恶性疟原虫海南分离株pfcrt基因同氯喹抗性的相关性分析

目的探讨恶性疟原虫海南株pfcrt基因多态性同氯喹抗性的关系。方法采集确诊恶性疟患者血样42份,应用套式PCR方法体外扩增pfcrt基因含有编码第76和356位氨基酸的基因片段,并对扩增产物进行限制性酶切分析。结果1)76位点:22个氯喹抗性虫株中有18个发生K76T突变型(81.82%),20个氯喹敏感虫株中野生型和突变型各占50%;2)356位点:所有42个样本的356位点均为野生型。结论我国海南省恶性疟原虫pfcrt基因的K76T突变与氯喹抗性存在一定关联,而356位点可能与氯喹抗性无关。

恶性疟原虫重组乳酸脱氢酶胶体金免疫层析法检测试纸条的研制

目的用氯金酸标记抗恶性疟原虫乳酸脱氢酶(LDH)单克隆抗体(McAb),研制用于诊断恶性疟原虫和间日疟原虫感染的胶体金免疫层析(GICA)试纸。方法采用柠檬酸盐还原法制备胶体金颗粒、标记抗恶性疟原虫重组乳酸脱氢酶单克隆抗体,制成免疫层析检测试纸条。用该试纸条检测已知疟疾病人及健康人血样,鉴定方法的敏感性和特异性。结果检测重组LDH抗原的最小量为5 ng/ml;对30例恶性疟病人血样及40例间日疟病人血样进行检测,敏感性分别为83.33%和57.50%,检测100例健康者血样特异性为98.00%。结论初步建立了同时诊断恶性疟原虫和间日疟原虫感染的GICA检测法。

Chelex法从恶性疟原虫薄血涂片提取DNA的基因诊断

目的建立从恶性疟原虫薄血涂片中提取DNA进行恶性疟原虫18SRNA基因套式PCR检测方法，并探讨其可行性。方法利用螯合型的离子交换树脂Chelex-100作为介质，一步法分别提取患者染色和未染色薄血涂片恶性疟原虫DNA，行套式PCR扩增。以培养的不同浓度恶性疟原虫制备的染色和未染色薄血涂片提取恶性疟原虫DNA为模板进行PCR扩增，检测该方法的灵敏度。结果用Chelex-100法提取恶性疟原虫患者染色与未染色薄血膜DNA，PCR扩增均出现205bp特异扩增片段。染色及未染色薄血膜恶性疟原虫PCR扩增的最低虫体浓度分别为1．5×10^1／止血和1．5×10^-1／μL血。结论Chelex-100法薄血涂片中提取微量DNA的套式PCR检测方法，可在基因水平检测存档的薄血涂片标本。为恶性疟疾的临床实验室诊断和分子流行病学研究提供了新方法。