单克隆抗体夹心斑点免疫金银染色法诊断恶性疟的初步研究

用单克隆抗体(McAb)夹心斑点免疫金银染色法(Dot-IGSSA),对采自海南省的30价原虫血症范围为0.015-0.58％的恶性疟病人血和30份正常人血进行了检测。当用McAb 11G_5、13A_2、13A_1分别与金标记McAb 14D_9夹心时,其阳性检出率分别为96.7％、93.3％和93.3％,假阳性反应约为3.3％,最低可检测出约0.0001％的疟原虫血症。其中11G_5、13A_1分别与金标记14D_9夹心时,对体外培养的云南和安徽的恶性疟红内期抗原呈阳性反应,但其McAb与诺氏疟原虫和伯氏疟原虫均无交叉反应。McAb 13A_1与14D_9夹心时,对食蟹猴疟原虫和间日疟病人感染血中的疟原虫抗原有部分交叉反应。

恶性疟原虫基因工程疫苗的研究——Ⅰ.恶性疟原虫保护性抗原复合基因的合成与克隆

本文应用基因工程技术,设计并化学合成了编码恶性疟原虫红内期保护性抗原MSA_1,MSA_2和RESA上多个免疫原性决定簇(含T、B细胞位点)以及来自白细胞介素-1(IL-1)和破伤风类毒素(TT)上的外源性T细胞激活位点的复合基因HGFC。全基因共由246个碱基对组成,编码一个75肽的复合抗原。合成后的基因克隆在M13mp18载体上,并经序列分析证实与设计完全一致。杂合基因合成和克隆的成功,为在基因水平上进行多价疟疾疫苗的蛋白质工程研究创造了条件。

体外培养恶性疟原虫培基中RESA的初步研究

培养恶性疟原虫培基的上清与不同稀释度的环状体感染红细胞表面抗原(RESA)抗体阳性的10份云南恶性疟患者血样共育,取上清进行RESA-IFA。结果显示,所有血样的RESA抗体滴度均有不同程度的下降.培基经加热处理后,并不影响其抑制活性。表明体外培养恶性疟原虫培基中存在可溶性RESA,且对热稳定。用不同程度的裂殖子可溶性抗原和O型红细胞影抗原与RESA抗体阳性的血样共育,再进行RESA-IFA。裂殖子抗原在浓度为3.1μg/ml时产生完全抑制。相反,O型红细胞影抗原在浓度比裂殖子抗原高约30倍时,才产生抑制。表明RESA源于裂殖子。

恶性疟杂合45肽抗原基因的化学合成及克隆

本文报道用固相亚磷酰胺法成功地合成了人恶性疟杂合抗原基因(Human Plasmodiumfalciparum antigen gene,HPFAG)。其全长为162bp,包含有三个裂殖子重复多肽(83kDa、55kDa、35kDa)和两个环子孢子表面重复多肽,以及两端的接头,共分成8个大小不同的片段合成。分离纯化后的片段连接成完整的双链基因,与P-Blue script重组,转化E.coli JM109,经原位杂交和酶切分析,筛选出重组体,又经DNA序列分析测定,证明与所设计基因完全相同。