PIWI蛋白相互作用RNA-47851在胃腺癌中的表达及其对增殖的影响

目的探讨PIWI蛋白相互作用RNA-47851(piR-47851)在胃腺癌中的表达、临床病理意义及其对增殖的影响。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检查79例胃腺癌组织中piR-47851的表达情况,分析piR-47851的表达水平与临床特征和生存预后的关系。通过细胞增殖实验观察piR-47851对胃癌细胞增殖活性的影响。应用信息学网站预测piR-47851的下游靶基因。建立MAPK1基因3′非翻译区(UTR)的野生型和突变型质粒,应用双荧光素酶报告系统验证piR-47851与MAPK1基因3′UTR结合从而抑制MAPK1蛋白合成。应用Rescue实验确认piR-47851对MAPK1直接调控作用,并探讨piR-47851/MAPK1对胃癌细胞增殖的影响。通过实验性裸鼠皮下荷瘤实验观察降低piR-47851表达对移植瘤体积和质量的影响;通过增殖指标Ki-67染色观察降低piR-47851表达对移植瘤细胞增殖活力的影响。结果qRT-PCR实验结果提示,79例胃腺癌组织中piR-47851的表达水平显著高于癌旁正常胃组织(P<0.05)。piR-47851表达水平与肿瘤大小、分化程度和生存预后密切相关(P<0.05)。生物信息学提示piR-47851与MAPK1基因3′UTR有互补的结合位点。双荧光素酶报告基因实验得出在MAPK1野生型转染组中,piR-47851能显著抑制荧光酶活性,而在MAPK1突变组中无抑制作用。CCK-8增殖活性实验表明,过表达piR-47851后,胃癌细胞增殖活性升高;降低piR-47851后,细胞增殖活性下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。Rescue实验提示,在改变piR-47851和(或)MAPK1的表达后再通过qRT-PCR检测MAPK1的表达水平,MAPK1都能受到piR-47851的调控。在功能上过度表达MAPK1可以降低piR-47851对胃癌细胞的增殖促进作用,而减低MAPK1表达可进一步提升胃癌细胞的增殖活性。在裸鼠荷瘤实验中,降低piR-47851表达后肿瘤生长体积和质量显著减小(P<0.05)。增殖指数Ki-67染色表明减低piR-47851表达后增殖活性细胞数目显著低于对照组(P<0.05),验证了piR-47851能促进细胞增殖。结论胃腺癌组织中piR-47851表达水平升高,与肿瘤大小和生存预后密切相关。piR-47851通过与MAPK1的3′UTR结合来下调MAPK1蛋白表达,从而促进胃癌的细胞增殖。

鸡Piwi蛋白的亚细胞定位研究

通过构建2种真核表达载体比较Piwi蛋白在真核细胞中的表达部位,为进一步研究Piwi蛋白的生物学功能提供依据。采用RT-PCR方法克隆了狼山鸡睾丸组织中Piwi基因CDS,构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的融合表达载体pEGFP-C1-Piwi,脂质体PEI介导基因转染NIH-3T3细胞,同时构建pcDNA3.1-Piwi真核表达载体,采用细胞间接免疫荧光方法检测Piwi蛋白在NIH-3T3细胞的表达部位。结果表明,成功克隆出公鸡Piwi基因的全序列CDS,大小为2 604bp,与GenBank中预计的序列基本一致;融合表达载体pEGFP-C1-Piwi在整个细胞中都有表达;而间接免疫荧光方法检测到pcDNA3.1-Piwi载体主要在NIH-3T3细胞质中表达。Piwi蛋白主要在细胞质中表达,采用间接免疫荧光方法比EGFP报告基因法更为可靠,适合目的蛋白的亚细胞定位研究。

Piwi蛋白相互作用RNA-823在胃癌中的表达及临床意义

目的检测胃癌组织中Piwi蛋白相互作用RNA-823(piRNA-823)的表达情况,分析其临床意义。方法选取76例胃癌患者的胃癌组织及癌旁正常组织(距肿瘤组织﹥5 cm)标本,检测piRNA-823表达水平,分析其与患者临床特征的关系以及对远处转移的影响。结果76例胃癌患者胃癌组织中piRNA-823表达水平为(2.34±0.68),低于癌旁正常组织的(3.51±0.71),差异有统计学意义(P﹤0.05)。以胃癌组织中piRNA-823检测值﹤癌旁正常组织的患者(50例)为低表达组,另外26例为高表达组。piRNA-823低表达组患者的总生存期短于高表达组,差异有统计学意义(P﹤0.05)。piRNA-823高表达与低表达胃癌患者浸润深度、淋巴结转移情况、TNM分期比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。多因素分析显示,TNM分期是胃癌侵袭转移的影响因素(P﹤0.01),而piRNA-823表达情况非胃癌侵袭转移的影响因素(OR=1.01,95%CI:0.89~3.98)。结论piRNA-823在胃癌组织中低表达,与肿瘤的抑制作用有关,可当作胃癌的诊断指标之一以及靶向治疗的依据。

Piwi蛋白与基因的表达调控及其在肿瘤中的作用

Piwi蛋白是Argonaute蛋白家族的一类,正常情况下可表达于不同物种的雄性睾丸组织中,主要与Piwi相关RNA(piRNA)相互作用,导致转座子基因的沉默,保护生殖干细胞基因组的稳定性和完整性,对生殖干细胞的自我更新、配子和胚胎的发育具有重要的作用。另外,在人类多种肿瘤组织如胃癌、乳腺癌、宫颈癌中发现有Piwi蛋白表达,同时在肿瘤干细胞中也有Piwi蛋白的表达,抑制其表达可通过多种不同机制抑制肿瘤细胞的增殖和凋亡,说明Piwi蛋白与肿瘤的发生发展有关。现就Piwi蛋白调控基因表达及其与肿瘤发生发展的关系作一综述。

piRNA与PIWI蛋白家族功能的研究进展

生物体中的RNA可以分为编码RNA和非编码RNA两大类,非编码RNA中存在许多小分子RNA,它们组成了细胞中的RNA调控网络。近年来在哺乳动物的睾丸内发现了一种新型的非编码小分子RNA-piRNA,这种小分子RNA与Argonaute家族中的PIWI蛋白成员相结合才能发挥调控作用。两者共同参与基因表达和调控、蛋白质翻译、配子发生等生物学过程,对生物的生长发育产生了深远的影响。该文对piRNA和PIWI蛋白的结构、特性以及相互作用进行综述。

肝细胞癌组织中前列腺干细胞抗原、piwi样蛋白1和T-box转录因子2的表达分析

目的 探讨前列腺干细胞抗原（prostate stem cell antigen,PSCA）、piwi样蛋白1（piwi-like 1,PIWIL1）和T-box转录因子2 （T-box transcription factor 2,TBX2）的表达在肝细胞癌（HCC）中的临床意义.方法 收集2000～2003年HCC和相应癌旁正常组织所制备的石蜡切片各64例,应用免疫组织化学SP方法检测石蜡切片中PSCA,PIWIL1和TBX2蛋白的表达,分析三者的表达与HCC患者临床病理指标的关系.结果 在64例HCC的癌旁正常组织中,PSCA,PIWIL1和TBX2的表达率分别为17％ （11/64）,0％（0/64）和9％（6/64）,而HCC中三者的表达率分别为73％ （47/64）,19％（12/64）和75％ （48/64）,PSCA,PIWIL1和TBX2的表达明显高于癌旁正常组织（x2=40.859,13.241,56.505,P均＜0.05）;PSCA,PIWIL1和TBX2的表达均与患者性别、年龄无明显相关性（x2=0.651～3.864,P值均＞0.05）,但是均与临床分期有关（x2=12.923～39.511,P值均＜0.05）;PSCA的表达率随着HCC的病理分级而升高（x2=18.047,P=0.000）,而PI-WIL1和TBX2的表达则与病理分级无明显相关性（x2=3.356～5.688,P值均＞0.05）;除了PIWIL1以外（x2=3.156,P=0.078）,PSCA和TBX2的表达与淋巴结转移有相关性（x2=6.409～8.466,P值均＜0.05）;PSCA和PIWIL1的免疫染色定位于肝细胞的胞浆中,而TBX2则定位于肝细胞的胞浆和胞核中.结论 PSCA,PIWIL1和TBX2在HCC中的表达研究为HCC发生发展分子机制提供了新的资料,PSCA和TBX2可能会成为治疗肝细胞癌的分子靶点.

miRNA、PIWI蛋白与卵巢癌关系的研究进展

卵巢癌是女性生殖器三大肿瘤之一,由于卵巢位于盆腔深部,早期病变不易发现,晚期病例也缺乏有效的治疗方案,因此其致死率居于妇科恶性肿瘤首位,即使接受规范化治疗,晚期卵巢癌患者的5年存活率仅为30%左右。卵巢癌的发生、发展过程中也有多个癌基因和(或)抑癌基因的异常表达,具体的发生机制尚未完全阐明。随着近年来对小RNA及其相关蛋白家族的研究越来越深入,发现多种miRNA 参与卵巢癌的发生与发展,与卵巢癌的增殖、凋亡、侵袭、迁移以及对化疗药物耐药等密切相关。另也有研究结果表明,PIWIL2在卵巢癌中有阳性表达。本文将就miRNA和PIWI蛋白与卵巢癌的发生发展的关系分别作一探讨。

Piwi-interacting RNA在肿瘤中的研究进展

piRNA（Piwi—interactingRNA）是一类长度为26～31nt的新型小非编码RNA，可与PIWI蛋白结合从而调控转录基因沉默过程、修饰异染色质和维持生殖系和干细胞功能等。近年来，研究发现piRNA在多种癌组织中表达异常，与肿瘤的发生及扩散、疾病的预后等密切相关，有望成为肿瘤临床诊断和治疗的新靶点。本文旨在浅析piRNA在肿瘤中的作用机制，为临床诊疗提供新思路。

利用家蚕核型多角体病毒Bac-to-Bac表达系统在BmN细胞中可溶性表达PRG-1蛋白(英文)

杆状病毒Bac-to-Bac表达系统由于操作简便等优点,被广泛应用于外源蛋白的表达。利用新构建的家蚕核型多角体病毒Bac-to-Bac系统可溶性表达一个大分子质量的融合蛋白———piwi相关基因编码蛋白PRG-1。为了提高目的蛋白的表达量,对重组病毒感染剂量及产物收获时间进行优化,并利用GST亲和层析纯化融合蛋白。结果表明在家蚕卵巢培养细胞BmN中表达的重组GST-PRG-1是可溶性蛋白;最佳的感染条件是病毒粒子对BmN细胞的感染复数(MOI)=1,并在感染后96 h收获细胞。试验结果表明,新构建的家蚕核型多角体病毒Bac-to-Bac表达系统可用于大分子蛋白的可溶性表达。

新型肿瘤标志物piRNA早期诊断非小细胞肺癌的研究进展

非小细胞肺癌(NSCLC)是全球范围内发病率最高的恶性肿瘤,随着人类生活方式的日益转变及生活环境的逐渐恶化,该病发病率仍有逐年增长趋势,严重威胁人类生命健康安全。早期积极有效的诊治是提高NSCLC患者生存率的关键,随着近年来分子生物学技术的长足发展,肿瘤标志物在恶性肿瘤的筛查、诊断等方面起着至关重要的作用,亦是目前肿瘤研究领域关注的热点。PIWI蛋白相互作用RNA(piRNA)是最新发现的一类非编码小RNA,其主要是通过和PIWI蛋白相互作用发挥功能,参与了基因组稳定性、表观遗传学及生殖干细胞分化调控等过程,和多种疾病发生、进展有关,尤其是和肿瘤的关联性已成为目前国内外研究的热点。本文通过对piRNA在NSCLC中的作用及机制有关研究进展予以综述,以期为早期诊断NSCLC提供新的靶点和思路。

家蚕Piwi亚家族基因的克隆、表达及进化分析

为克隆家蚕Bombyx mori Piwi亚家族蛋白基因cDNA全长序列,分析其分子特征和表达模式,探究Piwi亚家族蛋白在家蚕中的生理功能,本研究利用已知物种的Piwi亚家族蛋白搜索家蚕基因组,预测获得家蚕Piwi亚家族蛋白基因siwi1和siwi2,采用RACE技术克隆siwi1和siwi2的全长cDNA序列,利用ORFfinder、Gene-Explorer、InterPro等分析其分子特征;其次,利用已知的所有物种Piwi蛋白及其类似物Piwil构建系统发育树;最后,通过荧光定量PCR技术检测了siwi1和siwi2在丝腺、马氏管、中肠、头部、卵巢和精巢以及不同发育时期(卵、1~5龄幼虫、蛹、成虫)的表达水平,结果显示,克隆获得了siwi1 cDNA全长3277 bp,包含部分5′UTR、完整的开放阅读框ORF和3′UTR,获得了siwi2的部分序列,其中siwi1对应BmPiwi,siwi2对应BmAgo3。系统发育结果显示,家蚕Piwi亚家族蛋白与乳草长蝽Oncopeltus fasciatus、黑腹果蝇Drosophila melanogaster、橘小实蝇Bactrocera dorsalis、优雅蝈螽Gampsocleis gratiosa、斯氏按蚊Anopheles stephensi、褐飞虱Nilaparvata lugens的PIWI蛋白以及东亚飞蝗Locusta migratoria的PIWI2和PIWI3蛋白亲缘关系最近,和三疣梭子蟹Portunus trituberculatus的PIWI2和PIWI3同为一支。家蚕AGO3蛋白与小菜蛾Plutella xylostella的AGO3亲缘关系最近,与西方玉米根虫Diabrotica virgifera virgifera、白蜡窄吉丁Agrilus planipennis的AGO3及东亚飞蝗Locusta migratoria的PIWI1同属一支,与橘小实蝇Bactrocera dorsalis的AGO3同属一总支。组织表达结果表明BmPiwi在精巢表达水平显著高于其他组织,其次是卵巢及头部,而BmAgo3在头部表达水平显著高于其他组织。BmPiwi和BmAgo3在卵期表达量最高,但在初孵幼虫中表达量迅速下降,并在整个幼虫时期都维持低表达状态,直至蛹期开始表达量出现大幅回升,并维持高水平表达至成虫期。本研究发现BmPiwi和BmAgo3在家蚕中的表达具有明显的时空特异性,在生殖组织以及需要进行大量细胞活动的时期,家蚕Piwi亚家族蛋白基因的表达均发生了明显的变化,为进一步探测家蚕Piwi亚家族的生理功能提供了研究方向和理论基础。

PIWIL2蛋白在肝门部胆管癌组织和细胞株中的表达及临床意义

目的研究PIWIL2在肝门部胆管癌组织和细胞株中的表达及其与临床病理特征和根治性切除术预后的关系。方法采用免疫组织化学方法检测41例肝门部胆管癌和10例正常胆管组织中PIWIL2的表达；蛋白印迹和细胞免疫荧光技术检测人胆管癌细胞系QBC939和人正常胆管上皮细胞HIBEpic株中PIWIL2的表达。采用Kaplan—Meier法对胆管癌根治术后患者进行生存期的单因素及多因素分析。结果PIWIL2在肝门部胆管癌和QBC939细胞中的表达明显高于对照组织和HIBEpie细胞（P〈0．05）；PIWIL2在低、中分化胆管腺癌的表达明显高于高分化腺癌（P〈0．05）。单因素生存分析显示根治术后PIWIL2高表达的生存期较短（P〈0．05）。多因素分析显示PIWIL2的表达水平是影响胆管癌根治术预后的独立危险因素（P〈0．05）。结论PIWIL2在肝门部胆管癌组织和细胞系中表达上调，其表达水平与肿瘤分期及分化程度相关，是影响肝门部胆管癌根治切除预后的独立危险因素。

非编码RNA与卒中后继发性脑损伤的研究进展

非编码RNA(nc RNA)是一类不编码蛋白质的RNA,但在转录、翻译等过程中起着至关重要的调控作用,其功能尚未完全明确。脑卒中作为一类高死亡率、高致残率的疾病,nc RNA的出现为卒中的诊治提供了新的方向。本文旨在将近些年来nc RNA与卒中后继发性脑损伤的研究进展进行总结。

piRNA通路在生精过程中的作用

piRNA是一类特异性与Argonuat蛋白家族中的PIWI蛋白相互结合形成piRNA沉默复合体(piRNA-induced silencing complex,piRISC)而在生物体内发挥重要作用的非编码小RNA,主要作用于生殖系统。piRNA通路不仅通过抑制转座子,还通过泛素化降解、调控mRNA表达、基因甲基化修饰等方式来发挥在生精过程中的特定作用。本文拟对piRNA通路在生精过程中的作用进行综述。

piRNA通路与精子发生的研究进展

与PIWI蛋白相互作用的RNA(piRNA)是一类动物生殖系细胞特异性表达的小分子非编码RNA。本文从piRNA分子、PIWI蛋白及其他相关蛋白3个方面系统概括了piRNA通路。发现piRNA通路不仅通过抑制转座子机制,还可以通过调控翻译、生殖系干细胞的维护、RNA的降解、基因防御等方面来影响精子发生。因此对piRNA通路在精子发生中的最新研究进展进行了综述。

piRNA在卵巢癌中的研究进展

PIWI蛋白相互作用RNA(PIWI-interacting RNA,piRNA)及PIWI蛋白通过表观遗传沉默影响肿瘤的发生发展,并与恶性肿瘤的增殖、侵袭、转移和预后不良密切相关,是潜在的新型肿瘤标志物和预后判断因子。卵巢癌是妇科三大恶性肿瘤之一,晚期易复发转移、产生耐药和病死率高,目前仍缺乏有效的早期肿瘤标志物和诊断方法。近年有研究表明,piRNA和PIWI蛋白在卵巢癌中呈异常表达,通过转录后机制参与调控卵巢癌的发生发展。本文主要从piRNA的生物学特性、在肿瘤中表观遗传沉默的相关机制和piRNA在卵巢癌中的作用及其机制最新研究进展进行综述,为研究早期诊断卵巢癌的分子标志物提供参考依据。

piRNA的形成及其在雌性动物中生物学功能研究进展

piRNA是继siRNA和miRNA之后发现的一类新型非编码小RNA,其与Piwi蛋白协同作用参与piRNA通路,保护动物生殖细胞的遗传信息免受分子寄生虫如转座子的有害影响。近年来,人们对piRNA发生过程的相关蛋白及生物学作用做了研究,发现多种Piwi亚家族蛋白能与piRNA结合形成Piwi-piRNA复合体,通过表观遗传调控参与生殖细胞形成与发育、生殖干细胞分化、性别决定等生物学功能。本文主要围绕piRNA的形成及特点、Piwi-piRNA复合体发挥生物学作用的方式、piRNA在雌性动物中的生物学功能这3个方面对近期的研究进展进行综述,为深入探究piRNA调控雌性动物繁殖机制提供参考。

非编码RNAs在人牙髓干细胞中的调控作用及机制

背景:人牙髓干细胞是一种重要的口腔间充质干细胞,具有很强增殖和多向分化能力。随着人类基因组计划的不断深入,人们逐渐意识到功能性非编码RNAs在调节基因表达方面有着至关重要的作用。目的:对非编码RNAs在人牙髓干细胞中的研究进展进行论述。方法:由第一作者以“ncRNAs,human dental pulp stem cell,regenerative medicine”为英文关键词,以“长链非编码RNAs,人牙髓干细胞,再生医学”为中文关键词,检索2005至2019年期间收录在PubMed、Medline、中国知网、万方等数据库中的文献,排除与文章研究目的无关及重复性的文献,纳入符合标准的71篇文献进行综述。结果与结论:目前普遍认为,非编码RNAs可以作为特定细胞状态的信号,为临床提供预后价值,甚至为患者提供治疗选择。随着再生医学应用的不断发展,人牙髓干细胞将越来越受到关注,研究非编码RNAs与人牙髓干细胞的关系,将为人牙髓干细胞的临床应用研究寻觅了一条新的途径。

piRNA在小鼠雄性生殖系统中的起源与功能

PIWI相互作用RNA（pi RNA）是2006年新发现的一种24-32个碱基长度的非编码小RNA。pi RNA与生殖特异的PIWI蛋白结合,在生殖系统的发育中起重要作用。雄性小鼠的生殖系统中,基因组中pi RNA簇和转座子区域转录出pi RNA前体,pi RNA前体出核后在初级生成途径和次级生成途径下生成成熟的pi RNA。成熟pi RNA首先能够沉默逆转座子转录出的RNA,降低转座子的活跃度,从而维持基因稳定,维持生殖细胞的正常发育。另外pi RNA还具有调节基因表达的功能,在转录水平和转录后水平上参与精子发生。

PIWI样蛋白4在肝癌中的表达及其对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的 探讨PIWI样蛋白4（PIWIL4）在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义,并观察其对肝癌细胞LM3增殖、迁移及侵袭能力的影响.方法 应用免疫组织化学法检测49例肝细胞癌标本及其配对癌旁组织PIWIL4的表达并分析其与临床病理特征的关系;构建人PIWIL4慢病毒表达载体并转染LM3肝癌细胞,采用噻唑蓝（MTT）和Transwell实验等方法观察其与对照组比较增殖、迁移及侵袭能力的变化.结果 PIWIL4在肝细胞癌组织中高表达（43/49）,在癌旁组织（37/49）及正常肝组织（8/15）中表达较低（P＜0.05）,PIWIL4同肿瘤分化程度、肿瘤大小及甲胎蛋白（AFP）水平明显相关（P＜0.05）;在体外实验显示慢病毒转染的PIWIL4高表达LM3细胞增殖、迁移及侵袭能力明显增强（P＜0.05）,过表达组及对照组发生迁移的细胞数分别为（349.3 ±27.4）个比（75.7±16.4）个（P＜0.05）.结论 PIWIL4表达与肝癌的发生、发展密切相关,其表达上调可明显增强肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力.