三子利水颗粒对心衰肺水肿大鼠肺组织液体转运相关蛋白表达的影响

目的通过观察三子利水颗粒对心衰肺水肿大鼠肺组织病理组织学、AQP1、AQP5、ENaC蛋白及mRNA表达的影响探讨其治疗心衰肺水肿的机制。方法选择雄性SD大鼠,通过结扎腹主动脉、腹腔注射氯化铵造成心衰急性肺水肿模型,随机分为模型组、西药组、中药低剂量组、中药高剂量组、中药低剂量+西药组、中药高剂量+西药组。给药1周后观察各组大鼠肺组织含水率、病理组织学及AQP1、AQP5、ENaC蛋白及mRNA表达水平。结果与模型组比较,各给药组肺含水量均减少(P<0.05);组织细胞间的炎性浸润和肺泡间的充血症状均改善。AQP1、AQP5蛋白表达均不同程度地升高,中药低剂量组AQP1差异有统计学意义(P<0.05),AQP5差异无统计学意义(P>0.05),其余给药组差异有统计学意义(P<0.01)。ENaC蛋白表达均不同程度地升高,空白对照组、中药低剂量组+西药组、中药高剂量组+西药组差异有统计学意义(P<0.05),其余各组差异无统计学意义(P>0.05)。AQP1、AQP5mRNA表达均不同程度地升高,中药低剂量组+西药组、中药高剂量组+西药组差异有统计学意义(P<0.01)。ENaC mRNA表达均不同程度地升高,中药低剂量组+西药组差异有统计学意义(P<0.05),西药组、中药高剂量组+西药组差异有统计学意义(P<0.01)。中药低、高剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。结论三子利水颗粒可通过升高AQP1、AQP5、ENaC蛋白表达及mRNA表达含量来改善上皮细胞病理组织形态,达到清上焦肺水,缓解心衰肺水肿体征的目的。

1，25-二羟基维生素D3在小鼠肺脏液体清除中的作用

目的探讨1,25-二羟基维生素D3(1,25-VD3)与在体小鼠肺泡液体清除率(AFC)之间的关系,以明确其在肺脏液体清除中的作用机制。方法维生素D处理组雄性昆明小鼠用活性维生素D类似物帕立骨化醇腹腔注射2周,应用酶标仪测定小牛血清白蛋白浓度的方法测定小鼠在体AFC。用Western blot方法测定小鼠肺组织的上皮钠通道蛋白表达水平。结果维生素D处理组小鼠AFC为(31.9±3.8)%,对照组为(19.7±1.9)%(P<0.05)。阿米洛利敏感性AFC与对照组相比增加了50%。Western blot结果显示维生素D处理组小鼠肺组织α-上皮钠通道蛋白表达水平明显提高。结论维生素D能够增加小鼠AFC,其机制可能与增加上皮钠通道蛋白表达有关。临床上应用维生素D治疗可能会有利于减轻患者的肺水肿。

雌孕激素在急性肺损伤中对钠离子通道α亚基的影响

目的观察17-雌二醇、孕酮联合应用对急性肺损伤大鼠的肺上皮钠离子通道（rENaC）α亚基表达的影响，探讨雌孕激素联合应用在急性肺损伤（ALI）的肺水肿清除机制中的作用。方法40只雌性未成年SD大鼠随机分为正常对照组（注射生理盐水8mL／kg），急性肺损伤（ALI）模型组（经静脉注射油酸0．1mL／kg），雌孕激素联合治疗组（在油酸注射前12、48h皮下注射由雌孕激素按750：1比例混合的混合液）。将每组大鼠分别在油酸注射后6h处死取出肺组织进行干湿质量比、肺系数的测定，观察肺病理切片肺水肿程度，RT-PCR检测肺组织钠通道α-ENaCmRNA表达。结果急性肺损伤模型组肺湿干质量比、肺系数较正常对照组显著升高（P〈0．01）。雌孕激素联合治疗组（12h前给药）与ALI模型组比较上述指标均显著下降（P〈0．05）。肺组织病理学观察联合治疗组（12h前给药）肺水肿程度较ALI模型组明显减轻。α-ENaC基因在雌孕激素联合治疗组（12h前给药）的表达与ALI模型组相比显著升高（P〈0．05）。结论联合应用雌孕激素可以上调钠离子通道α亚基的基因表达，从而可能在肺水肿清除中起到一定作用。

纤溶酶对小鼠肺泡上皮液体清除作用的研究

目的探讨纤溶酶对在体小鼠肺泡液体清除率(AFC)的作用。方法应用考马斯亮蓝法测定小牛血清白蛋白浓度的方法测定小鼠在体AFC。结果特异性上皮细胞钠通道阻断剂阿米洛利组能明显降低AFC,气管内注入60μg/mL纤溶酶后,AFC明显增加(38.2±2.1)%,与对照组相比P<0.05,n=6)。纤溶酶+阿米洛利组对AFC的影响与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05,n=5),与单独使用纤溶酶比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论纤溶酶能明显增加肺泡上皮液体的清除,可能通过增强阿米洛利敏感性钠通道活性而影响AFC。

右旋美托咪啶对小鼠肺泡上皮液体清除作用的研究

目的探讨右旋美托咪啶与在体小鼠肺泡液体清除率(AFC)之间的关系,以明确其在肺脏液体清除中的作用。方法应用酶标仪测定伊文思蓝标记的小牛血清白蛋白浓度的方法测定小鼠在体AFC。结果与1mmol/L阿米洛利抑制效应相反,气管内注入1.5μg/kg右旋美托咪啶后,能显著增加小鼠在体AFC。与阿米洛利合用后此增强效应受到抑制,表明右旋美托咪啶能够增加与上皮钠通道有关的阿米洛利敏感性AFC。结论临床上对合并肺脏损害的患者进行镇静时,可以考虑右旋美托咪啶对肺脏液体清除作用的影响,应用其进行相应的治疗。

腺苷2B受体激动剂对大鼠高原肺水肿的治疗作用

目的研究腺苷2B受体激动剂BAY60-6583对高原肺水肿的治疗作用。方法24只SD雄性大鼠随机分为平原对照组(Control组)、高原肺水肿模型组(HAPE组)和BAY60-6583干预组(BAY组),每组8只。除Control组外,HAPE组及BAY组均以10 m/s的速度上升至模拟海拔6000 m高度并维持48 h。出舱后BAY组腹腔注射BAY60-6583[2 mg/(kg·d)],Control组及HAPE组腹腔注射等体积溶媒,持续3 d。大鼠麻醉后收集血液和组织标本,取肺叶HE染色观察肺组织病理变化,测定肺含水量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量、白介素(IL)-6含量、环磷酸腺苷(cAMP)含量和上皮Na+通道α亚基(ENaC-α)的基因相对表达量与蛋白含量。结果与Control组相比,HAPE组肺组织出现明显病理学变化,肺含水量升高,TNF-α、IL-6和MDA含量升高,SOD活性和ENaC-α明显降低(P<0.05);与HAPE组相比,BAY组肺组织病理学变化明显改善,肺组织含水量明显降低,TNF-α、IL-6和MDA含量降低,SOD活性、cAMP和ENaC-α明显升高(P<0.05)。结论BAY60-6583可能通过降低肺含水量、TNF-α、IL-6和MDA含量,提高SOD活性、c AMP水平和ENa C-α的含量,以减轻大鼠高原低氧环境所致的肺水肿。

上皮钠通道在高氧致新生大鼠支气管肺发育不良早期肺水肿发生中的作用

目的探讨高氧致新生大鼠肺水肿阶段上皮钠通道（ENaC）蛋白表达及钠水转运功能的变化。方法将新生大鼠随机分成高氧组和空气组，于实验后1、3、5、7d收集肺组织，计算肺湿、干质量比率以确定血管外肺水含量变化，应用Westernblot方法检测高氧暴露后新生大鼠肺组织ENaC3个主要亚基（α，β和γ）蛋白表达的变化规律。检测实验后5d肺泡液体清除率（AFC）及阿米洛利敏感性AFC的变化。结果高氧暴露后新生大鼠肺组织血管外肺水含量增加（肺湿、干质量比率：3d：6．37±0．64与5．56±0．15，t=3．46；5d：5．86±0．52与5．11±0．21，t=-3．82；7d：5．56±0．45与4．80-4-0．09，t：-4．72；P均〈0．01），而AFC显著增加，阿米洛利非敏感性AFC无显著改变[AFC：（20．32±3．33）％与（12．97±2．46）％，t=-6．16，P〈0．01；阿米洛利非敏感性AFC：（10．42±3．44）％与（8．67±3．13）％，t=-1．30，P=0．21]，高氧暴露使阿米洛利敏感性AFC增加；仪，p和1-ENaC蛋白表达在高氧暴露后与空气组比较并无减低。结论虽然在高氧诱导的支气管肺发育不良早期发生了肺水肿，但ENaC钠水主动转运障碍并非引起高氧暴露后肺水肿发生的主要因素。

上皮细胞钠通道在博来霉素诱导小鼠肺纤维化中的作用机制

目的探讨上皮细胞钠通道(ENaC)在博来霉素诱导小鼠肺纤维化中的作用及相关机制,以及骨髓间充质干细胞条件培养基(BMSCs-CM)对ENaC的作用。方法将20只C57小鼠随机分为对照组和实验组。Masson染色观察小鼠肺纤维化程度;实时荧光定量-PCR(RT-PCR)和Western blot方法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、α/β/γ-ENaC mRNA的表达水平。将体外常规培养的肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)随机分为DMEM/F12组(CON组)、转化生长因子β1(TGF-β1)处理组(TGF组)、TGF-β1+BMSCs-CM组(T+CM组),培养24 h,采用Western blot方法检测α/γ-ENaC蛋白的变化。结果与对照组比较,实验组小鼠体重明显下降(P<0.05),死亡率为36.36%。实验组小鼠肺组织Masson染色观察到明显的肺细胞损伤和组织纤维化。RT-PCR和Western blot结果显示实验组小鼠TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白表达水平明显上升(P<0.05),α/β/γ-ENaC 3个亚基mRNA和蛋白的表达水平明显下降(P<0.05)。与CON组比较,TGF组小鼠的AECⅡ中α/γ-ENaC蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与TGF组比较,T+CM组小鼠的AECⅡ中α/γ-ENaC蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论BMSCs-CM对肺纤维化的保护作用可能与促进AECⅡ中ENaC的表达有关。

芪冬活血饮对肺泡上皮细胞钠水转运的研究

目的:研究芪冬活血饮对肺泡上皮细胞A549中钠离子通道α(ENaC-α)和水通道蛋白-1(AQP-1)表达的影响。方法:将细胞随机分为4组:空白组、LPS组、LPS+正常大鼠血清组、LPS+10%药物血清组,用10%芪冬活血饮药物血清培养A549细胞4h后,再加入10μg/mL LPS刺激细胞,RT-PCR法检测肺泡上皮细胞ENaC-α、AQP-1 mRNA表达,Western Blot检测细胞ENaC-α、AQP-1蛋白表达,用ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-8(IL-8)水平。结果:刺激后,LPS组细胞ENaC-α、AQP-1 mRNA和蛋白表达较空白组降低(P<0.05,P<0.01),细胞上清液TNF-α、IL-8表达显著增高(P<0.05),而10%芪冬活血饮药物血清较LPS组和LPS+正常大鼠血清组则能促进ENaC-α、AQP-1 mRNA和蛋白表达(P<0.05,P<0.01),降低TNF-α、IL-8释放(P<0.05)。结论:芪冬活血饮能减轻LPS诱导下肺泡上皮细胞的炎症损伤,恢复肺泡上皮细胞正常的钠水转运,从而减轻急性肺损伤时肺水肿程度。