恶性疟原虫FCC1/NH株裂殖子表面蛋白MSP1第2～5区基因的PCR扩增及克隆

构建恶性疟原虫FCC1／HN株MSP1基因2～5编码区真核表达质粒pcDNA3／MSP1，为FCC1／HN株MSP1的体外表达及其基因工程疫苗的研制奠定基础。方法采用PCR技术对恶性疟原虫海南分离株（FCC1／HN）基因组DNAMSP1第2～5区基因片段进行扩增．扩增产物经纯化后用Xhol和Aaal双酶切然后定向克隆入pcDNA3质粒，转化大肠杆菌TG1．再用相同内切酶酶切和PCR扩增对重组子进行鉴定。结果筛选出编码FCC1／HN株MSP1第2～5区基因片段的真核表达质粒pcDNA3／MSP1。结论编码FCC1／HN株MSPI第2～5区基因片段的真核表达质粒pcDNA3／MSP1的构建，为恶性疟原虫FCC1／HN株MSP1的体外表达及其基因工程疫苗的研制奠定基础。

恶性疟原虫主要裂殖子表面蛋白1C末端片段在毕赤酵母表达系统的高效表达与纯化(英文)

目的利用毕赤酵母表达系统高效表达并获得纯度较为理想的恶性疟原虫主要裂殖子表面蛋白1 C末端片段(MSP-119)重组蛋白。方法将带有6-his基因的MSP-119基因序列插入毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9k中,用高压电穿孔转化法将目的基因转化入酵母感受态细胞GS115,筛选出高拷贝转化子,优化表达条件,利用甲醇进行诱导表达。表达产物用SDS-PAGE和免疫印迹进行检测。结果毕赤酵母分泌表达MSP-119蛋白,免疫印迹结果表明MSP-119基因表达蛋白能被抗MSP-119的单抗所识别,出现特异条带,将培养上清利用Ni-NTA柱纯化后,推算MSP-119蛋白的表达量为1.0g/L。结论酵母细胞表达系统可高效表达可免疫识别的MSP-119重组蛋白。

恶性疟原虫海南分离株(FCC1/HN)裂殖子表面蛋白2(MSA2)真核表达载体的构建

目的构建恶性疟原虫海南分离株（FCC1／HN）裂殖子表面蛋白MSA2的真核表达质粒pcDNA3／MSA2，为疟疾核酸疫苗及蛋白疫苗的研制奠定基础。方法采用PCR技术对FCC1／HN基因组DNAMSA2基因进行扩增，扩增产物经纯化后用BamHI和EcoRI双酶切，然后走向克隆入真核表达质粒pcDNA3，连接产物转化大肠杆菌TG1，再用相同的内切酸酶切和PCR扩增对重组子进行鉴定。结果筛选出的重组子为编码PCC1／HCMSA2基因片段的重组质粒pcDNA3／MSA2。结论编码FCC1／HNMSA2基因片段真该表达质粒pcDNA3／MSA2的构建，为疟疾核酸疫苗及蛋白疫苗的研制奠定基础。