New amide alkaloids from Piper longum fruits

Three new amide alkaloids piperlongumamides A-C(1-3),together with 12 known ones(4-15),were isolated from the fruits of Piper longum.The structures of the new isolates were determined using spectroscopic data analyses.Cytotoxic activity of these amides against HL-60(human leukemia),A-549(human lung cancer),MCF-7(human breast cancer),SMMC-7721(human liver cancer)and SW480(human rectal cancer)cell lines were evaluated.Piperchabamide B(11)exhibited weak inhibitory activity against HL-60(IC_(50)=21.32μM),A-549(IC_(50)=23.82μM)and MCF-7(IC_(50)=16.58μM)cell lines.

Bioactivity guided isolation of mosquito larvicide from Piper longum

Objective:To isolate the larvicidal component from the fruits of Piper longum（P.longum） against the filariasis vector,Culex quinquefasciatus（C.quinquefasciatus）.Methods:Pulverized fruits of P.longum were subjected to soxhlet extraction using series of organic solvents of increasing polarity.All the solvent extracts were verified for their larvicidal efficacy against 4th instar larvae of C.quinquefasciatus employing standard WHO procedure.Bioassayguided fractionation through column chromatography lead to the isolation of a bioactive amide, pipyahyine from the petroleum ether extract.Results:Petroleum ether extract was found to be the most active fraction among all the extracts tested with LC50 and LC90 being 1.03 and 2.04 ppm respectively.Whereas,pipyahyine,an isolated component of the same fraction was found to be even more effective than the parent extract in terms of LC50 being 0.58 and 1.88 ppm respectively. Conclusions:From the results,it is evident that P.longum can be considered as a powerful arsenal for the control of mosquito population.

荜茇提取物对CCl_(4)诱导大鼠肝纤维化的影响

目的探究荜茇提取物对四氯化碳(CCl_(4))诱导大鼠肝纤维化的作用机制。方法将60只SD大鼠随机分成空白组、模型组、荜茇提取物低剂量组(16.6mg/kg)、荜茇提取物中剂量组(33.3mg/kg)和荜茇提取物高剂量组(66.7mg/kg),每组各12只。除空白组外,其余各组均给予皮下注射50%CCl_(4)-菜籽油溶液干预8周,建立肝纤维化模型。造模的同时给予模型组灌胃0.9%氯化钠溶液,荜茇提取物低、中、高剂量组连续灌胃治疗8周。实验结束后,测定大鼠血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷氨酰基转移酶(γ-glutamyltransferase,γ-GT),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6);苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)、Masson染色观察大鼠肝组织病理变化。提取RNA并采用qPCR技术检测大鼠肝组织中Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、TNF-αmRNA表达水平;提取蛋白采用Western blot法检测大鼠肝组织中CollagenⅠ、α-SMA、TNF-α蛋白表达水平。结果HE染色和Masson染色结果可观察到模型组大鼠肝脏纤维增生明显,大鼠血清中ALT、AST、γ-GT升高,血清中炎性介质TNF-α和IL-6分泌增多,CollagenⅠ、α-SMA和TNF-αmRNA和蛋白表达增高,荜茇提取物可明显改善肝纤维化程度,血清中ALT、AST、γ-GT下降,血清中炎性介质TNF-α和IL-6下降,肝组织中CollagenⅠ、α-SMA、TNF-αmRNA和蛋白水平明显下降。结论荜茇提取物对CCl_(4)诱导的大鼠肝纤维化有明显治疗作用,可通过抑制炎性细胞因子TNF-α和IL-6表达,可能通过抑制肝星状细胞激活,从而减少CollagenⅠ和α-SMA合成发挥抗纤维化的药效。

超声波辅助亚临界水提取荜茇总黄酮工艺优化及其抗氧化活性评价

采用超声波协同亚临界水技术进行荜茇中黄酮类成分的提取条件研究,并对其不同部位的总黄酮提取物进行抗氧化性对比分析。结果表明,超声波协同亚临界水提取荜茇整株总黄酮最佳工艺条件为超声温度50℃,超声功率240 W,超声时间40 min,料液比1∶30(g/mL),亚临界水提取温度125℃,亚临界水提取时间为40 min,在此工艺条件下荜茇整株总黄酮最高提取量为(30±0.05)mg/g。不同部位总黄酮提取物对DPPH自由基和超氧阴离子自由基清除能力的大小顺序为果穗>叶>根>茎,DPPH自由基清除率和超氧阴离子自由基清除率的IC50值分别为荜茇果穗37.96、304.33μg/mL,荜茇叶44.55、384.36μg/mL,荜茇根47.68、461.54μg/mL,荜茇茎130.60、487.80μg/mL。采用超声波协同亚临界水提取荜茇整株总黄酮的工艺条件合理,提取得到的总黄酮具有良好的抗氧化性。

荜茇提取物中5个生物碱的含量测定与对垂体后叶素所致大鼠实验性心肌缺血的影响

目的建立荜茇提取物中5个生物碱含量测定方法,并评估该提取物对垂体后叶素所致大鼠实验性心肌缺血的影响。方法采用HPLC法同时测定5个生物碱的含量;采用经舌下静脉注射垂体后叶素造成急性心肌缺血模型,以造模前后T波变化绝对值、心率及其变化百分率为观测指标,评估荜茇提取物大、中、小三个剂量组对大鼠实验性心肌缺血的影响。结果3批荜茇提取物中胡椒碱平均含量为56.1%、49.7%、51.6%;N-异丁基-2E,4E-十八烷二烯酰胺平均含量为4.48%、4.21%、4.28%;几内亚胡椒碱平均含量为0.461%、0.378%、0.396%;荜茇明碱平均含量为1.73%、1.67%、1.70%;胡椒酰胺平均含量为0.554%、0.461%、0.493%。荜茇提取物大、中、小剂量组均有降低T波变化绝对值的作用;除大剂量组在个别时间点有降低心率的作用之外,其它各实验组在各时间点对心率变化率无显著影响。结论所建立的生物碱含量测定分析方法可准确测定荜茇提取物中5个生物碱的含量;药效试验证明荜茇提取物具有较好的抗心肌缺血活性。

荜茇的本草考证

荜茇是一味经典的中草药,味辛,性热,具有温中散寒、下气止痛的功效。通过查阅历代本草、现代文献,从荜茇出处、名称、植物形态、产地、性味归经、炮制、功效、主治用量及禁忌等多方面进行梳理考证,以便为现代临床医师和研究者提供理论依据和研究方向。

基于网络药理学及分子对接探讨荜茇治疗胃癌的作用机制研究

目的采用网络药理学及分子对接技术探究荜茇治疗胃癌的作用机制。方法在中药系统药理学分析平台(TCMSP)检索荜茇成分及活性成分;利用GeneCards数据库检索与胃癌相关靶点及共同基因;绘制PPI网络图,分别进行GO和KEGG富集分析;利用AutoDock Tools1.5.6软件对核心成分及靶点进行分子对接。MTT、流式细胞术检测不同浓度胡椒碱对SGC-7901细胞抑制及细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹法检测相关蛋白表达水平。结果检索到荜茇活性成分15个;荜茇-胃癌共同靶点15个;GO功能富集分析关联到基因生物过程19条,细胞组成12条,分子功能4条,KEGG通路富集分析主要涉及TNF信号通路等;分子对接结果显示胡椒碱、芝麻素等与核心靶点分子对接结果良好。MTT法及流式细胞术结果显示,与对照组相比,胡椒碱组SGC-7901细胞抑制率增加(P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.01);Western blotting结果显示,与对照组相比,胡椒碱组SGC-7901细胞中TNF-α、Caspase-3、Caspase-8蛋白表达量增加(P<0.05)。结论荜茇及活性成分胡椒碱对胃癌的治疗呈多靶点、多通路的特征,可为后续实验研究和临床应用提供参考。

荜茇提取物的抗氧化活性及改善LPS所致大鼠听力损伤的作用研究

目的 探讨荜茇提取物的抗氧化活性及改善LPS所致大鼠听力损伤的作用。方法 测试浓度为0.05~1.0 mg/mL的荜茇提取物对DPPH自由基的清除率;测试浓度为25~500μg/mL荜茇提取物对LPS诱导RAW 264.7细胞分泌NO的抑制作用。随机将24只SD大鼠分成空白对照组、模型组、氢化可的松组和荜茇提取物组,每组6只,空白对照组不造模处理,模型组、氢化可的松组及荜茇提取物组连续鼓室内注射5 mg/mL的LPS 5 d后,模型组生理盐水灌胃,氢化可的松组1.81 mg/kg氢化可的松灌胃,荜茇提取物组按生药量1 g/mL荜茇提取物灌胃,连续灌胃10 d后,测试各组大鼠8、16 kHz ABR反应阈值、耳蜗组织中谷氨酸、MDA、TNF-α、NO因子的表达量,并行耳蜗基底膜铺片观察。结果 荜茇提取物对DPPH自由基清除的IC50为0.505 mg/mL;浓度为25~500μg/mL的荜茇提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞过度分泌NO有显著的抑制作用,抑制率的IC50为280.55μg/mL。连续灌胃10 d后,与空白对照组相比,模型组8、16 kHz ABR阈值显著升高,耳蜗组织中谷氨酸、MDA、TNF-α、NO的表达显著升高,SOD含量显著降低;与模型组相比,氢化可的松组和荜茇提取物组8、16 kHz的ABR反应阈值降低(P<0.01),大鼠耳蜗组织谷氨酸、MDA、TNF-α、NO因子表达也显著降低(分别为P<0.05、P<0.01、P<0.001),SOD活力提高(P<0.05)。基底膜铺片结果示,空白组毛细胞无明显缺失,三排外毛细胞纤毛排列整齐,结构完整,无缺失;模型组耳蜗毛细胞大部分明显缺失,并且细胞肿胀明显、结构严重不完整,氢化可的松组及荜茇提取物组耳蜗毛细胞排列较为整齐,毛细胞肿胀缓解。结论 荜茇提取物可能通过抑制耳蜗组织中的谷氨酸、自由基的过度表达以及炎症反应,提高超氧化歧化酶SOD活力,产生良好的改善听力作用。

基于正交实验法优化从荜茇中提取胡椒碱的工艺

基于正交实验,优化胡椒碱提取工艺并建立HPLC测定胡椒碱含量的方法。以荜茇为原料,在单因素实验设计的基础上,采用正交实验进行优化乙醇浓度、乙醇用量、提取时间及提取次数进行考察。胡椒碱的最佳提取工艺是65%乙醇,提取时间2 h,提取次数为3次,溶剂用量为6倍。胡椒碱在0.70~27.50μg/mL的范围内具有良好线性关系、相对标准偏差小于0.52%(n=5)、加标回收率为103.23%。胡椒碱的提取工艺合理、可行、胡椒碱的提取率较高,为荜茇的进一步开发提供了理论依据。

荜茇提取物对大鼠骨髓间质干细胞MSC的增殖作用及与化学官能团的关系

目的:观察荜茇挥发油和水溶性部分对大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymalstemcells,MSC)体外增殖的影响,并进一步探讨了与分子中化学官能团的关系。方法:使用密度梯度法分离大鼠骨髓间质干细胞,体外培养,经Brdu标记和CD44染色及两者双重染色鉴定后,观察在培养液中添加不同浓度荜茇挥发油及其水溶性部分的条件下MSC的生长变化。应用形态学、MTT法和5-溴脱氧尿嘧啶(5-Bromodeoxyuridine,Brdu)、增殖细胞核抗原(Proliferationcellnuclearantigen,PCNA)免疫细胞化学方法测定细胞增殖活性。结果:荜茇挥发油以浓度依赖方式促进MSC增殖活力和增加Brdu、PCNA阳性细胞数,与对照组比较有显著性(P<0.05)。经GC-MS检测,荜茇挥发油含C=C(50.66%)、-OH(27.02%)、多种官能团(5.05%)等;而荜茇水提物对MSC无增殖作用。结论:荜茇挥发油明显促进MSC的增殖,这种作用可能与分子中C=C、-OH等官能团有关。

超临界流体萃取法在荜茇质量控制中的应用

采用系统观察法对超临界流体萃取法的最佳萃取条件进行了考察 ,并与传统有机溶剂提取法进行比较 ,建立了超临界流体萃取法提取中药筚茇中有效成分的方法 ,结果最佳萃取条件为 :以乙醇作改性剂 ,于40℃、2 .6 0 8× 10 7Pa压力下 ,二氧化碳静态萃取 15 m in,动态萃取 5 m l。该法操作简便快速 ,提取完全 。

荜茇水提取物对小鼠胃排空和肠推进的影响

目的:研究荜茇水提取物对小鼠肠推进和胃排空的影响。方法:荜茇水提取物灌胃给药6天,采用小肠炭末推进实验观察荜茇水提取物对正常小鼠小肠运动及硫酸阿托品所致小鼠小肠抑制模型的影响,采用甲基橙胃残留率的方法观察荜茇水提取物对正常小鼠胃排空的影响。结果:荜茇水提取物20g/kg和10g/kg可促进正常小鼠小肠运动,并能明显拮抗硫酸阿托品所致小鼠小肠抑制作用,荜茇水提取物20g生药/kg和10g生药/kg可促进正常小鼠胃排空。结论:荜茇水提取物对正常小鼠小肠运动及硫酸阿托品所致小鼠小肠抑制均有明显促进作用,并对正常小鼠胃排空有促进作用,其机制可能与M胆碱受体有关。

荜茇挥发油清除自由基作用及其与分子结构的关系

目的观察海南产荜茇挥发油清除自由基活性,探讨其与分子结构的关系。方法DPPH法检测清除自由基活性;GC-MS法分析其化学成分,并用谱库检索确定各化合物结构。结果①荜茇挥发油具有清除DPPH自由基的能力,且浓度越高,活性越强;②海南产荜茇挥发油含41个化合物,碳碳双键C=C的相对含量占绝对优势。结论碳碳双键C=C可能为荜茇挥发油清除自由基活性的必需官能团。

胡椒酸丁二醇单酯的合成及其降血脂作用研究

以蒙药药材荜茇为原料,经过分离、纯化得胡椒碱,进一步水解得胡椒酸.以胡椒酸和丁二醇为原料合成了胡椒酸丁二醇单酯,经13CNMR、1HNMR、UV、IR、EA表征后确证结构并做了一般药理实验,实验结果表明目标化合物具有良好的降血脂活性.

荜茇有效成分提取及抗炎作用的研究

目的:对荜茇有效成分进行提取,观察其对二甲苯致小鼠耳廓炎症的作用。方法:采用溶剂法提取荜茇有效成分,石油醚、乙酸乙酯萃取分离,得到三部分药液。采用二甲苯引起小鼠耳廓肿胀致炎造模方法,观察并记录小鼠耳廓肿胀程度。结果:服用荜茇的乙酸乙酯萃取物的小鼠,左右耳肿胀程度与地塞米松对照品接近。结论:荜茇提取物具有明显的抗炎作用。

优化荜茇多糖的提取工艺及其抗氧化活性研究

目的:优化荜茇多糖的提取工艺,并研究其抗氧化活性。方法:在单因素试验基础上,利用正交试验法,优化提取条件,确定最佳提取工艺;通过ABTS、DPPH自由基清除实验,计算其清除率,初步评价荜茇多糖的抗氧化活性。结果:荜茇根多糖的最佳提取工艺条件为:提取温度100℃、提取时间120 min、提取次数3次,在此最佳工艺条件下荜茇多糖提取率为1.21%。抗氧化活性研究中,随着多糖浓度逐渐升高,ABTS自由基清除率最大达到100%,DPPH自由基清除率最大达到88.27%。结论:由正交试验法优化得到的荜茇多糖的提取工艺方便易操作,得到的荜茇多糖具有较强的抗氧化活性,可进一步深入研究。

胡椒、荜茇对正常大鼠肝脏能量代谢因子的影响

目的:探讨热性中药胡椒、荜茇对正常大鼠肝脏能量代谢的影响,研究热性中药对大鼠生理活动的影响,为中药药性理论研究打下基础。方法:将30只大鼠随机分为3组,空白组给予生理盐水,胡椒组给予胡椒水提取液,荜茇组给予荜茇水提液,按10 mL·kg-1的量连续灌胃30 d,分别测定肝脏能量代谢相关酶类的变化。结果:与空白组比较,胡椒组、荜茇组能显著升高Ca2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶以及LDH酶的活性,同时明显降低肝糖原含量,能够明显升高大鼠单位体重摄入能、消化能和可代谢能;胡椒组与荜茇组间结果比较无明显差异。结论:热性中药胡椒、荜茇能促进肝糖原的分解,增加LDH酶、Ca2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性,从而增加ATP酶的消耗,同时升高大鼠单位体重摄入能、消化能和可代谢能,进而促进大鼠肝脏能量代谢。

胡椒酸1.6-己二醇双酯的合成、结构表征和降血脂活性研究

以蒙药药材荜茇为起始原料,经提取、分离、水解、酯化等过程,得到胡椒酸1,6-己二醇双酯,为一种新型的胡椒碱衍生物.通过红外光谱、碳氢核磁共振、紫外光谱和元素分析等分析手段,确证了该胡椒碱衍生物的化学结构,初步研究了其降血脂活性.结果表明胡椒酸1,6-己二醇双酯具有良好的降血脂和降血糖活性.

FTIR方法和HPLC指纹图谱鉴别不同产地荜茇

荜茇是药食同源性中药,也是蒙、藏、维医的习用药材,临床用于治疗胃痛、腹泻等,也被用作香料或调味剂,因此其质量控制非常重要。已报道采用高效液相色谱法检测胡椒碱或荜茇宁,该方法缺乏整体性。傅里叶红外光谱法和HPLC指纹图谱联合应用考察4个产地6批次荜茇,基于共有峰率和变异峰率双指标序列分析荜茇的红外光谱,并建立荜茇的HPLC指纹图谱。结果显示两种方法对荜茇的评价结果相互印证,各批次荜茇的化学成分基本相同,质量比较稳定,其中云南产荜茇(S1)与其余5批次荜茇有一定差异。红外光谱共有峰率和变异峰率与HPLC指纹图谱均能从化学成分的角度评价药材的质量,具有整体性和综合性。荜茇的红外光谱由药材中多种化学成分的红外光谱叠加产生,而指纹图谱仅显示在波长254 nm条件下有紫外吸收的化合物,因此红外光谱在分析药材品质中更具有优势。同时考察了胡椒碱和荜茇宁的含量,云南(S1)和海南(S5, S6)较安徽亳州(S2)和广西(S3, S4)低,结果与红外和HPLC指纹图谱的结果有一定的差异,提示中药材的质量评价应更注重整体性。将FTIR和HPLC指纹图谱联合应用于荜茇的质量控制研究,两种方法互为补充,操作简便,样品使用量少,可做为药材快速鉴别的新方法,为荜茇的化学成分、质量控制和开发应用提供研究基础和依据。

HPLC法同时测定荜茇-大黄中6种成分的含量

目的建立HPLC法同时测定荜茇-大黄药对中胡椒碱、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量。方法采用Thermo Hypersil BDS C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以甲醇(A)-0.1%磷酸(B)为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 ml/min;检测波长254 nm;柱温30℃。结果各成分色谱峰分离度良好,胡椒碱、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的质量浓度分别在6.02~240.72μg/ml(r=0.9996)、1.85~74.18μg/ml(r=0.9993)、1.79~71.78μg/ml(r=0.9996)、1.59~63.55μg/ml(r=0.9995)、5.42~216.72μg/ml(r=0.9992)、1.62~64.64μg/ml(r=0.9997)内呈良好的线性关系,平均回收率分别为99.61%(RSD=1.50%)、99.48%(RSD=1.11%)、99.10%(RSD=1.31%)、99.72%(RSD=1.29%)、99.88%(RSD=1.25%)、99.06%(RSD=0.97%)。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于荜茇-大黄药对的质量控制。