龟板提取物抑制细胞衰老缓解SOP小鼠骨量丢失及海马退变

目的探讨龟板提取物(Plastrum testudinis extract,后简称PTE)通过抑制细胞衰老缓解SOP小鼠的骨量丢失及海马退变的作用。方法动物实验:应用传统半乳糖皮下注射+去势法建立老年性骨质疏松症(senile osteoporosis,SOP)模型,将C57/BL6小鼠分为雌性或雄性的CON组、SOP组、SOP+PTE组;SOP+PTE组在造模过程中用PTE 0.5 g/mL灌胃干预4周,取材前1周进行行为学实验,后取大脑、L4椎体,检测骨和海马组织形态学;细胞实验:利用过氧叔丁醇(TBHP)诱导MC3T3/HT22细胞衰老,分别观察诱导后HT22半乳糖苷酶染色、衰老标志物和MC3T3成骨、衰老标志物的变化及PTE相应的治疗效果。结果MicroCT提示雌雄小鼠中,与CON组相比,SOP组骨量丢失,SOP+PTE组骨量则得到了恢复;骨HE切片结果与MicroCT结果相符;海马组织切片提示,与CON组相比,SOP组海马出现退变,而SOP+PTE组退变则得到缓解。在新物体识别实验和时序实验中,与CON、SOP组相比,雄性SOP+PTE组记忆能力明显恢复;但雌雄小鼠旷场实验均无明显变化。②TBHP可诱导MC3T3衰老,降低成骨能力及增加衰老蛋白表达,而当加入PTE后,均能逆转TBHP导致的成骨能力降低与蛋白下降;TBHP亦可增加HT22半乳糖苷酶染色区域,增加衰老蛋白表达,而加入PTE后,上述变化均得到逆转。结论PTE通过抑制前成骨细胞与海马神经元细胞的衰老,缓解SOP小鼠的骨量丢失和海马衰老退变。

龟板醇提物对大鼠骨髓间充质干细胞氧化损伤的修复及其抗脂质过氧化作用

目的研究龟板95%乙醇提取物(醇提物)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)氧化损伤修复及其抗脂质过氧化作用。方法使用密度梯度法分离大鼠MSC进行培养,经CD44鉴定后以H2O2作用于MSC3h,建立MSC氧化损伤模型,通过MTT法检测不同质量浓度龟板醇提物(0.166、0.833、1.66、3.32、4.98mg/mL)对MSC损伤的修复。50只SD大鼠,随机分为5组,受试组分别ig0.01、0.03、0.09g/(kg.d)龟板醇提物;阳性对照组ig维生素E200mg/(kg.d);对照组ig等量的蒸馏水。每天1次,共7d,分别用TBA比色法、亚硝酸盐法测定大鼠肝中丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果与H2O2(1∶10)损伤组比较,龟板醇提物各组具有显著性差异(P<0.01、0.05);与对照组比较,龟板醇提物低、中、高剂量组MDA水平均明显降低(P<0.01),同时能明显提高SOD活力(P<0.01、0.05)。结论龟板醇提物对大鼠MSC氧化损伤具有明显修复作用,同时,具有抗脂质过氧化作用。

龟板提取物对PC12细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨龟板提取物(Plastrum testudinis Extracts,PTE)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:采用无血清培养PC12细胞同时100μmol/mL 6-OHDA损伤24 h的方法建立PC12细胞凋亡模型。细胞分为正常对照组、6-OHDA组及PTE 3、30μg/mL组四组。在施加处理因素24 h后,MTT比色分析测定细胞光密度值,Ammexin V/PI双染流式细胞术测定细胞凋亡率,Western blot检测BCL-X/L的表达水平。用Bio-Rad Quantity One凝胶分析系统对条带进行半定量分析。结果:MTT与流式细胞术结果显示PTE能提高PC12细胞活力,降低PC12细胞凋亡率,并呈剂量依赖性,PTE 3、30μg/mL组与模型组比较,差异具有统计学意义。Western blot结果显示龟板提取物使BCL-X/L表达增强,并呈剂量依赖性。结论:龟板提取物具有抑制6-羟基多巴胺诱导PC12细胞凋亡的作用,其作用机制可能与上调BCL-X/L的表达有关。

龟板提取物诱导神经干细胞向神经元分化过程中相关microRNA表达变化

【目的】观察龟板提取物诱导神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向神经元细胞定向分化过程中相关micro RNA表达的变化。【方法】分离培养孕14 d SD胎鼠原代神经干细胞,经免疫荧光染色鉴定神经干细胞的特异抗原及其多向分化能力。神经干细胞随机设空白对照组、龟板提取物低浓度组(3μg/m L)、龟板提取物高浓度组(30μg/m L)。诱导分化7 d,提取各组细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测不同组别mi R-124和mi R-9的变化。【结果】与空白对照组比较,龟板提取物低浓度组mi R-124和mi R-9表达均无显著变化,龟板提取物高浓度组均显著升高(P<0.05)。【结论】龟板提取物可能通过调控mi R-124、mi R-9表达在NSCs向神经元细胞定向分化过程中起重要作用。

龟甲提取物对骨髓间充质干细胞增殖过程中核受体的影响

【目的】观察龟甲(也称龟版或龟板)提取物对骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)增殖过程中核受体 (nuclear receptor,NR)表达的影响。【方法】采用密度梯度法分离大鼠MSC进行培养,经5-溴脱氧尿嘧啶(Brdu)标记和 CD44免疫组化染色鉴定后,分别以高、中、低剂量的龟甲提取物(3 333、333．3、33．33μg／mL)加入到体外培养的MSC中, 与龟甲提取物作用12、24、72、120 h后,采用免疫组化法和免疫荧光细胞化学法检测MSC的视黄酸受体(retinoic acid receptor-α,RARα)、维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)、雌激素受体(estrogen reeepror,ER)、糖皮质激素受体 (glucocorticoid receptor,GR)、甲状腺激素受体(thyroid hormone receptor-α,TRα)和过氧化物酶体增殖物活化受体(peroxisome proliferator activated receptor-δ,PPARδ)的表达。【结果】高、中、低剂量龟甲提取物组的MSC的RARα、VDR表达阳性细胞均高于对照组(P<0．05或P<0．01),且呈剂量依赖性;作用24 h后RARα表达达峰值,作用72 h后VDR表达达峰值。未检测到ER、GR、PPARδ、TRα阳性反应细胞。【结论】视黄酸受体α和维生素D受体可能为龟甲提取物促MSC增殖的药理靶点。

龟板组份及配伍对体外培养骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:观察龟板组份及配伍对体外培养骨髓间充质干细胞增殖的影响,筛选龟板组份中进MSC增殖的药效成分方法:从龟板提取物分离出10个组份,以不同浓度(2μl,5μl,10μl,20μl)组份及配伍加入体外培养的MSC中,培养3 d后,MTT法测定细胞活性。结果:与对照组比较,A、B、H、I 20μl浓度组和C、F(10μl～20μl)浓度组和J(5μl～0μl)浓度组细胞活性显著提高,与J组份配伍细胞活性提高(P<0．05);E(2μl-20μl)浓度组细胞活性显著降低,与E组份配伍组细胞活性显著降低;D和G组细胞活性没有影响。结论:7个组分均促进MSC增殖,以J组份最强,与J组份配伍作用提高;E组份抑制MSC增殖,与E组份配伍作用降低;D和G组份无效。

维生素D调控龟板提取物促骨髓间充质干细胞增殖分化的研究

目的观察维生素D(Vit D)调控龟板提取物(PTE)促进骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖过程的作用及其机制。方法构建PGL3-Id1启动子,转染大鼠MSCs,PTE分别联合10-6、10-7、10-8mol/L的Vit D作用于转染后的MSCs 36 h,利用荧光素酶检测MSCs中Id1启动子的水平。1、3、30、100μg/m L PTE分别联合10-7mol/L Vit D作用于MSCs 36 h、3 d、7 d,RT-PCR检测VDR的表达。结果 PTE促进了MSCs中Id1的表达,联合应用Vit D,Id1的表达会降低,这种差异具有极显著性统计学意义(P<0.01),且不同剂量Vit D之间比较差异也有极显著性统计学意义(P<0.01)。药物联合作用36 h、3 d和7 d时,均不同程度抑制了VDR的表达;作用36 h时Vit D联合大剂量PTE时抑制作用显著,与不加PTE组比较,差异有统计学意义(P<0.05);而作用3 d和7 d时,Vit D联合大剂量PTE时抑制作用更为明显;不同剂量PTE联合Vit D作用相同时间,不同剂量之间VDR的表达量差异有统计学意义(P<0.05),而相同剂量PTE联合Vit D作用不同时间,7 d与36 h时VDR表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Vit D抑制了PTE促MSCs的增殖作用,核受体VDR可能是PTE调控MSCs增殖和分化的一个药物作用靶点。

龟板提取物调控毛囊干细胞Wnt/BMP信号通路促进大鼠压疮修复

【目的】基于毛囊干细胞(hair follicle stem cells,HFSCs)Wnt/BMP信号通路,观察龟板提取物(CPTE)对大鼠压疮皮肤的修复效果。【方法】(1)体内实验:将40只SD大鼠随机分为模型对照组、溶剂对照组、CPTE高浓度组、CPTE低浓度组,每组10只。复制SD大鼠压疮模型。测算创面愈合率,采用苏木素—伊红(HE)染色观察大鼠压疮病理变化,采用免疫荧光染色法检测大鼠创面皮肤组织中β-catenin、骨形态发生蛋白4(BMP4)的表达。(2)体外实验:分离培养SD乳鼠HFSCs,采用免疫荧光鉴定细胞表面标志物细胞角蛋白15(CK15)的表达,采用CCK-8法观察CPTE对HFSCs增殖能力的影响,采用Western blot法观察CPTE对HFSCs中β-catenin、BMP4表达的影响。【结果】CPTE 2组大鼠压疮愈合情况优于其他2组。培养的HFSCs细胞表面CK15呈阳性表达;3、10、30μg·mL-1CPTE对HFSCs有促增殖作用;与空白对照组比较,CPTE 3、10μg·mL-1组HFSCs中β-catenin蛋白表达上升,BMP4蛋白表达下降(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。【结论】CPTE可能通过调控HFSCs中Wnt/BMP通路促进SD大鼠压疮创面修复。

龟板活性成分对骨髓间充质干细胞中Id1表达的影响

目地观察龟板活性成分对骨髓间充质干细胞中分化抑制蛋白1(inhibitor of differentiation 1,Id1)的作用。方法将构建成功的PGL3-Id1启动子用磷酸钙共沉淀法转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),龟板9种活性成分(S1-S9:十六酸甲酯(S1)、十六酸(S2)、十六酸乙酯(S3)、十八酸甲酯(S4)、十八酸(S5)、十八酸乙酯(S6)、甾醇(S7)、十四酸甾醇酯(S8)、4-甾酮(S9))30μg/mL分别作用于转染后的BMSCs 36 h,萤光素酶报告基因检测各活性成分对Id1表达的影响。选取对Id1作用明显的S2、S3、S6、S8、S9,RT-PCR检测对Id1表达的影响。将各活性成分按不同的方式配伍,30μg/mL的终浓度作用于转染后的BMSCs 36 h,萤光素酶报告基因检测各配伍对Id1表达的影响。结果 S6、S8、S9促进了BMSCs中Id1的表达;S2、S3抑制了BMSCs中Id1的表达;S6、S8、S9之间的配伍可以促进Id1的表达;S2、S3及其与其他成分之间的配伍降低了Id1的表达。结论 S6、S8、S9为龟板中促进BMSCs增殖的活性成分;S2、S3为抑制BMSCs增殖的活性成分。龟板对MSCs的作用是各成分相互作用的结果,既促进了BMSCs增殖,又避免了细胞的过度增殖。

龟板水提物缓释微球的制备及其特性

目的:制备高包封率的龟板水提物缓释微球。方法:分别采用海藻酸钙凝胶珠、海藻酸钙-壳聚糖微胶囊和海藻酸钙-羧甲基纤维素钠微胶囊体系制备龟板水提物缓释微球,并考察其外观形态、包封率和体外释药等特性。结果:制得的龟板-海藻酸钙凝胶珠、龟板-海藻酸钙-壳聚糖微球和龟板-海藻酸钙-羧甲基纤维素钠微球外观圆整,表面光滑,且粒径均匀;包封率分别是46.7%、49.9%和82.3%;海藻酸钙凝胶珠有明显的突释现象,海藻酸钠-壳聚糖微球的突释现象和缓释效果有所改善,而海藻酸钙-羧甲基纤维素钠微球无突释现象,其缓释可达14小时以上。结论:龟板-海藻酸钙-羧甲基纤维素钠微球包封率高,同时具有优良的缓释性能。

龟板提取物激活wnt/β-catenin通路促大鼠触须部皮肤创面修复

目的探讨龟板提取物(Plastrum Testudinis extracts,PTE)对大鼠触须部皮肤创面修复中Wnt/β-catenin通路的调控。方法分离培养SD乳鼠毛囊干细胞(Hair follicle stem cells,HFSCs),免疫荧光检测细胞表面标志物CD34、CD71表达,CCK-8法检测PTE对HFSCs增殖的影响,Western-blot检测PTE对HFSCs中Gsk-3β、β-catenin蛋白表达的作用;制作SD大鼠触须部皮肤缺损模型,随机分为空白对照组、实验对照组、阳性药物对照组、PTE组,测算动物创面面积和愈合率,病理学及免疫荧光检测创面组织。结果培养的细胞形态饱满,折光性强,呈铺路石样,细胞表面CD34及CD71阳性。CCK-8显示PTE对HFSCs有促增殖作用(P<0.01)。PTE作用于HFSCs后,Gsk-3β蛋白(P<0.05)下降的同时β-catenin蛋白表达上升(P<0.001)。术后7 d各组创面基本愈合,PTE组及阳性药物对照组表皮较其他组薄,毛囊周围有新生表皮参与修复,表皮与真皮结合牢固,真皮无炎性细胞,组织结构排列规则,促修复效果优于其他各组;PTE组修复表皮内Gsk-3β蛋白下降而β-catenin蛋白表达上升。结论 PTE可通过激活HFSCs中Wnt/β-catenin通路促进SD大鼠触须部创面修复。

龟板提取物调控Otx2基因促进神经干细胞向多巴胺神经元分化的研究

目的探讨龟板提取物是否能够通过调控同源盒基因Otx2(orthodenticle homeobox 2)来促进神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向多巴胺神经元的分化。方法分离培养孕14 d左右的SD胎鼠NSCs 7 d,随机设空白对照组和30μg·m L^(-1)的龟板有效成分PTE(2B)组、龟板提取物十八酸乙酯(S6)组、4-甾酮(S9)组,诱导分化5~7 d,用免疫荧光法检测多巴胺酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)阳性神经元和Otx2的表达,用实时荧光定量PCR法检测Otx2的m RNA表达,蛋白质印迹法(Western Blot)检测Otx2的蛋白表达。结果与空白对照组比较,2B组、S6组和S9组Otx2和TH的荧光表达均升高(P<0.05),S6组Otx2的m RNA表达升高(P<0.05),S6组和S9组Otx2的蛋白表达升高(P<0.05)。结论龟板提取物可能通过调控Otx2基因促进神经干细胞向多巴胺神经元分化。

龟甲提取物干扰NF-κB-NLRP3炎症体正反馈回路改善老年性骨质疏松的研究

目的:探讨龟甲提取物对NF-κB-NLRP3炎症体正反馈回路的调节作用及改善老年性骨质疏松的起效机制。方法:超高效液相联用质谱技术完成龟甲水提液中有效成分的鉴定。体外实验中,TRAP染色法检测龟甲提取物对骨髓源性巨噬细胞破骨分化的影响,使用NF-κB信号通路激动剂与抑制剂验证龟甲提取物对NF-κB信号通路的影响,使用NLRP3炎症体激动剂与抑制剂验证龟甲提取物对NLRP3炎症体活性的影响,RT-qPCR检测Nfatc1、Ctsk基因的表达量,Western Blot法检测p50、p-p50、NLRP3、IL-1β、pro-IL-1β的表达量。体内实验中,将6只3月龄C57BL/6小鼠作为对照组,12只22月龄自然衰老小鼠随机分为老年性骨质疏松模型组、龟甲提取物干预组,每组6只,连续干预8周。结果:筛选出龟甲水提液有效成分肉豆蔻酸。体外实验:与对照组比较,肉豆蔻酸显著抑制破骨分化(P<0.01),Nfatc1、Ctsk基因的表达量被显著抑制(P<0.05,P<0.01),p-p50、NLRP3、IL-1β、pro-IL-1β的表达量显著下调(P<0.01)。体内实验:与模型组比较,肉豆蔻酸有效提高骨体积分数(P<0.05),抑制骨髓腔中炎症体的表达量(P<0.01)。结论:龟甲提取物肉豆蔻酸改善老年性骨质疏松可能与干扰NF-κB-NLRP3炎症体正反馈回路,抑制破骨细胞形成相关。

龟板提取物上调维生素D受体表达促骨髓间充质干细胞向成骨分化

目的探讨龟板提取物诱导大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymalstem cells,MSCs)向成骨分化和对维生素D受体(VDR)表达的影响。方法从大鼠骨髓中分离MSCs,体外培养,利用流式细胞术检测MSCs表面抗原CD44细胞标志,体外培养MSCs分成不同的组观察其向成骨分化,在培养基中不加任何处理的作为对照组,培养基中加成骨诱导液诱导MSCs向成骨分化作为阳性对照组,龟板提取物组在培养基中加龟板提取物,诱导7d后,通过免疫化学染色、Western blotting、原位杂交、RT-PCR等方法观察龟板提取物对原代培养的MSCs向成骨分化的成骨分化标记分子碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPN)及VDR阳性表达及VDR mRNA的表达情况。结果免疫组化染色显示,龟板提取物组成骨分化标记分子ALP、OPN和VDR的阳性百分比明显高于对照组,Western blotting结果也显示龟板提取物组的ALP、OPN和VDR的蛋白表达水平高于对照组;同时原位杂交、RT-PCR结果表明,龟板提取物诱导MSCs向成骨分化过程可明显促进VDR mRNA的表达。结论龟板提取物可促MSCs向成骨分化,其机制可能与VDR的上调有关。

龟甲水提液调控NF-κB炎症微环境对MC3T3-E1成骨分化的影响

目的:探讨龟甲水提液调控核转录因子-κB(NF-κB)炎症微环境促小鼠前成骨细胞系(MC3T3-E1)成骨分化的作用及机制。方法:体外培养MC3T3-E1细胞,并进行成骨诱导,龟甲水提液干预。实验分为空白组、成骨诱导组、龟甲水提液(20 mg·L^-1)联合成骨诱导组。细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)法检测MC3T3-E1增殖能力,并确定最佳干预浓度;碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红(ARS)染色检测MC3T3-E1成骨分化能力;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测NF-κB p65,NF-κB p105,白细胞介素-6(IL-6),ALP和Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)mRNA的表达。结果:CCK-8结果显示,随着时间的增长,MC3T3-E1增殖虽无统计学差异,但呈上升趋势,而在20 mg·L^-1质量浓度时增殖较其他组明显;ALP和ARS染色结果显示,成骨诱导组和龟甲水提液联合成骨诱导组染色阳性率较空白组明显升高;Real-time PCR结果显示,龟甲干预第7天,与空白组比较,龟甲水提液联合成骨诱导组NF-κB p105和IL-6 mRNA的表达明显降低(P<0.01),ALP和COL-ⅠmRNA的表达明显升高(P<0.05);龟甲干预第14天,与空白组比较,龟甲水提液联合成骨诱导组NF-κB p65,NF-κB p105和IL-6 mRNA的表达明显降低(P<0.01),ALP和COL-ⅠmRNA的表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:龟甲水提液能够促进MC3T3-E1成骨分化,其机制可能与抑制NF-κB炎性微环境有关。

矿石甲壳类硬质中药索氏提取法的改进

目的:以龟甲为例,探讨改进矿石甲壳类硬质中药的索氏提取法。方法:在常量索氏提取法的基础上,采取饱和食盐水浴并装置四重盖圈及定时器,实现大量索氏提取法;通过HPLC法、收率和DPPH清除率分析,比较大量索氏提取法、常量索氏提取法和搅拌回流法的优劣。结果:大量索氏提取法和常量索氏提取法没有显著差异,而搅拌回流法较前2种方法效果较差。结论:改进后的大量索氏提取法是一种彻底、高效、方便、经济、健康的方法。

龟板提取物对骨髓间充质干细胞中分化抑制蛋白1表达的影响

目的观察不同剂量的龟板提取物对骨髓间充质干细胞中分化抑制蛋白1(inhibitor of differentiation 1,Id1)的作用。方法将构建成功的PGL3-Id1启动子用磷酸钙共沉淀法转染大鼠骨髓间充质干细胞,龟板提取物分别作用于转染后的骨髓间充质干细胞12、24、36 h,选取作用最为明显的36 h,每组分别加入0、1、3、30、100μg/mL龟板提取物,药物作用36 h后收集细胞分别应用萤光素酶报告基因系统、RT-PCR和Western blotting检测Id1的表达。结果早期、小剂量龟板提取物对Id1的影响不大;随着时间和剂量的增加,Id1的表达水平也逐渐升高。结论龟板提取物促进了骨髓间充质干细胞中Id1的表达,剂量越大,作用时间越长,促进作用越明显。

龟板提取物靶向BMP4通路抑制PC12细胞凋亡

目的探讨龟板提取物(Testudinis Carapax et Plastrum extracts,TCPE)对血清饥饿诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制。方法采用血清饥饿3 d的方法建立PC12细胞凋亡模型,并将细胞分为对照组,模型组,TCPE低、高剂量(3、30μg/mL)组。在施加处理因素3 d后,用MTT比色分析测定细胞吸光度值,Annexin V/PI双染流式细胞术测定细胞凋亡率,Western blotting检测Caspase-3、BMPs信号通路的表达水平,并检测BMPs信号通路阻断后TCPE的抗凋亡作用。用Bio-Rad Quantity One凝胶分析系统对条带进行半定量分析。结果 MTT与流式细胞术结果显示,TCPE能提高PC12细胞活性,降低PC12细胞凋亡率,并呈剂量依赖性,TCPE组与模型组相比差异具有统计学意义(P<0.05、0.01)。Western blotting结果显示,TCPE能降低Caspase-3表达,增加BMP4、BMPR-IA、p-Smad1/5/8的表达,TCPE组与模型组相比,差异具有统计学意义(P<0.05、0.01)。TCPE对BMP2、BMP7、BMPR-II的表达没有影响,BMPR-IB没有被检测出。BMP4中和抗体减弱了TCPE的抗凋亡活性。结论 TCPE具有抑制血清饥饿诱导PC12细胞凋亡的作用,且这种作用呈剂量依赖性,其作用机制可能与激活BMP4信号通路表达有关。

龟板提取物调控骨髓间充质干细胞中Id1表达的研究

目的观察龟板提取物在不同的时间点对骨髓间充质干细胞中分化抑制蛋白1的影响。方法将构建成功的PGL3-Id1启动子用磷酸钙共沉淀法转染大鼠骨髓间充质干细胞,龟板提取物分别作用于转染后的骨髓间充质干细胞36小时、3天、7天,每个时间点分别加入0,1,3,30,100μg/ml的龟板提取物,药物作用一定时间后收集细胞分别应用萤光素酶报告基因系统、RT-PCR检测Id1蛋白的表达。结果 36小时和3天时,小剂量的龟板提取物对分化抑制蛋白1的影响不大,随着时间和剂量的增加,龟板提取物量效依赖性地促进了Id1的表达;7天时,龟板提取物对Id1的促进作用逐渐减弱。结论龟板提取物促进了骨髓间充质干细胞中分化抑制蛋白1的表达,且其促进作用呈现增高-最强-减弱的特点。

龟甲水提液通过神经肽调控去卵巢大鼠骨形成的机制

目的:探讨龟甲水提液(PTE)是否通过影响骨、脑组织中神经肽Y(NPY)及其受体的表达从而促进去卵巢(OVX)大鼠骨形成。方法:30只雌性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、OVX组和PTE组(80mg·kg^(-1)·d^(-1)),利用双侧OVx法建立骨质疏松模型,连续灌胃给药12周,收集各组大鼠股骨、全脑及下丘脑。采用Micro-CT和HE染色法观察股骨骨微结构变化,利用Westernblot和RT-PCR法检测股骨成骨分化相关因子,以及全脑、下丘脑和股骨NPY及其Y-Y1、Y-Y2受体(NPYIR、NPY2R)的表达水平。结果:PTE能显著改善OVX大鼠股骨骨微结构,促进OVX大鼠股骨组织中成骨分化相关因子ALP、BMP-2mRNA及蛋白,COL1、Runx2mRNA的表达(P<0.01,P<0.05),下调OVX大鼠全脑与下丘脑组织中NPYIRmRNA及蛋白表达(P<0.01),下调OVX大鼠全脑与股骨组织中NPYmRNA及蛋白表达(P<0.01,P<0.05),上调OVX大鼠股骨组织中NPY1R和NPY2R蛋白表达(P<0.01)。结论:PTE可能通过调控脑、下丘脑及股骨中的神经肽信号促进去卵巢大鼠骨形成。