'-oxo-7.3',8.1'-neolignan respectively.

海风藤及其代用品药理作用的比较研究

选择经典的实验指标，对海风藤及其3种代用品山蒟、石楠藤及毛蒟的药理作用进行了比较研究。结果表明海风藤、山蒟和毛蒟在抗炎、镇痛和抗血小板聚集方面均有效，其中海风藤作用最强，其次为山蒟、毛蒟。石楠藤没有明显的抗炎作用，其抗血小板聚集及止痛作用稍强于毛蒟。

海风藤挥发油抗风湿作用的药效学

目的:通过药理实验确定海风藤挥发油抗风湿作用。方法:采用热板法、棉球肉芽法、耳肿胀法。结果:海风藤挥发油各剂量组均表现出明显的抗炎镇痛作用。结论:实验结果提示海风藤挥发油具有抗风湿作用。

傅里叶红外光谱法鉴别部分胡椒属生药的研究

利用共有峰率和变异峰率双指标,以胡椒属七种药用植物的红外指纹图谱为依据,计算出所测样品的共有峰率和变异峰率。建立了胡椒属七种药用植物共有峰率和变异峰率双指标序列,结果揭示了胡椒属七种药用植物的亲缘关系。中药海风藤与石南藤、大叶蒟根茎的共有峰率均在77%以上,变异峰率均在30%以下,此三种胡椒属药用植物亲缘关系较近;海风藤与胡椒根茎、十八症根的共有峰率在61%左右,亲缘关系稍远;海风藤与蒌叶根茎的共有峰率仅为44%。亲缘关系较远。利用红外二阶导数谱图,可以鉴别中药海风藤及其伪品石南藤、十八症根、大叶蒟根茎、胡椒根茎等品种。傅里叶红外光谱法可以对样品进行无损处理,不需要对药材进行复杂的提取分离过程即可提供化合物的官能团、类别、氢键等信息。该法能从整体水平分析谱图特征峰,具有分析速度快,重现性好,非破坏性和样品量小,制样简单,专属性强,节约成本,保护环境等优点。可以解决中药海风藤因资源短缺,伪品较多,鉴别困难等问题,也可为临床用药的安全、有效提供保障。傅里叶红外光谱法为胡椒属药用植物亲缘关系的探讨和真伪鉴别提供了一种新方法。符合中药向综合分析和整体分析发展的趋势。

海风藤对局灶性脑缺血治疗作用的实验研究

目的 :探讨海风藤提取物对老龄大鼠局灶性脑缺血的治疗作用。方法 :建立光化学诱导的老龄大鼠局灶性脑缺血模型 ,利用TTC染色、HE染色、TUNEL标记、原位分子杂交观察海风藤提取物对缺血灶大小、血脑屏障、缺血灶周围坏死细胞、凋亡细胞及P5 3基因表达变化的影响。结果 :海风藤治疗组大鼠局灶性脑缺血后血脑屏障破坏明显减轻 ,缺血灶周围坏死细胞、凋亡细胞及P5 3阳性细胞的数量较未干预组显著减少 ,梗死灶直径也有减少的趋势。结论 :海风藤具有抵抗缺血后神经细胞DNA损伤 ,减轻迟发性神经元死亡及神经细胞坏死 ,对缺血性脑组织有保护作用。

海风藤中新木脂素类PAF拮抗活性成分的研究

自中药海风藤[Piper kadsura (Choisy)Ohwi]的藤茎中又分离得到四个macrophyllin型双环[3,2,1]辛烷类新木脂素,经光谱分析及衍生物的制备,确定化合物Ⅰ和Ⅲ为新结构,命名为风藤素K(kadsurenin K)和风藤素L(kadsurenin L),其化学结构分别为7R,8R,3′R,5′R-△^(?)-3,5′-二甲氧基-4-羟基-2′,3′,4′,5′-四氢-2′,4′-氧-7.3′,8.5′-新木脂素(Ⅰ)和7R,8R,3′S,4′R,5′R-△_(?)-3,4,5′-三甲氧基-4′-乙酰氧基-2′,3′,4′,5′-四氢-2′-氧-7.3′,8.5′-新木脂素(Ⅲ)。化合物Ⅱ和Ⅳ分别为已报道过的风藤素C和风藤素B。化合物Ⅰ～Ⅳ均有明显的PAF受体拮抗活性。

海风藤中有PAF拮抗活性的苯骈呋喃类新木脂素

自福建产中药海风藤(Piper kadsura (Choisy)Ohwi)的藤茎中又分得5个苯骈呋喃类新木脂素,经光谱分析(UV,IR,MS,NMR,CD)和衍生物制备,确定化合物Ⅱ和Ⅴ为新结构。Ⅱ为化合物denudatin B的对映体,命名为(-)-denudatin B,V为7S,8S-3,4,3′-三甲氧基-7′-氧-缺8′,9′-7.O.4,′8.5′-新木脂素,命名为风藤素M(kadsurenin M)。化合物Ⅰ,Ⅲ和Ⅳ分别为已知化合物海风藤酮(Ⅰ),(-)-acuminatin(Ⅲ)和(+)-licarin A(Ⅳ)。PAF受体结合实验证明,(-)-denudatin B也具有较强的PAF拮抗活性。

海风藤提取物对大鼠内毒素性低血压和肺损伤的拮抗作用

大鼠静脉注射PAF可引起动脉血压下降,肺血管壁通透性升高。预先给予海风藤提取物可以减轻内毒素造成的低血压和通透性增高性肺水肿。海风藤的这种效应可能与其对PAF的拮抗作用有关。

海风藤提取物对老龄大鼠缺血性脑损伤保护作用研究

目的 探讨海风藤提取物在老龄大鼠局灶脑缺血后可能的脑保护作用。方法 建立光化学诱导的老龄大鼠局灶性脑缺血模型 ,利用 TTC染色、HE染色、原位末端标记观察海风藤提取物对缺血灶大小、血脑屏障、缺血灶周围坏死细胞、凋亡细胞的影响。结果 海风藤提取物可显著减轻局灶性脑缺血后血脑屏障的破坏 ,减少缺血灶周围坏死细胞、凋亡细胞数量 ,并具有减少梗死灶直径的趋势。结论 海风藤具有抵御缺血后血脑屏障破坏 ,减少缺血灶周围神经细胞坏死及迟发性神经元死亡 ,发挥缺血性脑保护作用。

海风藤提取物对脑缺血再灌注模型大鼠神经细胞凋亡和线粒体膜电位变化的干预作用

目的观察脑缺血再灌注2h后大鼠神经细胞凋亡和线粒体膜电位的变化及海风藤提取物的干预作用。方法应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,流式细胞术分别观察假手术组、模型组、二甲基亚砜组和海风藤组缺血灶周神经细胞凋亡和线粒体膜电位的变化。结果与模型组神经细胞凋亡率(72.7%±6.5%)和线粒体膜电位(0.117±0.011)比较,海风藤组神经细胞凋亡率(47.0%±3.8%)明显下降(P<0.01),线粒体膜电位(0.182±0.023)明显升高(P<0.01);而假手术组神经细胞凋亡率(5.8%±1.8%)和线粒体膜电位(0.331±0.016)与模型组比较差异均有显著性(P<0.01)。结论海风藤可以减轻脑缺血再灌注后早期神经细胞凋亡,并对线粒体膜电位有稳定作用,可以保护缺血脑组织。

五种胡椒属来源的海风藤挥发油成分的比较研究

本文对四种及一变种胡椒属植物的茎叶进行了挥发油的GC比较。并以GC-MS研究了毛Piper puberulum(Benth.)Maxim.的挥发油成分,共鉴定了54个化合物,其中主要成分为倍半萜。结果表明,毛的挥发油成分与其它四种样品差异很大。

海风藤HPLC指纹图谱研究

目的:建立不同产地海风藤药材的HPLC指纹图谱。方法:采用HPLC法,色谱柱:Kromasil C_(18)(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-四氢呋喃的水溶液,梯度洗脱,流速1.0ml·min^(-1),检测波长280nm。结果:测定10批不同产地海风藤药格,确定15个共有峰,照"中药指纹图谱技术研究"测定相对保留时间和相对峰面积,照"中药色谱指纹图谱相似度评价系统的操作规范"测得10批海风藤药材的相似度。结论:采用HPLC指纹图谱技术,可鉴别和评价海风藤药材的质量。

海风藤对β淀粉样蛋白寡聚体激活小胶质细胞的影响

目的研究海风藤提取物对β淀粉样蛋白(Aβ)寡聚体诱导小胶质细胞激活的影响。方法模拟体内生理条件诱导Aβ单体形成Aβ寡聚体,原代培养新生大鼠小胶质细胞,分别用Aβ25-35寡聚体、Aβ25-35寡聚体+海风藤提取物、Aβ25-35寡聚体+DMSO干预小胶质细胞,并设空白对照组,48h后测上清液中白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)水平,并比较各组间炎性因子差异。结果 Aβ寡聚体组上清液中IL-1β、IL-6水平明显高于空白对照组〔IL-1β:(67.06±1.79)pg/mL vs.(36.30±1.40)pg/mL;IL-6:(181.14±4.46)pg/mLvs.(110.90±4.62)pg/mL,均P<0.05〕;Aβ寡聚体组上清液中IL-1β、IL-6水平明显高于Aβ寡聚体+海风藤提取物组〔IL-1β:(63.24±2.00)pg/mL,IL-6:(170.34±3.47)pg/mL,P<0.05〕;Aβ寡聚体组上清液中IL-1β、IL-6水平和Aβ寡聚体+DMSO组〔IL-1β:(68.26±1.38)pg/mL,IL-6:(184.7±6.06)pg/mL〕比较无统计学差异。结论 Aβ寡聚体能激活小胶质细胞;海风藤提取物能明显抑制Aβ寡聚体诱导小胶质细胞的激活。

风藤优良地理种源的选择

收集南方5省26个风藤地理种源种子,在福建沙县进行优良种源选择试验.3年生风藤试验结果表明:风藤的主蔓长度、主蔓基径、生物量鲜质量、一级侧蔓数量和一级侧蔓长度等指标均存在极显著性差异,有较高的广义遗传力和变异系数;利用多目标决策方法进行地理种源评价,选择出福建沙县、福建尤溪、福建三元等3个风藤优良地理种源,3个当选优良地理种源的平均主蔓长度遗传增益为21.35%,平均生物量鲜质量遗传增益24.83%,平均主蔓基径遗传增益10.97%,平均一级侧蔓数量遗传增益24.68%,平均一级侧蔓长度遗传增益11.31%.

海风藤中苯骈呋喃类新木脂素的研究

从海风藤[Piper kadsura(Choisy)Ohwi]分离到6个苯骈呋喃新木脂素(Ⅰ—Ⅵ),经光谱(UV、IR、MS、NMR、CD)鉴定和衍生物制备,确定化合物Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ为新结构:7R,8R,1′S-△~8′-3,4-二氧亚甲基-5′-甲氧基-1′,4′-二氢-4′-氧-7.0.2′,8.1′-新木脂素(Ⅰ)、7R,8R,1′R-△~8′-3,4-二氧亚甲基-1′-甲氧基-1′,6′-二氢-6′-氧-7.0.4′,8.3′-新木脂素(Ⅳ)和7R,8R,1′S-△~8′-3,4-二氧亚甲基-1′-甲氧基-1′,6′-二氢-6′-氧-7.0.4′,8.3′-新木脂素(Ⅴ)。

单细胞凝胶电泳技术检测大鼠脑缺血再灌注后DNA损伤及海风藤提取物的干预作用

目的用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测局灶性脑缺血再灌注(I/R)大鼠神经细胞DNA损伤及海风藤干预作用。方法应用线栓法建立Wistar大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,单细胞凝胶实验技术分别观察假手术组、模型组、二甲基亚砜(DMSO)组、海风藤提取物治疗组缺血灶周神经细胞DNA损伤的变化。结果与假手术组比较,模型组和DMSO组DNA损伤率6～72h明显增加,但海风藤组DNA损伤率与其他组比较24、72h有明显下降(P<0.01,P<0.05)。结论海风藤可以减轻I/R后神经细胞DNA损伤,对缺血脑组织有保护作用。

反相液相制备色谱法结合超临界流体制备色谱法分离纯化海风藤中的化合物

建立了基于反相液相制备色谱和超临界流体制备色谱的组合方法,用于分离纯化醇提水沉后石油醚层中的海风藤。首先以甲醇作为改性剂,采用醇提水沉法去除海风藤甲醇提取物中的叶绿素,加入硅藻土后用石油醚回流富集目标成分。选用反相C18制备色谱柱将其分为18个组分,然后将组分在SFC模式下进行制备。选用酰胺色谱柱,以甲醇为改性剂,在柱温30℃、背压15.0 MPa的条件下进行分离。基于反相色谱和超临界流体色谱不同的分离选择性,最后分离得到6个高纯度化合物。该法展示了反相制备色谱和超临界流体制备色谱在海风藤分离纯化方面的优势,特别是超临界流体色谱在天然产物的分析和制备方面的巨大潜力。

HPLC测定海风藤药材中海风藤酮的含量

建立了HPLC法测定海风藤药材中海风藤酮含量的方法,采用Hypersil ODS2柱（4.6×250mm,5μm）,甲醇-水（70∶30）为流动相,流速为1.0mL/min;检测波长280nm;海风藤酮在116~1160μg/mL范围内线性关系良好,回归方程为Y=4561.1X-10927（r=0.9994）,平均回收率为99.83%,RSD=1.08%（n=6）。用本方法测得海风藤酮在风藤、石南藤和山蒟中的含量分别为0.25%,0.0057%和0.0014%。

海风藤中酰胺生物碱类成分研究

为研究海风藤的化学成分及生物活性,本研究利用正、反相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20及制备液相等色谱分离技术对海风藤茎中的化学成分进行分离纯化,并结合多种波谱技术鉴定出13个酰胺生物碱类化合物,分别为(2 E,4 E)-N-isobutyl-6-oxodeca-2,4-dienamide(1)、(4,5)-trans-N-isobutyl-4,5-epoxy-2 E-decadienamide(2)、N-isobutyl-4-hexanoyl-4-hydroxypyrrolidin-1-one(3)、sylvamide(4)、N-isobutyl-2 E,4 E-octadienamid(5)、pellitorine(6)、N-isobuty-2 E,4 E-dodecadienamide(7)、N-isobutyl-2 E,4 E-octadecadienamide(8)、N-2′-methylbutyl-2 E,4 E-decadienamide(9)、N-isobutyl-2 E,4 E,12 Z-octadecatrienamide(10)、N-isobutyl-2 E-decenamide(11)、二氢荜茇明宁碱(12)、风藤酰胺(13)。化合物1为新化合物,化合物2为新天然产物,化合物3~7、9、10为首次从该植物中分离得到。采用MPP+致损伤的PC12细胞模型对分离得到的化合物1~10进行体外神经保活性测试,化合物6在20μM时,对MPP+诱导的PC12细胞损伤具有显著的保护作用(P<0.01)。

海风藤提取物对Aβ_(1-42)寡聚体诱导阿尔茨海默氏病模型鼠认知功能障碍干预的可能机制

目的:探讨海风藤提取物(kadsura ohwi extract,PKO)对Aβ_(1-42)寡聚体(AβO)诱导阿尔茨海默氏病(Alzheimer disease)模型大鼠认知功能障碍干预的可能机制。方法:健康雄性SD大鼠36只,随机数字表法分为6组:正常对照组(Control组)、假手术组(Sham组)、载体组(高密度脂蛋白和轻乙基哌嗪乙磺酸组)、AβO组、AβO+海风藤组(AβO+PKO组)、AβO+DMSO组。采用微渗泵向侧脑室持续灌注AβO法制作动物模型。应用水迷宫实验观察大鼠的学习记忆功能变化,电镜下观察海马CA1区神经细胞超微结构,免疫印迹法(Western blot)检测NF-κB,TLR4表达,酶标记免疫吸附法(ELISA)检测TNF-α的表达。结果:水迷宫实验结果显示,与Control组、Sham组和载体组比较,AβO组、AβO+DMSO组和AβO+PKO组逃避潜伏期显著延长、穿越平台的次数显著减少、时间比率和路程比率也显著减低(P均<0.05);与AβO组、AβO+DMSO组比较,AβO+PKO组逃避潜伏期显著缩短、穿越平台的次数显著增加、时间比率和路程比率也显著增高(P均<0.05)。电镜下Control组、Sham组、载体组海马CA1区神经细胞超微结构未见明显异常,AβO组和AβO+DMSO组均见到大量凋亡神经细胞,存活的神经细胞线粒体、内质网、终池结构呈现不同程度的损伤。AβO+PKO组可见少量凋亡神经细胞,细胞肿胀轻,细胞器较完整,存活的神经元细胞较多。WB、ELISA结果显示,AβO组、AβO+DMSO组与Control组、Sham组、载体组相比,TLR4、NF-κB、TNF-α表达均显著增多,A0O+PKO组TLR4、NF-κB、TNF-α表达较AβO组、AβO+DMSO组减少(P均<0.05)。偏相关分析显示,TLR4、NF-κB、TNF-α与穿越平台次数均呈负相关(P均=0.00),TLR4、NF-κB、TNF-α之间均为正相关(P均=0.00)。结论:PKO通过降低朋0诱导的TLR4、NF-κB、TNF-α表达,减轻细胞损伤的机制,改善AD模型鼠认知功能。