不同饲养模式下宁蒗高原鸡源大肠杆菌耐药元件的分布特征

为了分析不同饲养模式下宁蒗高原鸡源大肠杆菌分离株中耐药基因、整合子和质粒型的分布特征,以便更好地保护和开发利用宁蒗高原鸡,试验采用PCR方法,在分离株系统分群的基础上,对耐药基因bla_(SHV)、bla_(TEM)、bla_(CTX-M-1)、bla_(CTX-M-2)、bla_(CTX-M-8/-25)、bla_(OXA-48)、tetA和tetB,整合子1和整合子2,10种质粒型进行了检测,并分析了不同质粒型间的关联性及系统分群、整合子、耐药基因、质粒型间的关联性。结果表明:B_(1)亚群的总检出率最高(68.21%),其次为B_(23)亚群(26.67%),不同饲养模式下不同亚群间的检出率存在差异;耐药基因bla_(TEM)的总检出率最高(81.54%),之后依次为bla_(OXA-48)(47.18%)、tetB(43.59%)和bla_(SHV)(42.05%),不同饲养模式下有些耐药基因的检出率存在差异;整合子1的总检出率(66.15%)高于整合子2(24.10%),笼养和混养模式下整合子1的检出率显著高于林下放养模式(P<0.05);质粒型IncI1的总检出率最高(97.44%),之后依次为IncP(82.05%)、IncN(63.59%)和IncFrep(56.41%)等,不同饲养模式下大部分质粒型的检出率存在差异;质粒型IncP、IncI1和IncN间,或这些质粒型与其他质粒型间具有高的关联性;整合子1与tetB、IncP和IncI1间有强关联性;IncP、IncFIB、IncI1、IncFrep、IncN与bla_(TEM)、tetB有关联性。说明不同饲养模式下,宁蒗高原鸡源大肠杆菌分离株中含有致病性分离株,且这些分离株携带不同的耐药基因、整合子和质粒型,在生产实践中需引起重视。

利用质粒指纹图谱法对大肠杆菌耐药质粒遗传特性的研究

为研究鸡源大肠杆菌耐药性及耐药的生物学特性,选用30株来自不同地区的鸡源大肠杆菌,在药敏试验的基础上,对耐药菌质粒进行了指纹图谱分析。结果表明:30株鸡源大肠杆菌对氨苄青霉素、青霉素、四环素的耐药率为100 00%,对氯霉素、庆大霉素、利福平、红霉素的耐药率为60 00%～93 33%。多重耐药率为26 67%～80 00%。质粒图谱比较发现:来源相同的菌株质粒图谱相同或相似;来源不同的菌株质粒图谱一般不同。聚类分析表明:30株大肠杆菌遗传距离在0 224～0 416处聚成五类,其中同一地区聚为一类。这表明同一地区的大肠杆菌病的病原之间有一定的同源性。其次,这30株大肠杆菌在遗传距离为0 864处聚成一大类,说明它们之间有一定程度的遗传相关性。

苏云金芽胞杆菌内生质粒提取方法的改进

改进了苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)内生质粒提取技术,提取了Bt库斯塔克亚种、以色利亚种和一株对鳞翅目害虫有活性的野生菌株的质粒,利用琼脂糖凝胶电泳分析了质粒图谱,进一步检测了质粒的浓度与纯度。实验结果表明,该方法与传统技术相比,操作简单、耗时短,提取的质粒纯度高、条带清晰,染色体DNA污染较少。为Bt杀虫基因克隆、质粒特性分析等研究创造了有利条件。

猪致病性大肠杆菌的质粒指纹图谱分析

在系统鉴定和药敏试验的基础上，对７０株致病性大肠杆菌进行了质粒指纹图谱分析。结果，菌株的质粒得率为１００％，可分为３２种质粒谱型。分离菌株在遗传距离０．１４０处聚成４类，在遗传距离０．２２４处聚成一大类。来源相同的菌株具有相同或非常相似的质粒图谱和质粒酶切图谱，来源不同的菌株具有不同的质粒图谱和质粒酶切图谱。来源相同菌株的质粒谱相同，而耐药谱可相同亦可不同，两者之间无明显规律。

河南省鸡致病性大肠杆菌耐药性质粒的研究

对河南省32个县市的93株鸡致病性大肠杆菌进行耐药性质粒的分析,并对其中12株100%耐庆大霉素(GM)的菌株进行耐药质粒的转化试验,成功获取了2个转化子。质粒检测结果表明:93株鸡致病性大肠杆菌可以分为49种质粒图谱类型,质粒电泳条带最多6条,最少1条,其中质粒图谱为1条条带的菌株占测试菌株的45.16%;同一地区、同一鸡场菌株的质粒图谱相同或相似,不同地区菌株的质粒图谱不同,但它们之间会有相同或相近的少量流行质粒存在。质粒转化结果表明:同一质粒可编码1个至数个抗药性基因,不同质粒可以携带相同或不同的抗性基因,证明了质粒可以传递多种耐药性,细菌的抗药性与抗药性质粒的转移有很大关系。

致仔猪腹泻大肠杆菌的耐药性与质粒谱分析

对河北省不同地区发病猪场分离的已经过系统鉴定的12株猪源大肠杆菌,采用K-B纸片法进行了15种抗生素的耐药性检测,并提取质粒,对耐药谱和质粒谱型进行了比较分析。结果显示,分离菌株对氨苄西林的耐药率达到了100%,对阿莫西林的耐药率为91.7%,对四环素和复方新诺明的耐药率介于50%～70%。分离菌株存在多重耐药性,以耐4种、6种和7种药物为主,占总数的75%。对分离菌株耐药谱与质粒谱的分析表明,大肠杆菌的质粒携带与细菌的耐药性之间并没有明显的对应关系。

鸡大肠杆菌病的流行病学研究

对来源于河南省32个县市的93株鸡致病性大肠杆菌进行了O血清型的鉴定、16种抗生素药物的耐药性试验和耐药性质粒的检测分析．结果表明：河南省鸡致病性大肠杆菌的血清型种类众多，以O78、O1、O2为优势血清型，分别占定型菌株的35．14％、18．92％、13．51％；耐药图谱复杂，可以分为58种耐药类型，菌株耐药种类3—14种；质粒图谱复杂，可分为49种质粒图谱，质粒条带1—6条．

福建省鼠伤寒沙门氏菌病原学特征变迁趋势

目的：了解福建省鼠伤寒沙门氏菌的病原学特征变迁情况。方法：采用噬菌体分型、质粒谱分析及耐药性测定的方法，对福建省１９８０～１９９５年１５年鼠伤寒沙门氏菌的病原学特征进行动态监测。结果：福建省鼠伤寒沙门氏菌的噬菌体流行型别存在明显的变迁与更迭；质粒谱型有逐渐增多且分散趋势；菌株耐药率逐年大幅度上升，耐药谱逐年迅速增宽，多重耐药菌株逐年急剧增多，耐药现象日趋严重。结论：噬菌体分型、质粒谱分析及耐药性测定是监测福建省鼠伤寒沙门氏菌病原学特征变迁趋势的有效方法。

河南省鸡源致病性大肠杆菌耐药性的监测分析

对来源于河南省32个县市的93株鸡源致病性大肠杆菌进行了16种抗生素药物的药敏试验和菌株耐药性与质粒图谱间关系的分析研究。结果表明:93株鸡源致病性大肠杆菌均为多重耐药菌株,耐药种类3～14种,耐药图谱复杂,可以分为58种耐药类型,相同来源的大肠杆菌耐药图谱、质粒图谱相似,但菌株耐药种类与质粒图谱条带的多少无一定的相关性。

海南快生根瘤菌蛋白、多位点酶及质粒电泳

在本室以前的研究中，海南快生根瘤菌具有分类上的多型性。其一部分归于已知各根瘤菌种，另有一部分菌株构成独立的表观群及相应的ＤＮＡ同源群（亚群Ⅱ和Ⅳ）。本文采用不同的电泳方法，分析了海南快生根瘤菌和已知根瘤菌种的代表共５５个菌株的全细胞蛋白、酯酶、过氧化物酶及质粒组成。结果表明：同一亚群的菌株间有相似的蛋白图谱，种群之间有较明显的差异，根瘤菌中普遍存在酯酶，酶带的数量和迁移率具有菌株专一性，更适合于苗株的鉴别。过氧化物酶只在部分菌株中观察到，亚群Ⅱ与亚群Ⅳ的菌株均显示一条酶带，但二者之间的相对迁移率有明显差别。质粒电泳中，大多数海南快生菌中存在着大质粒，分子量范围是２０－４０００Ｋｂ，同一亚群中的不同菌株间具有一定相似性，这些结果为海南快生型根瘤菌的分类提供了一些辅助证据。

质粒分析在阴沟肠杆菌引起的医院内输液反应中的应用

应用生物分型、耐药性谱模式分型和质粒分析，对某医院１９９２年７月份发生的８例阴沟肠杆菌引起的输液反应进行了流行病学调查，结果发现：生物分型和耐药性谱模式分型均不能分辨这８株阴沟肠杆菌的不同克隆菌株，而质粒分析却能对这８株阴沟肠杆菌分辨出４个不同的克隆菌株，显示了它特异和敏感的特性。结合临床资料还发现，这８例阴沟肠杆菌引起的输液反应并非来自同一污染源，各科室存在各自的污染源。半年后的重复试验表明，这８株细菌的生物型和耐药性谱模式分型均有所改变，而它们的质粒图谱却基本保持一致，显示了质粒分析稳定的特性。

内蒙一起F2a志贺菌痢爆发的质粒分析

目的 探讨内蒙一起菌痢爆发的特异传染源。方法 对４３ 株Ｆ２ａ志贺菌进行质粒图谱和质粒ＤＮＡ 酶切图谱分析。结果 ①质粒图谱和质粒ＤＮＡ酶切图谱特征相同的菌株为引起本次菌痢爆发的优势克隆；②本次爆发偶合有部分散发病例；③经污染的食物传播是本次爆发的主要传播途径。结论 质粒分析能较为特异、敏感地揭示不同来源志贺菌间的遗传联系和差别。

菌痢暴发的分子流行病学分析

分析１９９２、１９９４年广州、江门两地菌痢暴发期间分离的８４株福氏２ａ志贺氏菌（广州暴发株３０株、散发株２８株、江门暴发株１２株、病例接触者分离株１４株）的质粒图谱及质粒ＤＮＡ限制性酶切图谱特征。结果表明：发生于不同地点、不同时间且传染来源不相同的两起菌痢暴发，由福氏２ａ志贺氏菌的同一克隆引起，该克隆可能是广东地区福氏２ａ志贺氏菌的优势克隆。江门菌痢暴发期间，自密切接触者分离的同型菌株分属３个不同的克隆，提示部分病例接触者感染的福氏２ａ志贺氏菌并非来自病例。比较表型分析（生化反应、血清学分型）与质粒分析，证实表型分析难以鉴别来源不同的同型克隆，而质粒分析提供了简便、敏感、特异鉴定不同来源同型克隆的有效手段。

志贺菌痢暴发菌株的分子流行病学分析

目的 探讨 4种基因分型方法在一起F2a志贺菌痢暴发的流行病学研究中的意义。方法 对 43株从患者粪便和食物中分离菌株进行质粒图谱分析、质粒DNA酶切图谱分析、随机PCR分析、set1/set2毒力基因PCR分析。结果 随机PCR将 43株F2a志贺菌分为 2个不同的谱型 ,质粒图谱、set1/set2毒力基因PCR分为 3个不同的谱型 ,而质粒DNA酶切图谱分为 4个不同的谱型。其中基因型完全相同的菌株 3 5株 ,为引起本次菌痢暴发的流行株。7株基因型不同的菌株是本次暴发期间同时存在的散发病例。从食物中分离的菌株基因型与流行株相同 ,证明此次暴发是通过污染的食物而引起传播的。食堂炊事员粪便中虽然分离出了F2a志贺菌 ,但基因型与流行株不同 ,不是本次暴发的传染源。结论 DNA水平上的分型方法能更为准确。

来自海南等地的17个Bt分离株质粒多样性分析

本研究采用琼脂糖凝胶电泳对分离自海南岛的12个Bt菌株与分离自广西、黑龙江的5株Bt菌株及2株Bt模式菌株进行质粒数量、大小等特征分析。19个供试菌株可区分为16种独特的质粒电泳图谱,充分显示出不同来源Bt菌株的质粒多样性。进一步选择了其中的10个菌株,利用包埋法制备琼脂块进行脉冲场凝胶电泳(PFGE),结果表明苏云金芽孢杆菌大质粒组成特征也具有丰富多样性。但是供试菌株的质粒电泳图谱并未体现与地理和生态特征相关联的特征差异。研究结果初步证实海南分离株S3078-1是一株无内生质粒的Bt菌株,而S3031-1和S3073-1两个分离株仅有一个大质粒存在,这三个分离株将为进一步研究质粒功能提供初始菌株。本研究进一步暗示将琼脂糖凝胶电泳和脉冲场凝胶电泳结合起来研究质粒特征提高了结果的可靠性。

628株大肠杆菌R质粒的检测

本文检测来源于新生儿及健康猪的628株大肠杆菌的耐药谱及R质粒。这些菌株对四环素的耐药率最高,人源菌株对氨(?)青霉素和庆大霉素的耐药率高达67.82％和51.49％。R质粒的检出率在60％以上。多重耐药菌株中R质粒检出率特别高。三耐以上菌株的耐药谱型多以四环素、磺胺抗性为基础,对比过去的资料;耐药类型由四耐已发展到以五耐以上居优势;应引起医务界及社会上的重视。

使用中消毒液污染细菌的质粒谱分析

分离自使用中消毒液的９８株细菌，葡萄球菌、微球菌和链球菌的质粒检出率均为１００％。其质粒大小为２０～５４２ｋｂ。６１１１％菌株为单一５４２ｋｂ质粒。革兰阴性与革兰阳性杆菌质粒检出率分别为１００％与９２０％，质粒大小分别为１１～２１９４ｋｂ与１１～５３２ｋｂ。

成都地区痢疾杆菌散发、暴发菌株的质粒分析及耐药谱测定

作者对81株散发、暴发痢疾杆菌进行质粒分析和耐药谱测定。结果发现:痢疾杆菌对氨苄青霉素、四环素等耐药率较高,对庆大霉素等敏感。50％的菌株含有质粒,大多数质粒DNA分子量小于6Md,各菌株呈不均一的质粒模式。提示:成都地区痢疾的流行是由许多在遗传学上同源相关性较远的痢疾杆菌引起。通过对暴发菌株所进行的分析可见:1或2株痢疾杆菌导致了此次暴发。质粒分析及耐药谱测定适合于痢疾暴发菌株的鉴定,是痢疾流行病学研究的有用工具。

福建省鼠伤寒沙门菌病原学特征研究

[目的 ]了解福建省鼠伤寒沙门菌 (鼠伤寒菌 )的病原学特征及其流行病学意义。 [方法 ]采用噬菌体分型、质粒谱分析、耐药性测定、R质粒检测与消除和致病因子检测等方法 ,对福建省 1980 - 1995年间不同地区与来源 (人、动物、食品、外环境等 )的鼠伤寒菌进行研究分析。 [结果 ]鼠伤寒菌可分为 2 0个噬菌体型 ,其中 7774与 3774等 7个型是优势型 (89.6 % ) ;并检出 10种质粒 ,可分成 13个质粒谱型 ,6 0 Md质粒是流行性质粒 ,质粒谱 型、 型、 型和 型为优势质粒谱型 (85 .7% )。不同年段与不同来源菌株的噬菌体流行型别组成互不相同 ,从而构成各自特有的流行型别。鼠伤寒菌耐药率逐年大幅度上升 ,耐药谱及多耐菌株亦逐年剧增。氟喹诺酮、头孢菌素和丁胺卡那霉素是治疗严重耐药菌的敏感药物 ;尤其是氟哌酸 ,既可治疗严重耐药菌感染 ,又可一定程度消除耐药性质粒。鼠伤寒菌的多重耐药性主要由 R质粒介导 ;致病因子有内毒素、外毒素和侵袭性 ;生化及抗原变种株也可引起食物中毒、医院感染及感染性腹泻的流行。[结论 ]噬菌体分型、质粒谱分析、耐药性测定、R质粒、致病因子和生物变种检测等是监测鼠伤寒菌病原学特征的有效方法。

水稻条斑病菌内源质粒分析

【目的】明确水稻条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzicola,简称Xoc)内源质粒分布状况、类型及其含有的主要功能基因,为下一步开展该菌与质粒相关的毒力进化研究、抗逆机制分析及穿梭载体构建打下基础。【方法】采用数据库检索法和质粒分离鉴定法,调查水稻条斑病菌内源质粒的分布状况;以GenBank数据库中Xoc菌株基因组序列为研究对象,开展质粒信息检索,并对已发表的Xoc内源质粒序列进行系统进化分析;以Xoc中国菌株菌种库为研究对象,采用碱裂解法提取质粒,进行质粒酶切带型分析和主要功能基因鉴定。【结果】GenBank全基因组数据库中Xoc菌株内源质粒检出率为11.76%,系统进化分析结果表明这些质粒属于不同的进化分支。在257株Xoc中国菌株中,有29株菌株含有质粒,质粒检出率为11.28%,带有内源质粒的菌株均来自于华南稻区,且大部分来自广西。通过质粒酶切图谱比较,确认新发现的质粒属于9种新型Xoc内源质粒。按照已知Xoc内源质粒pXOCgx01上主要功能基因序列设计引物,PCR扩增结果表明新鉴定的Xoc质粒含有重金属抗性和DNA转移相关的基因,但在菌株间存在明显的多样性。【结论】部分Xoc菌株中含有一定数量的内源质粒,质粒类型和所含功能基因等具有一定的多样性,携带内源质粒的Xoc菌株有明显地域性。