人垂体腺瘤细胞原代培养的纯化及其激素的表达与分泌

目的探讨原代培养垂体腺瘤的细胞纯化方法及其激素表达与分泌的特点。方法采用三种原代培养方法对垂体腺瘤细胞进行培养,方法Ⅰ为目前常用的垂体瘤细胞培养方法,方法Ⅱ结合使用右旋颉氨酸(D-valineDMEMD-valine)培养液,方法Ⅲ采用反复贴壁法结合DMEMD-valine培养液培养。观察其细胞形态变化和生长特征,放射免疫法测定不同培养时间培养液中相应激素的水平。免疫组织化学染色法检测培养细胞生长激素(growthhormone,GH)、泌乳素(prolactin,PRL)的表达。结果3种方法均能成功培养出垂体腺瘤细胞,呈圆形或椭圆形,其纯度随培养时间的延长逐渐下降,培养第20天其平均纯度分别为40%,46%,96%。方法Ⅲ明显高于方法Ⅰ和方法Ⅱ,差异具有显著性意义(P<0.01);培养液中均含有相应激素,且3种方法的激素分泌量没有统计学差异(P>0.05);腺瘤细胞分别呈GH,PRL阳性表达,成纤维细胞表达I型胶原。结论方法Ⅲ可得到纯度达95%以上的人垂体腺瘤细胞,纯化后的细胞可分别呈GH和PRL阳性表达并具有良好的激素分泌功能,为进一步研究人垂体腺瘤的发病机理、药物治疗和颅外移植等方面奠定了实验基础。

功能性垂体腺瘤体外培养和激素分泌的特征研究

目的 :研究垂体生长激素 (GH)腺瘤和垂体催乳素 (PRL)腺瘤体外细胞培养及激素分泌特点。 方法 :11例垂体GH腺瘤和 15例垂体PRL腺瘤进行体外原代细胞培养 ,观察细胞形态的改变和生长特点 ,检测肿瘤细胞基础激素分泌量随培养时间的变化。 结果 :11例垂体GH腺瘤细胞培养成功 10例 ,15例垂体PRL腺瘤细胞培养成功12例 ;贴壁后的细胞被拉长 ,呈椭圆形、梭形或多边形 ,团状或片状生长 ;培养基中GH和RPL分泌量在一周内均维持较高水平。 结论 :按本研究条件培养的垂体腺瘤细胞有良好的分泌功能 ,可进行药物干预实验研究 ,对研究垂体腺瘤发病机制。

垂体腺瘤细胞白细胞介素-8的表达和分泌

目的 检测垂体腺瘤组织及原代培养的垂体腺瘤细胞中 IL- 8的表达水平 ,探讨 IL- 8与垂体腺瘤的发生和发展的相关性 .方法 免疫组织化学法检测 32例垂体腺瘤标本中IL- 8的表达水平 .酶消化法对手术切取的垂体腺瘤组织作原代培养 ,收集细胞培养上清 ,双抗体夹心 EL ISA法测定 IL - 8含量 .对组织学染色进行图像分析 ,结合肿瘤的侵袭性、病理分级等进行统计学检验 .结果 所有垂体腺瘤标本均为 IL - 8阳性 ,侵袭型垂体腺瘤的 IL- 8阳性细胞明显多于非侵袭型垂体腺瘤 (P<0 .0 5 ) ,IL - 8阳性染色强度也明显高于非侵袭型垂体腺瘤 (P<0 .0 1) .所有原代培养的垂体腺瘤细胞均有IL- 8分泌 ,侵袭型垂体腺瘤细胞上清液中 IL- 8的含量明显高于非侵袭型垂体腺瘤 (P<0 .0 1) . IL - 8的表达和分泌水平与患者性别、年龄以及分级无明显相关性 .结论 IL- 8的表达和分泌可能与垂体腺瘤的侵袭性有关 。

GGF、PCNA与垂体瘤侵袭性关系探讨

目的探讨胶质生长因子(GGF)、增殖细胞核抗原(PCNA)与人垂体腺瘤侵袭性生长的关系。对垂体瘤生长的生化机制作进一步探讨,并对术后生长作预测。方法免疫组织化学方法分析GGF、PCNA在147例垂体瘤中的表达,分析GGF、PCNA的表达与垂体腺瘤侵袭性关系。用GGF干预垂体瘤细胞,观察细胞生长、细胞周期变化情况。结果GGF、PCNA在多数侵袭性垂体瘤阳性表达,侵袭性垂体腺瘤中GGF表达显著大于非侵袭性腺瘤(P<0.05);复发组GGF、PCNA表达明显高于非复发组(P<0.05)。结论GGF可以明显促进垂体瘤细胞生长,与其侵袭性有重要作用。GGF、PCNA能够部分地反映垂体腺瘤细胞的增殖状态及侵袭潜能,可为临床上评价垂体腺瘤侵袭性、复发、治疗及预后提供参考。

α-干扰素和奥曲肽对垂体生长激素腺瘤的作用

目的 研究α 干扰素 (IFN α)和奥曲肽 (SMS)对人垂体腺瘤细胞激素分泌的影响。方法 将垂体生长激素 (GH)腺瘤 (11例 )标本进行体外细胞培养 ,每例培养细胞随机分成IFN α组、SMS组、IFN α +SMS组及对照组 ,每组 3管 ,观测药物干预后细胞激素分泌量的变化。结果 干预 2天和 4天时 ,IFN α对 6 0 % (6 /10例 )和 70 % (7/10例 )垂体腺瘤细胞GH分泌有明显抑制 ,与对照组比较GH分泌量减少 2 2 %～ 5 4 %和 30 %～ 6 1% (P <0 .0 5和P <0 .0 1) ,其中 ,6 7% (4/6例 )和 83% (5 /6例 )侵袭性垂体腺瘤细胞GH分泌受到明显抑制 ,与对照组比较GH分泌量减少 2 2 %～ 38%和 30 %～ 5 5 % (P <0 .0 5和P <0 .0 1) ;SMS对 4 0 % (4/10例 )垂体腺瘤细胞GH分泌无明显抑制作用 ,而IFN α对其中 3例有明显抑制GH分泌效应 ,与对照组比较GH分泌量减少 38%～ 5 4 %和 4 3%～ 6 1% (均P <0 .0 1)。结论 IFN α对大多数垂体GH腺瘤 ,尤其是侵袭性垂体腺瘤激素分泌有抑制作用 。

51例垂体腺瘤体外培养和免疫组化的研究

对51例垂体腺瘤手术标本进行体外培养和免疫组化研究。结果显示垂体腺瘤细胞体外培养有分泌功能.成活率达88％。血清激素水平高,免疫组化呈阳性的腺瘤细胞分泌激素一般也多。部分无功能腺瘤细胞也具有分泌功能,与免疫组化阳性程度不成正比。除催乳素腺瘤外,大多数腺瘤可同时分泌两种激素。实验结果提示细胞培养结合免疫组化、血清激素水平和临床症状,可以对垂体腺瘤作出形态与功能统一的、较完善的分类,有助于临床诊断和治疗。

垂体泌乳素分泌腺瘤细胞体外培养和激素分泌的研究

为研究垂体泌乳素 (PRL)腺瘤体外细胞培养及激素分泌的特征 ,选择经临床、手术和病理证实的 7例垂体PRL 腺瘤和 3例 PRL/ GH混合性腺瘤 ,采用细胞培养技术 ,观察细胞形态的改变和生长的特点 ,观测培养基基础激素分泌量随时间的改变。结果显示 :10例垂体腺瘤细胞培养成功 8例 ,成活率为 80 % ,贴壁后的细胞被拉长 ,呈椭圆形或梭形 ,呈团状或片状生长 ,培养基中 PRL 分泌量在 1周内维持较高水平 ,1周后缓慢下降 ,而 GH分泌量呈现迅速下降的趋势。提示培养基中高 PRL

人垂体腺瘤细胞原代培养的纯化

背景与目的:较纯的人垂体腺瘤细胞对垂体腺瘤的生物学特性、病因、发病机制等的研究非常重要,本文探讨原代培养垂体腺瘤的细胞纯化方法。方法:采用三种原代培养方法对垂体腺瘤细胞进行培养,方法Ⅰ为目前常用的垂体瘤细胞培养方法,方法Ⅱ结合使用右旋颉氨酸(D-valine)替代左旋颉氨酸(L-valine)的 DMEM D-valine培养液,方法Ⅲ采用反复贴壁法结合DMEM D-valine培养液培养。观察其细胞形态变化和生长特征。免疫组织化学染色法检测培养细胞生长激素(growth hormone,GH)、泌乳素(prolactin,PRL)的表达。结果:3种方法均能成功培养出垂体腺瘤细胞,呈圆形或椭圆肜,其纯度随培养时间的延长逐渐下降,培养第 20天其平均纯度分别为40%、46%、96%。方法Ⅲ明显高于方法Ⅰ和方法Ⅱ,差异具有显著性意义(P<0.01); 腺瘤细胞分别呈GH、PRL阳性表达,成纤维细胞表达Ⅰ型胶原。结论:反复贴壁法结合DMEM D-valine培养液培养法可得到纯度达95%以上的人垂体腺瘤细胞,纯化后的细胞可分别呈GH和PRL阳性表达,为进一步研究人垂体腺瘤的发病机理、药物治疗和颅外移植等方面奠定了实验基础。

垂体催乳素腺瘤细胞体外培养的实验研究

目的对催乳素(PRL)瘤进行体外细胞培养并进行激素分泌功能测定,从而为研究PRL瘤的病因、发病机制,为诊断和治疗PRL瘤提供实验基础。方法选取手术切除的垂体PRL腺瘤组织,采用悬浮细胞培养法,定时观察垂体腺瘤细胞的生长情况,并进行激素分泌功能测定。结果培养的PRL瘤细胞的特征:倒置相差显微镜下观察,原代培养的PRL腺瘤细胞呈椭圆形或梭形,24h后有部分PRL瘤开始半贴壁生长,大部分呈悬浮生长。于培养的约第10天开始,成纤维细胞数量开始增多,并逐渐取代PRL瘤细胞。PRL瘤细胞激素分泌功能测定:各例PRL腺瘤培养细胞PRL分泌量第1～5天逐渐增加,第6～8天达到高峰。测定结果显示培养的PRL瘤细胞在第7天功能状态最佳。结论通过本次试验研究,可以为以后治疗PRL腺瘤提供良好的试验基础,可以通过干预垂体腺瘤细胞,观察PRL腺瘤细胞的生长及激素分泌特征,为研究PRL腺瘤的发病机制、药物治疗及预后具有重要意义。

10例肢端肥大症患者体外瘤细胞培养研究

本文对10例肢端肥大症患者的体外瘤细胞培养，通过电镜观察和培养液中生长激素（GH）和催乳素（PRL）的测定，发现多数为GH－PRL混合性腺癌．

替莫唑胺治疗难治性垂体腺瘤一例报告并文献复习

目的探讨难治性垂体腺瘤有效的综合治疗方法。方法采用手术、伽玛刀及再次手术治疗1例难治性垂体腺瘤患者，然后根据其原代肿瘤细胞培养结果，选用替莫唑胺治疗2个疗程，总结分析其疗效。结果由于肿瘤生长迅速，常规手术、放疗、药物等治疗方法均难以控制难治性垂体腺瘤生长。根据切除肿瘤病理（Ki-67LI，MGMT表达水平）及原代肿瘤细胞替莫唑胺敏感实验结果选用替莫唑胺治疗，患者肿瘤停止快速生长，并有肿瘤液化坏死。结论对于常规手术、放疗及药物治疗无效的难治性垂体腺瘤，替莫唑胺化疗可能是一种替代治疗方法。

α-干扰素和溴隐亭对垂体生长激素腺瘤细胞的作用

目的研究α-干扰素(IFN-α)和溴隐亭(BC)对人垂体腺瘤细胞激素分泌的影响。方法将垂体生长激素(GH)腺瘤(11例)进行体外细胞培养,每例培养细胞随机分成IFN-α组、BC组、IFN-α+BC组及对照组,每组3管,观测药物干预后细胞激素分泌量。结果干预2d和4d时,IFN-α对6/10例和7/10例垂体腺瘤细胞GH分泌有明显抑制,与对照组比较GH分泌量减少22%～54%(P<0.05或P<0.01)和30%～61%(P<0.01),其中,4/6例和5/6例侵袭性垂体腺瘤细胞GH分泌受到明显抑制,与对照组比较GH分泌量减少22%～38%(P<0.05或P<0.01)和30%～55%(P<0.01);BC对5/10例垂体腺瘤细胞GH分泌无明显抑制作用,而IFN-α对其中4例有明显抑制GH分泌效应,与对照组比较GH分泌量减少22%～54%(P<0.05或P<0.01)和30%～61%(P<0.01)。结论IFN-α对大多数垂体GH腺瘤,尤其是侵袭性垂体腺瘤细胞GH分泌有抑制作用,对大多数BC耐药的垂体腺瘤细胞GH分泌亦有抑制效应。

侵袭性垂体腺瘤成纤维细胞的体外培养及其生物学特性

目的建立入侵袭性垂体腺瘤成纤维细胞分离培养的方法,探讨其生物学特性及其在垂体瘤侵袭性生长中的作用。方法差速贴壁筛选法分离培养侵袭性垂体腺瘤成纤维细胞,进行原代及传代培养,倒置相差显微镜下观察原代及传代细胞形态及生长特性,免疫组化染色进行成纤维细胞鉴定,MTT法绘制传代细胞的生长曲线,电镜观察其超微结构。结果侵袭性垂体腺瘤成纤维细胞体外培养生长状况良好,具有活跃的增殖能力。细胞胞体较大,形态不规则,细胞质中可见丰富的粗面内质网和核糖体,高尔基复合体发达,I型胶原及波形蛋白表达率在95%以上。结论应用差速贴壁筛选法成功培养出侵袭垂体腺瘤成纤维细胞,其具有旺盛的增殖能力,可能在垂体瘤侵袭性生长过程中起重要作用。

人垂体瘤细胞的原代培养及鉴定

目的探索一种改良的人垂体瘤细胞的原代培养方法。方法收集南方医科大学南方医院神经外科自2014年11月至2015年6月手术切除且经病理证实的垂体瘤标本36例。改良文献报道的垂体瘤细胞培养方法，同时对其进行纯化、传代培养。CCK-8法检测垂体瘤细胞的增殖能力；免疫荧光染色、Western blotting检测细胞角蛋白、波形蛋白的表达。结果培养的垂体腺瘤细胞有聚集趋势，透亮且折光性强，能稳定传代并保持良好的功能。最长5代。垂体瘤细胞的生长曲线呈S型，在体外仍具有增殖能力；免疫荧光染色、Westen blotting检测结果显示垂体瘤细胞角蛋白表达阳性、波形蛋白表达阴性，为上皮来源细胞。结论利用反复差速贴壁法，更换培养皿．各类型垂体腺瘤细胞在体外悬浮培养下可增殖且稳定传代。

α-干扰素和溴隐亭对垂体泌乳素腺瘤细胞的作用

目的研究α-干扰素(IFN-α)和溴隐亭(BC)对人垂体腺瘤细胞激素分泌的影响。方法将垂体泌乳素(PRL)腺瘤(15例)进行体外细胞培养,每例培养细胞随机分成IFN-α组、BC组、IFN-α+BC组及对照组,观测lFN-α和BC干预后细胞PRL分泌量。结果15例垂体腺瘤培养成功12例;干预2d和4d时,IFN-α对58%(7/12例)和75%(9/12例)垂体腺瘤细胞分泌有明显抑制,其中,57%(4/7例)和86%(6/7例)侵袭性垂体腺瘤细胞分泌受到明显抑制;BC对41%(5/12例)垂体腺瘤细胞分泌无明显抑制作用,而IFN-α对其中2例和4例有明显抑制分泌效应(P<0.05或P< 0.01)。结论IFN-α对大多数垂体PRL腺瘤,尤其是侵袭性垂体腺瘤细胞激素分泌有抑制作用,对大多数BC不敏感的垂体PRL腺瘤细胞激素分泌亦有抑制效应。

单层培养的垂体生长激素分泌瘤细胞对生长激素释放激素和生长抑素的反应

本文研究7例肢端肥大症患者垂体单纯生长激素(GH)分泌瘤单层培养细胞对GH释放激素(GRF)和生长抑素(SS)的反应。培养液中10^(-8)M GRF使5例瘤细胞GH分泌增加171.6±22.6％,10^(-7) M GRF使全部7例瘤细胞GH分泌明显升高到220.6±47.7％。10^(-9)～10^(-7) M SS使5例瘤细胞GH基础分泌下降到50.4±9.8％。同时加入10^(-8)或10^(-7) M的GRF和SS,在7例瘤细胞上均看到GRF兴奋GH分泌的作用被完全阻断。3例病人术前接受GRF和SS试验,血清GH水平的变化分别为对照的222.0±30.6％和10.7±4.7％。结果表明单层培养的垂体GH瘤细胞对GRF和SS仍有反应。

颅外垂体移植术供体细胞的培养研究

目的 本实验通过对人垂体腺瘤细胞体外培养实验 ,证实培养技术的可靠性和可重复性 ;为颅外移植术应用垂体腺瘤细胞作为移植物供体细胞的实施 ,以及为腺垂体移植细胞库的建立提供有用的实验依据。方法 利用手术切除的人垂体腺瘤组织做体外培养 ,动态观察培养细胞的生长状态 ,通过放免测定和免疫化学染色技术 ,评价体外培养的垂体细胞的功能状态。结果 人垂体腺瘤细胞经体外培养仍具有分泌激素的功能 ,6例GH腺瘤均有大量GH分泌 ,5例PRL腺瘤分泌大量PRL ,3例无功能腺瘤细胞培养液中分别有不同程度的FSH及LH、PRL分泌。结论 培养成功的 14例人垂体腺瘤细胞在体外均具有激素分泌功能。为应用垂体腺瘤细胞为移植物供体 。