响应面法优化圆苞车前子多酚与总黄酮超声提取工艺及其抗氧化活性分析

目的本实验旨在优化圆苞车前子多酚和总黄酮提取工艺,探究圆苞车前子提取物抗氧化活性。方法采用单因素实验结合响应面Box-Behnken设计对圆苞车前子中多酚和总黄酮进行超声辅助提取工艺研究,以多酚及黄酮提取率为指标,利用响应面法得出最佳提取工艺。且通过DPPH、ABTS+自由基的清除能力和总还原能力测定评价其抗氧化能力。结果圆苞车前子多酚与总黄酮提取最佳工艺为:料液比1∶20,提取时间41 min,超声波功率420 W,乙醇体积分数88%。该条件下,多酚的提取量为4.79 mg/g,总黄酮的提取量为23.19 mg/g。抗氧化实验结果表明,圆苞车前子乙醇提取物在2.5~50μg/mL范围内,对DPPH、ABTS+自由基有较好的清除作用,IC50值分别为26.62μg/mL和9.40μg/mL;其总还原能力随着浓度的增加而增强,且始终高于同浓度维生素C的还原能力。结论该提取工艺稳定、可靠,可用于圆苞车前子多酚与总黄酮的提取,且圆苞车前子乙醇提取物具有较好的抗氧化活性。

车前子联合头孢曲松对产β-内酰胺酶淋病奈瑟菌的体外抑菌效果研究

目的探讨车前子乙醇提取物联合头孢曲松对产β-内酰胺酶淋病奈瑟菌的体外抑菌效果。方法采用微量肉汤稀释法分别测试车前子乙醇提取物和头孢曲松的单药最低抑菌浓度及两药联合时的部分抑菌浓度指数。结果头孢曲松对产β-内酰胺酶淋病奈瑟菌的最低抑菌浓度为0.06μg/mL;车前子乙醇提取物对产β-内酰胺酶淋病奈瑟菌的最低抑菌浓度为128μg/mL;两药联合时的部分抑菌浓度指数为1,提示两药联合用药时为相加作用,抗菌活性稍有增加。结论车前子乙醇提取物对产β-内酰胺酶淋病奈瑟菌具有良好的抑菌活性;头孢曲松对产β-内酰胺酶淋病奈瑟菌的体外抑菌活性较高;头孢曲松可以联合车前子乙醇提取物对产β-内酰胺酶淋病奈瑟菌产生抑菌作用,但效果不显著。

车前草黄酮提取优化及其对过氧化氢损伤肝细胞的保护作用

目的通过响应面法优化富含车前子苷的车前草黄酮提取工艺,并探究车前草黄酮对过氧化氢(H_(2)O_(2))损伤的L02细胞的保护作用及其作用机制。方法通过单因素研究乙醇浓度、提取温度、液料比对车前草黄酮得率及其中车前子苷转移率的影响,在此基础上使用Central-Composite中心组合试验设计和响应面分析法筛选出车前草黄酮提取得率最高,车前子苷转移率最大的提取条件。通过测定该车前草黄酮对过氧化氢诱导的人正常肝细胞L02存活率、细胞凋亡、线粒体膜电位的影响,及其对L02细胞丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化物歧化酶(SOD)含量,HO-1、Nrf2、SOD蛋白表达量的影响来探究车前草黄酮对过氧化氢损伤的L02细胞的保护作用。结果研究结果表明,提取温度80℃、乙醇浓度65%、液料比为15∶1时,提取得到的车前草黄酮得率和车前子苷转移率均最大,分别为1.82%和35.01%。该条件下提取得到的车前草黄酮在25~100μg·mL^(-1)内可明显降低过氧化氢损伤的L02细胞的凋亡率(P<0.001),降低其线粒体膜电位损伤程度(P<0.001),增加细胞内SOD和GSH的表达量(P<0.001),降低细胞中MDA含量(P<0.01,P<0.001)。此外,该车前草黄酮可以调节过氧化氢损伤的L02细胞中HO-1、Nrf2、SOD的表达量,降低过氧化氢损伤肝细胞中HO-1、Nrf2蛋白表达水平,并增加细胞中SOD蛋白的表达量(P<0.05,P<0.01)。结论使用响应面法筛选出的车前草黄酮提取工艺操作简便,关键有效成分车前子苷的含量丰富,可为车前草黄酮的实际生产提供参考。该方法提取得到的车前草黄酮可降低过氧化氢损伤的肝细胞的氧化应激水平,对L02细胞具有一定的氧化损伤保护作用,研究结果可以为车前草黄酮作为护肝保健品的开发应用奠定基础。

不同产地车前草总灰分及浸出物含量分析

为了比较不同产地的车前草以及清洗前后总灰分和浸出物含量的变化,以此为(亳州)中药饮片企业制定针对性的车前草总灰分和浸出物质量标准提供依据。通过安徽亳州康美药材市场收集八个产地的车前草样品,按照2020版《中国药典》测定方法对其总灰分和浸出物进行测定。结果显示:山西、河南产的车前草样品灰分含量符合要求,甘肃、贵州、四川、江苏、山东、亳州样品中灰分含量均高于药典标准,分别高出:2.43%、2.56%、5.52%、1.88%、0.36%、2.41%,清洗后均符合药典要求。各产地浸出物含量无论清洗前后均符合药典标准,不低于14%。不同产地的车前草样品总灰分含量范围:11.72%~20.63%;清洗后样品总灰分含量范围在:10.90%~16.00%;不同产地的车前草样品浸出物含量范围在:15.35%~32.85%;清洗后浸出物含量范围在:17.10%~28.30%。因此,不同产地的车前草总灰分含量、浸出物含量均存在差异,清洗后总灰分变化呈下降趋势。

超声强化溶剂提取车前草中总黄酮的研究

采用超声技术对车前草中总黄酮提取进行强化,选择料液比、超声提取时间、提取温度、超声功率四因素进行正交实验,得出影响总黄酮提取率大小的次序先后为:提取温度>超声功率>超声提取时间>料液比。在实验参数的基础上,为了获得较高的提取率和节省溶剂用量,各因素的优化工艺参数为:料液比1:20,超声提取时间30min,超声提取温度为50℃,超声功率为200W,在这个最佳条件下试验,总黄酮的提取率为0.645%。相对常规回流提取法而言,采用超声法提取具有快速、节省溶剂、节省时间、提取的有效成分含量较高等优点。

微波技术用于车前子多糖的提取

为保持车前子多糖的生物活性,提高得率,采用微波技术提取车前子多糖。通过正交试验确定了微波提取的最佳工艺参数,用该法提取所得车前子多糖采用蒽酮-硫酸法测定其多糖含量。结果表明,微波提取车前子多糖的最佳工艺参数为:车前子与水的质量比为1:15,在微波强度为60%的条件下提取65s。与其它方法比较,微波提取方法时间短,得率高,是车前子多糖提取的一种优选方法。

响应面法优化超声辅助提取车前草中的熊果酸

目的:优化超声辅助提取车前草中的熊果酸工艺。方法:在单因素试验基础上,采用响应面法,以熊果酸的提取率为响应值,通过回归分析各工艺参数与响应值之间的关系,并由此预测最佳的工艺条件。结果:超声提取的最佳条件为提取温度75℃、乙醇体积分数90%、功率480W、液固比5:1(mL/g)、提取时间25min,该条件下提取3次,熊果酸的提取率达到0.144%。结论:响应面法优化超声辅助提取车前草中熊果酸的预测准确、方便,所得的最佳提取工艺条件高效、可行。

超声波提取车前草总黄酮及鉴别

目的为充分利用车前草植物资源,避免资源的浪费,探讨车前草总黄酮的提取及鉴别方法。方法采用超声波乙醇浸提法从车前草中提取黄酮类物质,对所提取的黄酮类物质进行验证,并用紫外分光光度法测定含量。结果测得样品中总黄酮的含量为1.24%,平均回收率为103%,其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程,无任何污染,是提取车前草黄酮类物质的有效途径。

车前草多酚类化合物的提取工艺优化及抗氧化活性评价

目的优化中药车前草中多酚类成分的提取工艺,并且进行抗氧化活性评价试验。方法利用正交试验,考察提取次数、提取时间和料液比。利用乙醇损伤氧化动物模型,以动物血浆中脂质氧化产物蛋白质羰基、超氧化物歧化酶活力和还原性谷胱甘肽含量为评价指标,评价车前草提取物的体内抗氧化活性。结果车前草中多酚类化合物的最佳提取工艺为提取3次,每次20min,料液比为10∶1。动物模型评价结果表明车前草提取物具有一定的抗氧化活性。结论应用优化的工艺可以实现提取多酚的效率的最大化,所获得的提取物具有一定的抗氧化活性。

车前子提取物与头孢哌酮钠/舒巴坦钠对产ESBLs大肠杆菌的体外抑菌作用的研究

目的研究车前子提取物联合头孢哌酮钠/舒巴坦钠对产ESBLs大肠杆菌的体外抗菌活性。方法产ESBLs的大肠杆菌分离培养,采用微量肉汤棋盘稀释法测定车前子提取物和头孢哌酮钠/舒巴坦钠的单独及联合最低抑菌浓度(MIC)及车前子提取物联合头孢哌酮钠/舒巴坦钠对ESBLs大肠杆菌的抑菌浓度指数(FICI),以FICI≤0.5为协同作用。结果车前子提取物与头孢哌酮钠/舒巴坦钠联合用药与单独用药相比MIC均下降,车前子提取物与头孢哌酮钠/舒巴坦钠联合用药时FICI为0.5。结论体外环境下,头孢哌酮钠/舒巴坦钠联合车前子提取物对产ESBLs大肠杆菌有很好的协同抑制作用。

车前草中总黄酮的微波提取及含量测定

目的 :从车前草中提取总黄酮 ,并测定其含量。方法 :运用微波技术提取车前草总黄酮 ,用比色法测定总黄酮含量。结果 :测得车前草中总黄酮含量 3.74% ,平均回收率为 97.6% ,RSD =1 .2 7% (n =6)。结论 :首次运用微波技术从车前草中提取出总黄酮 ,反应速度加快 ,实验结果令人满意。

酶法提取车前草中熊果酸的工艺研究

[目的]改进车前草中熊果酸的提取技术。[方法]采用纤维素酶法,通过单因素试验对车前草中熊果酸提取工艺进行探讨。[结果]酶法提取车前草中熊果酸的最佳条件为pH值5.0,酶用量5.0mg/g,酶解温度60℃,酶解时间2.5h。在此条件下车前草中熊果酸提取率达0.54%。[结论]该工艺路线较短,操作简单,提取率高,成本低,适合工业生产。

车前草提取物对糖尿病肾病大鼠肾功能、糖脂代谢、炎症因子及脂肪细胞因子的影响

目的探讨车前草提取物对糖尿病肾病大鼠肾功能、糖脂代谢、炎症因子及脂肪细胞因子的影响。方法将60只大鼠随机分为正常组、模型组、对照组、低剂量组、中剂量组与高剂量组各10只,除正常组外其余大鼠均建立糖尿病肾病模型。建模成功后,低、中、高剂量组分别给予1.17 g/kg、2.34 g/kg、4.68 g/kg车前草提取物灌胃,模型组、对照组分别给予生理盐水、缬沙坦灌胃,正常组不做任何干预。干预两周后,称量大鼠肾脏质量并计算肾指数,同时检测血糖、血脂、肾功能指标、血清白细胞介素6(IL-6)、脂联素及游离脂肪酸结合蛋白4(FABP4)水平及肾脏组织转化生长因子β(TGF-β)水平。结果 (1)其余5组的肾指数、血清肌酐和尿素氮、24 h尿蛋白均较正常组升高;而各干预组的以上指标均低于模型组,且低、中、高剂量组以上指标依次降低(均P<0.05)。(2)其余5组的血糖、总胆固醇及三酰甘油均高于正常组;各剂量组的血糖、三酰甘油以及中、高剂量组的总胆固醇均低于模型组,且低、中、高剂量组血糖及总胆固醇均依次降低(均P<0.05)。(3)与正常组比较,其余5组的肾脏组织TGF-β水平均升高,各干预组血清IL-6水平降低而模型组血清IL-6水平升高(均P<0.05);与模型组比较,各干预组IL-6降低,对照组及中、高剂量组TGF-β降低,且低、中、高剂量组血清IL-6及TGF-β均依次降低(均P<0.05)。(4)与正常组比较,其余5组的血清脂联素、FABP4均升高(均P<0.05);与模型组比较,各干预组脂联素以及对照组、中剂量组、高剂量组FABP4均降低,且低、中、高剂量组血清脂联素、FABP4均依次降低(均P<0.05)。结论车前草提取物可改善糖尿病肾病大鼠糖脂代谢及肾功能,下调炎症因子、脂肪因子的表达,其中高剂量(4.68 g/kg)车前草提取物的效果更佳。

车前草多糖微波提取工艺研究

为探讨车前草多糖提取率的影响因素,本实验利用微波辅助提取法,以车前草多糖提取率为指标,通过对料液比、微波功率、微波处理时间、浸提温度进行单因素实验,并在此基础上进行正交实验。结果表明,影响车前草多糖提取率的因素顺序为:微波处理时间>料液比>浸提温度>微波功率。车前草多糖的最佳提取工艺为料液比1∶25(g/mL)、微波功率为450W、微波处理时间4min、浸取温度为70℃。在此条件下,车前草多糖的提取率为9.41%±0.23%。该法提取的车前草多糖提取率高,且节省时间。

车前草中总苯乙醇苷提取工艺研究

目的:筛选车前草中总苯乙醇苷提取的最佳工艺。方法:以总苯乙醇苷的量为指标,采用单因素试验和正交试验优化车前草中总苯乙醇苷最佳提取工艺。结果:车前草中总苯乙醇苷的最佳提取工艺为:车前草粉末(过2号筛)加入25倍量、50%的乙醇并调节p H值为5,于95℃加热回流提取两次,每次120 min。结论:研究结果表明,该提取工艺简单、可靠、重复性好,为车前草的进一步深度开发奠定基础。

基于P53/AMPK通路车前子醇提物对多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞自噬的作用研究

目的 研究车前子醇提物对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞自噬的作用,并探讨其可能作用机制。方法 选取动情周期规律SD大鼠125只,取24只灌胃羧甲基纤维素钠(CMC-Na)设为对照组,其余101只灌胃来曲唑混悬液构建PCOS大鼠模型。建模成功的96只大鼠分为模型组(n=24)、3MA组(n=24)、低剂量组(n=24)和高剂量组(n=24)。对照组、模型组灌胃0.9%氯化钠溶液,低、高剂量组按10、20mg/(kg·d)灌胃车前子醇提物,3MA组按10mg/(kg·d)灌胃自噬阻断剂3MA,连续14天。酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清促卵泡生成素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)、雌二醇(E_(2))水平;苏木精-伊红(HE)染色法观察卵巢组织病变形态;流式细胞仪检测卵巢颗粒细胞自噬率;蛋白质印迹法(Western blot法)检测微管结合蛋白轻链3(LC3)、抑癌基因p53、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)的表达情况。结果 与对照组比较,模型组大鼠血清LH、T和FSH水平均升高,E_(2)水平下降;卵巢组织病变最明显;颗粒细胞自噬率升高;LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和p-AMPK蛋白表达增加,p53和p-mTOR蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组比较,3MA组、低剂量组、高剂量组LH、T和FSH水平降低,E_(2)水平升高,卵巢组织病变减轻,颗粒细胞自噬率降低,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和p-AMPK蛋白表达降低,p53和p-mTOR蛋白表达升高(P<0.05)。各组与模型组比较的指标变化中,3MA组的指标变化高于低剂量组,低于高剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 车前子醇提物可调节PCOS大鼠内分泌代谢,可能与调控p53/AMPK信号通路,抑制颗粒细胞自噬有关。

江西道地药材车前草中总黄酮超声辅助提取研究

目的探讨超声辅助提取车前草中总黄酮的工艺。方法在单因素实验基础上,采用正交实验设计法对提取工艺进行优化。结果各因素对提取率影响大小依次为:超声提取时间(A)>液固比(C)>乙醇浓度(B);最佳条件为:在20℃下,用40%乙醇为溶剂,液固比8∶1,超声提取20 min。在此条件下,提取两次,总黄酮能基本被提取完全,总提取率可达0.371%。结论该方法采用超声波辅助强化提取,工艺简单可行,达到省时、高效和节能的目的。

人参叶和车前草配伍的体内抗氧化活性评价研究

目的评价人参叶和车前车配伍的体内抗氧化活性结果,为开发人参叶和车前草提取物的抗氧化保健食品提供数据支持。方法以人参皂苷和黄酮含量作为指标,利用紫外可见分光光度计检测提取物中人参皂苷和黄酮含量;以动物血浆中脂质氧化产物蛋白质羰基、超氧化物歧化酶活力和还原性谷胱甘肽含量为评价指标,评价提取物的体内抗氧化活性。结果提取物中人参皂苷含量为15.0g/100g,黄酮含量为4.0g/100g。提取物过氧化脂质降解产物丙二醛实验、抗氧化酶活力SOD,还原型谷胱甘肽(GSH)实验三项生化指标均为阳性。结论据国食药监保化[2012]107号文件对抗氧化功能动物实验结果判定标准,判定提取物有抗氧化功能,可以用于开发具有抗氧化功能的保健食品。

车前草总酚的微波提取

为优化得到车前草中总酚的最佳微波提取工艺条件,通过单因素和正交试验进行筛选。结果表明:影响车前草总酚提取率的主要因素顺序为,微波处理时间>乙醇浓度>料液比>微波功率;车前草总酚的最佳提取工艺为,60%乙醇、料液比1∶15(g∶mL)、微波处理3 min、微波功率为450 W。在此条件下车前草总酚的提取率最高,为3.61%。该法对车前草总酚提取率高,且缩短提取时间,节约能源。

黄土高原13种栽培牧草营养成分NIRS模型分析

对2012-2013年黄土高原种植的13个牧草品种、780份干草样品的营养成分建立了近红外光谱(near infrared reflectance spectroscopy,NIRS)的检测模型。豆科牧草的粗脂肪(EE)、酸性洗涤纤维(ADF)和粗灰分(Ash)建模结果最好,其定标决定系数(RSQ)>0.94,交叉验证相关系数(1-VR)>0.7最高,定标标准分析误差(SEC)在0.071~0.713,交叉校验定标标准分析误差(SECV)在0.160~2.751。禾本科牧草的EE和可溶性糖(WSC)建模结果最好,RSQ分别达0.916和0.859,1-VR分别为0.609和0.810,SEC和SECV分别是0.250、1.488和0.505、3.172。菊科和车前科牧草的模型,除ADF外,其它指标预测的稳定性和准确性较为理想,RSQ在0.85以上,1-VR在0.70以上,SEC和SECV分别在0.361~3.557和0.495~4.602。NIRS对豆科粗蛋白(CP)和WSC的数值预测较差,RSQ仅>0.55,对禾本科CP、ADF、中性洗涤纤维(NDF)、Ash及菊科和车前科的ADF的预测稍差,RSQ>0.7。