抗纤复方药物血清对HSC-LI90细胞Ⅰ型、Ⅳ型前胶原和基质金属蛋白酶及其组织抑制因子-1基因表达的影响

目的 :探讨抗纤复方药物血清对肝星形细胞 (HSC)LI90细胞 (HSC LI90 )Ⅰ型、Ⅳ型前胶原和基质金属蛋白酶 (MMPs)及其组织抑制因子 (TIMP 1)基因表达的影响。方法 :以 0 5、2 0、4 0 g/kg等不同剂量抗纤复方灌胃大鼠 ,制备药物血清 ,作用于HSC LI90细胞 4 8h ,应用Northern印迹杂交的方法 ,检测Ⅰ型、Ⅳ型前胶原、基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )及膜型基质金属蛋白酶 (MT1 MMP)及其组织抑制因子(TIMP 1)基因的表达 ,并用酶图法检测基质金属蛋白酶 2的活性。结果 :(1)抗纤复方不同浓度药物血清能抑制HSC LI90细胞Ⅰ型、Ⅳ型前胶原及其组织抑制因子TIMP 1的基因表达 (P <0 0 5或P <0 0 1) ;(2 )能增加膜型基质金属蛋白酶基因表达 (P <0 0 1) ;(3)对基质金属蛋白酶 2基因表达及活性无影响 (P >0 0 5 )。结论 :(1)抗纤复方具有抗肝纤维化作用 ;(2 )抗纤复方抑制HSC LI90细胞TIMP 1基因表达水平 ,促进胶原降解 ,可能是抗肝纤维化的作用机制之一。

糖肾通络方对早期糖尿病肾病患者血清Ⅳ型胶原及尿微量清蛋白排泄率的影响

目的:观察糖肾通络方治疗早期糖尿病肾病(DN)的临床疗效及作用机制。方法:将45例早期DN患者随机分为糖肾通络方组25例,苯那普利组20例,观察治疗前后中医证候积分,检测治疗前后血中糖化血红蛋白(HbA1c)、内生肌酐清除率(CCr)、空腹血糖(FBG)、三酰甘油(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)及尿微量清蛋白排泄率(UAER)水平。结果:两组治疗后中医证候积分糖肾通络方组较苯那普利组显著降低(P<0.01);临床总有效率糖肾通络方组为84.00%,苯那普利组为55.00%,两组总有效率比较,差异具有显著性(P<0.05);治疗后糖肾通络方组HbA1c、FBG、TG、TC、LDL-C、Ⅳ-C、UAER均较苯那普利组显著降低(P<0.01),血HDL-C含量较苯那普利组显著升高(P<0.01)。结论:糖肾通络方具有改善临床症状,调节血糖、血脂,改善肾功能的作用,其机制与阻止或抑制Ⅳ-C分泌,促进Ⅳ-C降解,改善肾小球基膜及系膜细胞基质有关。

益气活血方联合SOX化疗对Ⅲ至Ⅳ期胃癌患者血清肿瘤标志物与T淋巴细胞亚群及生存质量的影响

目的观察益气活血方+SOX化疗对Ⅲ~Ⅳ期胃癌患者血清肿瘤标志物、T淋巴细胞亚群及生存质量的影响。方法选取本院2018年1月至2019年1月Ⅲ~Ⅳ期胃癌患者68例,按随机数字表法分两组,各34例。参照组采取SOX化疗方案治疗,试验组于参照组基础上采取益气活血方治疗,分析两组疗效、不良反应、治疗前后血清T淋巴细胞亚群(CD8+、CD4+、CD3+)、血清糖蛋白抗原72-4(CA72-4)、CA19-9、癌胚抗原(CEA)水平、生存质量(WHOQOL-100)评分。结果试验组疾病控制率76.47%,高于参照组52.94%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,试验组血清CD4+、CD3+水平分别为(32.19±2.18)%、(46.10±3.78)%,均高于参照组,血清CD8+水平为(28.14±3.39)%,低于参照组,差异均有统计学意义(均P<0.05);治疗后,试验组血清CA72-4、CA19-9、CEA水平分别为(27.26±5.76)ng/ml、(52.17±7.86)ng/ml、(13.48±5.46)ng/ml,均低于参照组,差异均有统计学意义(均P<0.05);治疗后,试验组WHOQOL-100评分为(80.26±7.87)分,高于参照组,差异有统计学意义(P<0.05);试验组不良反应发生率为5.88%,低于参照组26.47%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Ⅲ~Ⅳ期胃癌患者采取益气活血方+SOX化疗,临床效果确切,能降低血清肿瘤标志物水平,改善免疫功能,提升生存质量,且具有安全性。

扶正化瘀方对大鼠纤维化肺组织MMP-2活性与IV型胶原表达的影响

目的:观察扶正化瘀方影响肺组织MMP-2活性与IV型胶原表达的抗肺纤维化作用机制。方法:一次性气管内注射博来霉素诱导肺纤维化模型,分模型对照组、扶正化瘀方组、甲强龙组,每组各14只模型大鼠。另设正常组10只,一次性气管内注射等量生理盐水。造模次日扶正化瘀方组予以4.6 g.kg-1大鼠体重的扶正化瘀方灌胃;甲强龙组予以15 mg.kg-1大鼠体重的甲强龙腹腔注射,正常组和模型组灌喂等量生理盐水;每日1次,共4周。Masson染色观察肺组织胶原沉积,称量肺重量与计算肺系数,Jamall氏法测定肺组织羟脯氨酸含量,明胶酶图法检测肺组织MMP-2与MMP-9的活性,Western blot检测肺组织MMP-2,MMP-9和Ⅳ型胶原的蛋白表达量。结果:与正常组比较,模型组肺系数明显增加,肺组织胶原沉积明显,Hyp含量、Ⅳ型胶原、MMP-2与MMP-9蛋白表达增加,MMP-2活性水平升高,尤其是活性型MMP-2活性升高明显,而MMP-9活性略有下降。与模型组比较,扶正化瘀方与甲强龙均不同程度减轻模型组肺组织胶原沉积与Ⅳ型胶原蛋白表达,减少肺系数与肺组织Hyp含量,降低MMP-蛋白与2活性水平,尤其是活性型MMP-2水平。其中,对肺系数、Ⅳ型胶原蛋白与MMP-2蛋白与活性的抑制作用以扶正化瘀方较为明显。而2种药物对MMP-9蛋白表达与活性无明显影响。结论:扶正化瘀方具有良好的抗大鼠肺纤维化作用,其部分作用机制在于:抑制纤维化肺组织的MMP-2蛋白及其活性,以减少组织的炎性破坏;抑制Ⅳ型胶原过度表达,以减少胶原的病理增生沉积。

通络方防治大鼠肾小球硬化的作用机制

目的观察通络方对肾组织中Ⅳ型胶原(ColIV)、纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响,探讨通络方防治大鼠肾小球硬化的作用机制。方法通过光镜观察治疗组肾脏病理学改变,同时应用免疫组化技术及图像采集分析系统测定各组大鼠肾脏组织中Ⅳ-C、FN、LN、TGF-β1表达情况。结果通络方可明显降低大鼠肾组织中ColIV、FN、LN、TGF-β1表达(P<0.05或P<0.01),减轻肾脏的病理损害(P<0.01)。结论通络方可能是通过降低肾脏组织中ColIV、FN、LN及TGF-β1表达起到治疗作用的。

健脾补肾药对脾虚大鼠环核苷酸及甲状腺激素水平的影响

目的 :观察健脾补肾方药对实验性脾虚证大鼠环核苷酸及甲状腺激素水平的影响 ,探讨该方防治脾虚证的作用机理及脾与肾相互关系的意义。方法 :选用SD雄性大鼠 ,随机分为 4组 :即正常对照组 ,脾虚模型组 ,健脾补肾方高、低剂量组 ,采用大黄复制脾虚证动物模型 ,观察各组动物血浆环磷酸腺苷 (cAMP)、环磷酸鸟苷 (cGMP)及血清甲状腺素 (T4)、三碘甲腺原氨酸 (T3 )、促甲状腺素 (TSH)水平的变化。结果 :脾虚模型组大鼠血浆cAMP含量及cAMP/cGMP比值均比正常对照组升高 (p <0 0 1) ,T3 、T4含量比正常对照组下降 (p<0 0 1)。而健脾补肾方药能降低实验性脾虚证大鼠体内cAMP含量及cAMP/cGMP比值 (p <0 0 1) ,提高T3 、T4含量 (p <0 0 1)及脾脏、胸腺比值 ,又可使肾脏组织重量减轻等作用。 结论 :健脾补肾中药可以消除大黄的药物影响 ,防止出现脾虚症候 ,其作用机理与调节cAMP、cGMP及甲状腺激素水平有关。

活肾通络方改善慢性肾衰患者致纤维化因子临床研究

目的观察活肾通络方对慢性肾衰患者血清中致纤维化因子的影响。方法采用随机对照研究,将60例慢性肾衰患者随机分为2组,各30例,治疗组予活肾通络方(大黄、丹参、当归、莪术等),对照组予科素亚(1次/d,1片/次,晨起顿服),以3个月为1疗程。疗程结束后比较治疗前后中医证候、肾功能指标(Scr、BUN、GFR、CystatinC)、致纤维化因子指标(尿TGF-β1、血CollagenⅠ、血CollagenⅢ、血CollagenⅣ)的变化情况。结果治疗组临床总有效率86.21%,对照组62.07%,2组比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组治疗后中医证候积分较对照组明显降低(P<0.01);2组治疗前后相比,肾功能指标都明显改善(P<0.01);治疗组致纤维化因子指标比治疗前有明显的下降(P<0.01)。结论活肾通络方可以改善慢性肾衰患者的临床症状,减轻肾小球纤维化,从而延缓慢性肾脏疾病进展到终末期肾病的进程。

脾虚一号方对脾虚型功能性消化不良大鼠胃组织线粒体呼吸链复合物Ⅳ亚单位的影响

目的:探讨脾虚型功能性消化不良(FD)大鼠胃组织线粒体呼吸链复合物IV亚单位(COX VA)蛋白和mRNA表达及脾虚一号方对其的干预作用。方法:70只7 d龄雄性SD大鼠随机分为正常组,FD模型组(单模型组),脾虚型FD模型组(双模型组),多潘立酮组,脾虚一号方低、中、高剂量组,每组10只。FD模型组、脾虚证FD模型组给予0.1%蔗糖碘乙酰胺蔗糖溶液灌胃,连续6 d。脾虚证FD模型组正常饲料喂养至6周龄后叠加改良小平台站立,连续14 d。造模结束后分别给予蒸馏水10 m L·kg^(-1)·d^(-1),多潘立酮3.125 mg·kg^(-1)·d^(-1),脾虚一号方1.275,2.55,5.1 g·kg^(-1)·d^(-1),灌胃14 d。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白质免疫印迹(Western blot)和免疫组化法检测胃窦组织COX VA mRNA与蛋白表达量。结果:与正常组比较,脾虚一号方高剂量组COX VA蛋白平均积分吸光度升高(P<0.05);多潘立酮组、脾虚一号方低、中剂量组COX VA蛋白表达量均有不同程度降低(P<0.01),而脾虚一号方高剂量组COX VA蛋白表达量则升高(P<0.01);单模型组COX VA mRNA表达量升高最明显(P<0.01)。与双模型组比较,多潘立酮组、脾虚一号方低、中剂量组COX VA蛋白表达量均有不同程度降低(P<0.01),多潘立酮组、脾虚一号方低、中剂量组COX VA mRNA表达量均有不同程度降低,而脾虚一号方高剂量组、单模型组则升高,差异均无统计学意义。结论:脾虚型FD大鼠存在COX VA蛋白的表达量降低,脾虚一号方能够增加COX VA蛋白的表达量,改善能量代谢。

补肾活血方对系膜增生性肾小球肾炎大鼠Ⅳ型胶原、层粘连蛋白的影响

目的探讨补肾活血方防治系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)大鼠肾小球硬化的作用机制。方法将54只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、治疗组,每组18只,尾静脉注射抗大鼠胸腺细胞抗血清(ATS)建立MsPGN模型,治疗组在ATS注射后即以补肾活血方灌胃,每日1次,灌胃剂量为5ml/kg。各组分别于第2、4、8周各取6只大鼠,测定尿蛋白(Upro)、血尿素氮(BUN)和肌酐(SCr)含量;切取肾脏用于病理学观察及免疫组化检测肾组织型胶原(Col-Ⅳ)和层粘连蛋白(LN)的表达。结果病理学检查治疗组较同时间点模型组相比,肾小球系膜细胞增生程度明显减轻,系膜基质明显减少。治疗组大鼠各时间点Upro、BUN和SCr含量较模型组均明显降低(P<0.05或P<0.01),治疗组8周时,肾组织LN、Col-相对含量、积分光密度(ILD)值均较模型组亦明显降低(P<0.05)。结论补肾活血方能抑制MsPGN大鼠肾组织Col-Ⅳ和LN的表达,这可能是防治肾小球硬化机制之一。

扶正化瘀方对纤维化肝脏MMP-2活性及Ⅳ型胶原表达的影响

目的:探讨扶正化瘀方影响基质金属蛋白酶-2活性和Ⅳ型胶原蛋白表达的抗肝纤维化作用机制。方法:二甲基亚硝胺腹腔注射4周诱导大鼠肝纤维化模型,成模后治疗组以扶正化瘀方灌胃4周。检测血清肝功能、肝脏病理学、羟脯氨酸含量;免疫组织化学方法检测肝组织Ⅳ型胶原表达;Western印迹法分析肝组织Ⅳ型胶原、基质金属蛋白酶-2/9(matrix-metalloproteinases-2,MMP-2/9)、金属蛋白酶组织抑制物-2(tissue inhibitors of metalloproteinase-2,TIMP-2)表达水平;明胶酶图法检测肝组织MMP-2/9活性。结果:与正常大鼠比较,模型大鼠血清肝功能异常、肝组织炎症明显、肝组织Ⅳ型胶原表达与沉积增加,TIMP-2蛋白表达增加,MMP-2蛋白表达变化不明显,而MMP-2活性水平明显上升。扶正化瘀方显著减轻肝脏炎症和胶原沉积;减少Ⅳ型胶原蛋白表达和沉积;降低TIMP-2蛋白表达;抑制MMP-2活性。结论:扶正化瘀方可通过抑制肝脏Ⅳ型胶原病理增生沉积、下调MMP-2活性水平、减轻肝组织的破坏与重构而发挥抗肝纤维化的作用。

脾虚四号方干预对功能性腹泻脾虚证模型大鼠肠上皮细胞微绒毛形态的影响

目的:从微观结构的角度观察脾虚四号方干预大鼠腹泻模型肠上皮细胞微绒毛形态的变化。方法:健康雄性Wistar大鼠36只随机分为正常组、模型组、脾虚四号方高、中、低剂量组(4.6,2.3,1.2 g·kg-1)及阳性药思密达组(0.9 g·kg-1)6组,采用水环境小平台站立法复合高乳糖饲料喂养的方法复制腹泻模型,模型成功后,ig给药7 d,取空肠、回肠、结肠组织,通过透射电镜技术观察脾虚四号方对大鼠腹泻模型肠上皮细胞微绒毛微观结构的影响。结果:正常组微绒毛排列整齐划一,粗细均匀;模型组空肠黏膜微绒毛变化较小;回肠黏膜微绒毛的变化开始明显,2.5万倍电镜下即可看到微绒毛的排列普遍不整齐,长短不一,电子密度不均匀;近端结肠,远端结肠则黏膜损害逐渐加重,尤以远端结肠最为明显,微绒毛排列紊乱,长短不一,部分缺如,微绒毛变细,形态不规整,且伴有黏膜下分泌小泡增多。给予脾虚四号方及阳性药干预后,均有不同程度改善,尤以脾虚四号方低剂量组最为明显,几乎与正常组无差异;其次是高、中剂量组与阳性药组差异不明显。结论:水环境小平台站立法复合高乳糖饲料喂养的方法复制的腹泻模型,其空肠黏膜上皮细胞微绒毛形态变化不明显,从回肠到近端结肠再到远端结肠,微绒毛形态变化逐渐明显,破坏程度逐渐增加,而脾虚四号方低剂量组对其改善最为明显,其次为高剂量组。

脾虚1号方对脾虚型FD大鼠胃组织CaM蛋白及基因表达的影响

目的探讨脾虚1号方对脾虚型FD大鼠胃组织Ca M蛋白及基因表达的影响。方法随机将60只雄性SD大鼠(出生10d)按照5:1比率分为模型组和正常组,分别给予0.1%蔗糖碘乙酰胺和2%蔗糖溶液灌胃,0.2mL/(只·d),总共6d。至出生43d,模型组大鼠叠加改良小平台站立,总共14d。至出生56d,原先模型组随机再分为模型组、多潘立酮组、脾虚1号方低、中、高剂量组,每组10只,连同正常组,分别给予蒸馏水1mL·100g-1·d-1、多潘立酮0.3125 mg·100g-1·d-1、脾虚I号方0.1275,0.255,0.51g·100g-1·d-1,灌胃14 d。采用免疫组化、Western-blot和RT-PCR方法检测检测胃体组织Ca M蛋白及mRNA表达量。结果与正常组比较,模型组大鼠胃体组织Ca M蛋白与mRNA表达量降低(P<0.01);与模型组比较,脾虚1号方中、高剂量组Ca M蛋白和mRNA表达量均显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论脾虚1号方健脾促动力的分子机制可能与上调Ca M蛋白与mRNA的表达有关。

脾虚四号方干预大鼠腹泻模型后结肠黏膜微观结构的变化

[目的]从微观结构的角度,观察脾虚四号方干预大鼠腹泻模型后,大鼠结肠黏膜的变化。[方法]采用水环境小平台站立法复合高乳糖饲料喂养的方法复制腹泻模型,通过透射电镜技术观察中药复方对大鼠腹泻模型结肠黏膜细胞微观结构的影响。[结果]模型组和正常组比较,模型组结肠上皮细胞损伤明显:微绒毛形态不规则且部分缺失;细胞膜破坏,出现裸核;线粒体内脊模糊不清、肿胀、电子密度改变;杯状细胞分泌异常活跃;细胞连接的缝隙连接明显增宽。中药干预组肠黏膜细胞损伤较轻,但仍存在微绒毛形态不规整,长短不齐,线粒体电子密度增高、形态不规则,杯状细胞分泌活跃等情况。另外,中药干预组结肠黏膜细胞出现异常隆起小体。[结论]小平台站立和高乳糖饲料喂养的方法造成的大鼠腹泻模型,其结肠黏膜细胞会出现微绒毛形态改变等微观结构的变化,而中药脾虚四号方干预可以缓解其电镜下黏膜损伤。