CLEC1B、DKK1、DRD4在原发性肝癌病变组织中的表达及临床意义探究

目的分析C型凝集素结构域家族1成员B(C-type lectin domain family 1 member B,CLEC1B)、分泌型蛋白Dickkopf 1(DKK1)、多巴胺受体D4(dopamine receptor D4,DRD4)在原发性肝癌(primary hepatic cancer,PHC)患者病变组织中的表达及临床意义。方法回顾性选取2022年1月~2023年1月在四川大学华西医院接受肝癌切除术且经术后病理证实为PHC的138例患者,取其癌组织与癌旁组织石蜡病理标本,分析其CLEC1B、DKK1、DRD4表达情况及和临床病理特征关联性,Pearson法分析CLEC1B、DKK1、DRD4的相关性。结果肝癌组织中CLEC1B、DRD4表达水平均低于癌旁肝组织,肝癌组织中的DKK1蛋白表达较癌旁肝组织更高(P<0.05),且3者均主要分布于细胞浆;CLEC1B低表达、DKK1高表达、DRD4低表达分别97例(70.29%)、91例(65.94%)、78例(56.52%),PHC患者的CLEC1B低表达与术前AFP水平、血管侵犯、远处转移、肿瘤出血等密切相关(P<0.05),DKK1高表达与术前AFP水平、BCLC Kinki分期、肿瘤数目、肿瘤大小密切相关(P<0.05),DRD4低表达与术前AFP水平、肿瘤数目、肿瘤大小、卫星结节、血管侵犯密切相关(P<0.05);Pearson相关分析显示,PHC患者CLEC1B、DRD4与DKK1表达水平呈负相关(r=-0.809、r=-0.774,P<0.001),CLEC1B与DRD4表达水平呈正相关(r=0.748,P<0.001)。结论CLEC1B、DRD4在PHC患者癌变组织中呈低表达,而DKK1呈高表达,且与临床病理参数有关,CLEC1B、DKK1、DRD4可能参与PHC发生发展,有一定检测意义。

单细胞转录组数据揭示PHLDA1是卵巢癌T细胞耗竭的关键分子

目的通过绘制高级别浆液性卵巢癌(High-grade serous ovarian cancer,HGSOC)单细胞转录组图谱,筛选并验证与CD8^(+)T细胞耗竭相关的关键基因。方法利用实验室前期的单细胞测序数据(SRA数据库:PRJNA756768),并整合数据库中5例HGSOC测序数据,分析肿瘤微环境中T细胞的具体亚型,拟时序分析探究T细胞亚群分化轨迹,差异基因富集确定免疫抑制的CD8^(+)IL-2^(Low)和CD8^(+)IFN-γ^(Low)细胞亚群及差异基因,再结合患者预后筛选出与CD8^(+)T细胞耗竭密切相关的候选分子。流式分析人PBMC中的T细胞激活到耗竭过程中Pleckstrin同源样结构域家族A成员1(Pleckstrin homology-like domain,family A,member 1,PHLDA1)在CD8^(+)T、CD4^(+)T及Treg细胞上的表达,ELISA检测PHLDA1 High和PHLDA1 Low的CD8^(+)T细胞分泌IFN-γ和IL-2的水平,最后流式数据分析PHLDA1与耗竭标志物PD-1、TIM-3的关联。结果将T细胞按三种方式分群:(1)IL-2 High和IL-2^(Low);(2)IFN-γ^(High)和IFN-γ^(Low);(3)耗竭和杀伤T细胞。随后取其差异基因的交集,最终筛选到关键基因PHLDA1。流式分析提示T细胞激活到耗竭的过程中,PHLDA1在CD8^(+)T、CD4^(+)T及Treg细胞上的表达持续升高;ELISA结果显示CD8^(+)PHLDA1^(High)的T细胞分泌IFN-γ和IL-2的水平显著低于CD8^(+)PHLDA1^(Low)T细胞。同时,CD8^(+)PHLDA1^(High)T细胞亚群可同时覆盖CD8^(+)TIM-3^(+)和CD8^(+)PD-1^(+)的耗竭T细胞类型。结论本研究基于单细胞测序数据筛选到PHLDA1是卵巢癌CD8^(+)T细胞耗竭的关键分子,该研究为卵巢癌的免疫治疗提供了新的思路。

Crosstalk among canonical Wnt and Hippo pathway members in skeletal muscle and at the neuromuscular junction

Skeletal muscles are essential for locomotion,posture,and metabolic regulation.To understand physiological processes,exercise adaptation,and muscle-related disorders,it is critical to understand the molecular pathways that underlie skeletal muscle function.The process of muscle contra ction,orchestrated by a complex interplay of molecular events,is at the core of skeletal muscle function.Muscle contraction is initiated by an action potential and neuromuscular transmission requiring a neuromuscular junction.Within muscle fibers,calcium ions play a critical role in mediating the interaction between actin and myosin filaments that generate force.Regulation of calcium release from the sarcoplasmic reticulum plays a key role in excitation-contraction coupling.The development and growth of skeletal muscle are regulated by a network of molecular pathways collectively known as myogenesis.Myogenic regulators coordinate the diffe rentiation of myoblasts into mature muscle fibers.Signaling pathways regulate muscle protein synthesis and hypertrophy in response to mechanical stimuli and nutrient availability.Seve ral muscle-related diseases,including congenital myasthenic disorders,sarcopenia,muscular dystrophies,and metabolic myopathies,are underpinned by dys regulated molecular pathways in skeletal muscle.Therapeutic interventions aimed at preserving muscle mass and function,enhancing regeneration,and improving metabolic health hold promise by targeting specific molecular pathways.Other molecular signaling pathways in skeletal muscle include the canonical Wnt signaling pathway,a critical regulator of myogenesis,muscle regeneration,and metabolic function,and the Hippo signaling pathway.In recent years,more details have been uncovered about the role of these two pathways during myogenesis and in developing and adult skeletal muscle fibers,and at the neuromuscular junction.In fact,research in the last few years now suggests that these two signaling pathways are interconnected and that they jointly control physiological and pathophysiological processes in muscle fibers.In this review,we will summarize and discuss the data on these two pathways,focusing on their concerted action next to their contribution to skeletal muscle biology.However,an in-depth discussion of the noncanonical Wnt pathway,the fibro/a dipogenic precursors,or the mechanosensory aspects of these pathways is not the focus of this review.

趋化素样因子超家族6和程序性死亡受体-配体1在脑胶质瘤中的表达及其与预后的关系

目的探讨趋化素样因子超家族6(CMTM6)、程序性死亡受体-配体1(PD-L1)与脑胶质瘤病人预后状况的关系。方法选择2016年1月至2017年1月解放军总医院三中心收治的脑胶质瘤病人95例(观察组)和颅脑外伤病人89例(对照组)。采用免疫组化法检测脑胶质瘤组织和正常脑组织的CMTM6、PD-L1蛋白表达。比较两组CMTM6、PD-L1蛋白表达的差异。采用电话、门诊结合微信随访获取术后5年生存相关数据。分析CMTM6、PD-L1与脑胶质瘤病人预后状况的关系。结果观察组CMTM6、PD-L1阳性表达率为85.11%、54.74%,明显高于对照组的26.97%、13.48%(P<0.05)。高病理级别胶质瘤组织的阳性表达率为95.24%、73.81%,明显高于低病理级别的71.70%、39.62%(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,CMTM6阳性表达组的4、5年累积总生存率较CMTM6阴性表达组的降低(P<0.05)。PD-L1阳性表达组的2、3、4、5年累积总生存率及无病生存率较PD-L1阴性表达组明显降低(P<0.05)。结论CMTM6、PD-L1与脑胶质瘤病人病理学分级具有紧密的关系,且两者阳性表达往往提示预后状况不良。

脑胶质瘤组织PLEKHA4表达变化及其影响因素分析

目的探讨脑胶质瘤组织Pleckstrin同源域A族成员4(PLEKHA4)表达变化及其影响因素。方法选取胶质瘤手术切除患者癌组织及相应癌旁组织标本52例,其中WHO分级Ⅰ~Ⅱ级21例、Ⅲ~Ⅳ级31例,p53分型野生型23例、突变型29例。采用免疫组化和免疫印迹两种方法检测脑胶质瘤患者癌旁组织、胶质瘤组织中的PLEKHA4表达,观察PLEKHA4不同表达水平胶质瘤患者的临床特点及临床预后情况,分析影响胶质瘤组织中PLEKHA4表达的相关因素。结果52例患者胶质瘤组织PLEKHA4均为阳性表达,表达部位主要在胶质瘤组织细胞质和细胞膜中;癌旁组织未见PLEKHA4阳性表达。癌旁组织、Ⅰ~Ⅱ级胶质瘤、Ⅲ~Ⅳ级胶质瘤PLEKHA4相对表达量分别为0.419±0.101、0.968±0.061、1.366±0.096;PLEKHA4在胶质瘤组织中的相对表达量高于癌旁组织,Ⅲ~Ⅳ级胶质瘤组织PLEKHA4相对表达量高于Ⅰ~Ⅱ级胶质瘤组织(P均<0.05)。胶质瘤组织不同PLEKHA4表达水平患者WHO分级、p53分型比较差异有统计学意义(P均<0.05)。Logistic回归分析显示,胶质瘤WHO分级、p53分型是PLEKHA4表达的独立影响因素(P均<0.05)。术后随访2年,PLEKHA4高表达患者生存率为28.6%,PLEKHA4低表达患者生存率为70.8%,二者生存率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论胶质瘤组织PLEKHA4高表达,患者WHO分型、p53分型是胶质瘤组织PLEKHA4表达的影响因素,PLEKHA4表达与患者临床预后相关。

PD1及CARD11表达与弥漫大B细胞淋巴瘤患者远期生存的关系

目的探讨程序性死亡受体1(PD1)及半胱氨酸天门冬氨酰蛋白酶(cysteine aspartyl protease,Caspasee)募集域家族成员11(caspase recruitment domain family member 11,CARD11)表达与弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者远期生存的关系。方法选取2012年2月-2014年12月期间唐山市人民医院收治DLBCL患者80例作为本文研究对象,免疫组化法检测淋巴结病理组织PD1和CARD11,分析二者与临床病理参数的关系,采用单因素和多因素Cox回归模型,探讨PD1和CARD11与DLBCL患者远期生存的关系。结果80例DLBCL患者中CARD11阳性为52例,阳性率为65.00%;PD1阳性为44例,阳性率为55.00%;DLBCL患者五年生存率与年龄、Ann Arbor分期、临床疗效、结外累及数目、国际预后指数(IPI)评分、B症状、病理亚型、PD1表达和CARD11表达均有统计学差异(P<0.05);Cox回归分析结果显示Ann-Arbor分期(Ⅲ~Ⅳ)(OR=1.351,95%CI:1.081~1.690)、临床疗效(无效)(OR=1.972,95%CI:1.029~3.780)、年龄(>60岁)(OR=1.473,95%CI:1.182~1.834)、PD1阳性表达(OR=2.399,95%CI:1.892~3.041)和CARD11阳性表达(OR=2.010,95%CI:1.435~2.815)是DLB⁃CL患者5年生存率的独立危险因素(P<0.05)。结论PD1和CARD11均在DLBCL淋巴结病理组织中表达,且是远期生存的独立危险因素,可作为DLBCL患者预后评估有效指标。

C型凝集素结构域家族1成员B在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的 探讨C型凝集素结构域家族1成员B(CLEC1B)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其与HCC患者临床病理特征和预后的关系。方法 利用基因表达汇编(GEO)数据库检索HCC组织芯片数据(GSE49515、GSE115018)对癌组织及正常对照样本中的基因进行差异表达分析。在肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库筛选HCC转录组数据集,分析CLEC1B在HCC中的差异表达。采用基因集富集分析(GSEA)探寻HCC中与CLEC1B相关的信号通路。收集37例HCC患者的癌组织和相应的癌旁组织,采用实时荧光定量PCR法检测CLEC1B mRNA表达,蛋白质印迹分析法检测CLEC1B蛋白表达,并采用χ^2检验分析CLEC1B表达与患者临床病理特征的关系,通过Kaplan-Meier法和log-rank检验分析CLEC1B mRNA表达与HCC患者预后的关系;留取37例HCC患者和37名健康志愿者血液标本,用酶联免疫吸附试验检测血浆中CLEC1B水平,通过受试者工作特征(ROC)曲线评估CLEC1B对HCC的诊断价值。结果 CLEC1B在HCC癌组织中低表达,CLEC1B的低表达与HCC患者的肿瘤出血有关(P<0.01)。血浆中CLEC1B水平可作为诊断HCC的生物标志物,以62.44 ng/mL作为截断值时,CLEC1B的诊断效能最佳(ROC曲线下面积为0.966,灵敏度为92.7%,特异度为91.3%)。高表达CLEC1B的HCC患者总生存期长于低表达CLEC1B的患者,差异有统计学意义(P<0.01)。在HCC中,CLEC1B基因与ATR通路(ATM and Rad3-related pathway)、细胞周期通路、DNA修复通路、myc信号通路呈现出一致的表达差异趋势。结论 CLEC1B在HCC中低表达并与肿瘤出血有关,CLEC1B低表达的患者预后较差。

Expression and clinicopathologic significance of RASSF1A and WT1 in recurrent epithelial ovarian cancer

Objective To explore the expression and clinicopathological significance of RASSF1A and WT1 in recurrent epithelial ovarian cancer.Methods Sixty-three cases of patients with pathologically confirmed epithelial ovarian cancer were collected in the department of Gynaecology and Obsterics of the North China University of Technology from January 2013 to December 2018.The expression of RASSF1A and WT1 were measured by IHC staining.The relation of these proteins with ovarian cancer was also analyzed.Results Compared with non-recurrent group(46.4%),the positive expression rate of RASSF1A was 17.1%in recurrent group.The positive expression rate of WT1 was 74.3%and higher than the rate of 42.8%in non-recurrent group.The reducing expression of RASSF1A was related to clinical stage,differentiation,and with ascites(P<0.05).The increasing expression of WT1 was related to pathological type,clinical stage,histological differentiation,with ascites,and lymph node metastasis(P<0.05).Conclusion Low expression of RASSF1A and high expression of WT1 may be related to recurrent epithelial ovarian cancer.

普列克底物蛋白同源结构域家族A成员1蛋白在肿瘤中的研究进展

普列克底物蛋白同源结构域家族A成员1蛋白(PHLDA1)又称TDAG51,其异常表达与肿瘤的发生、发展和转移密切相关。本文对PHLDA1的基因结构、生物学特性及其在乳腺癌、胃癌、肝癌、黑色素瘤和骨肉瘤等多种恶性肿瘤中的研究进展进行综述,以期更全面综合地了解PHLDA1基因及其对肿瘤诊断治疗的临床意义。

Axonal growth inhibitors and their receptors in spinal cord injury:from biology to clinical translation

Axonal growth inhibitors are released during traumatic injuries to the adult mammalian central nervous system, including after spinal cord injury. These molecules accumulate at the injury site and form a highly inhibitory environment for axonal regeneration. Among these inhibitory molecules, myelinassociated inhibitors, including neurite outgrowth inhibitor A, oligodendrocyte myelin glycoprotein, myelin-associated glycoprotein, chondroitin sulfate proteoglycans and repulsive guidance molecule A are of particular importance. Due to their inhibitory nature, they represent exciting molecular targets to study axonal inhibition and regeneration after central injuries. These molecules are mainly produced by neurons, oligodendrocytes, and astrocytes within the scar and in its immediate vicinity. They exert their effects by binding to specific receptors, localized in the membranes of neurons. Receptors for these inhibitory cues include Nogo receptor 1, leucine-rich repeat, and Ig domain containing 1 and p75 neurotrophin receptor/tumor necrosis factor receptor superfamily member 19(that form a receptor complex that binds all myelin-associated inhibitors), and also paired immunoglobulin-like receptor B. Chondroitin sulfate proteoglycans and repulsive guidance molecule A bind to Nogo receptor 1, Nogo receptor 3, receptor protein tyrosine phosphatase σ and leucocyte common antigen related phosphatase, and neogenin, respectively. Once activated, these receptors initiate downstream signaling pathways, the most common amongst them being the Rho A/ROCK signaling pathway. These signaling cascades result in actin depolymerization, neurite outgrowth inhibition, and failure to regenerate after spinal cord injury. Currently, there are no approved pharmacological treatments to overcome spinal cord injuries other than physical rehabilitation and management of the array of symptoms brought on by spinal cord injuries. However, several novel therapies aiming to modulate these inhibitory proteins and/or their receptors are under investigation in ongoing clinical trials. Investigation has also been demonstrating that combinatorial therapies of growth inhibitors with other therapies, such as growth factors or stem-cell therapies, produce stronger results and their potential application in the clinics opens new venues in spinal cord injury treatment.

姜黄素调控miR-142-5p靶向PLEKHA3对肾上腺皮质癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的研究姜黄素调控miR-142-5p靶向Pleckstrin同源域蛋白A家族成员3(PLEKHA3)对肾上腺皮质癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法将肾上腺皮质癌细胞分为NC组(细胞正常培养)、NC+60μmol·L^(-1)姜黄素+miR-142-5p组(60μmol·L^(-1)姜黄素处理并转染miR-142-5p mimic)、NC+60μmol·L^(-1)姜黄素+miR-142-5p+PLEKHA3组(60μmol·L^(-1)姜黄素处理并转染miR-142-5p mimic+PLEKHA3)。通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法和Transwell实验检测细胞增殖和迁移能力,以蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白的表达水平。在动物水平上,建立人肾上腺皮质瘤SW-13细胞裸鼠移植瘤模型,分为对照组和15、30、45、60μmol·L^(-1)姜黄素给药组,验证姜黄素在体内的抗肾上腺皮质癌的作用。结果NC组、NC+60μmol·L^(-1)姜黄素组、NC+60μmol·L^(-1)+miR-142-5p组、NC+60μmol·L^(-1)+miR-142-5p+PLEKHA3组的细胞迁移数目分别为135.76±17.42、37.11±10.08、98.31±14.88和24.39±5.28,细胞凋亡率分别为(3.27±0.11)%、(68.80±4.64)%、(25.47±2.39)%和(78.29±5.47)%,B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)蛋白相对表达水平分别为1.00±0.13、0.59±0.11、0.97±0.09、0.31±0.06,Bcl-2相关X蛋白相对表达水平分别为1.00±0.08、1.38±0.11、0.69±0.05和1.93±0.18,NC+60μmol·L^(-1)姜黄素组与NC组相比,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。在动物水平上,对照组和15、30、45、60μmol·L^(-1)姜黄素给药组的裸鼠移植瘤体积分别为(1653.02±435.93)、(1148.77±327.18)、(1054.21±286.06)、(996.89±257.62)和(670.64±157.32)mm^(3),移植瘤质量分别为(1.00±0.17)、(0.82±0.09)、(0.76±0.12)、(0.68±0.13)和(0.44±0.11)g,15、30、45、60μmol·L^(-1)姜黄素给药组与对照组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论姜黄素在体内外均发挥肾上腺皮质癌作用,且可能通过调控miR-142-5p/PLEKHA3信号通路,抑制肾上腺皮质癌细胞的增殖、迁移能力,并促进其凋亡,为肾上腺皮质癌的治疗提供了新的可能靶点。

PRAF2在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌细胞生物学功能的影响

目的:研究异戊二烯化Rab受体1结构域家族2(PRAF2)在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法:使用RT-qPCr 、Western blot检测37例新鲜冰冻乳腺癌组织及癌旁组织中PRAF2的mRNA和蛋白表达水平。在人乳腺癌株MCF-7细胞中转染小干扰RNA(siRNA),观察对MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭的影响。结果:乳腺癌组织中PRAF2基因表达水平高于癌旁组织(P<0.001);乳腺癌组织中PRAF2蛋白相对表达强度高于癌旁组织(P<0.001);PRAF2基因表达的下调抑制了乳腺癌细胞的增殖能力(P<0.05);PRAF2基因表达的下调抑制了乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力(P<0.001)。结论:乳腺癌组织中PRAF2呈高表达,PRAF2是一种促癌基因,能够促进乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭。

ARID3A调控AKR1C3促进结肠癌细胞对5-FU敏感性的机制

目的 探讨AT富交互域3A (ARID3A)对结肠癌细胞化疗敏感性的影响及其作用机制。方法 在人结肠癌细胞系HCT116和SW1116中构建ARID3A过表达或敲低细胞系,设置HCT116-PLVX/SW1116-PLVX过表达对照组、HCT116-ARID3A/SW1116-ARID3A过表达组、HCT116-ARID3A-sh1/SW1116-ARID3A-sh1敲减组、HCT116-ARID3A-sh2/SW1116-ARID3A-sh2敲减组和HCT116-SH/SW1116-SH敲减对照组。应用MTT实验检测5-FU作用于各组后的抑制效率。蛋白质谱检测筛选下游调控基因醛酮还原酶家族1成员C3(AKR1C3),采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测ARID3A过表达或敲减对AKR1C3表达的影响。采用双荧光素酶报告基因和染色质免疫沉淀(ChIP)实验分析ARID3A对AKR1C3的调控作用。进一步构建AKR1C3过表达或敲低细胞系,再次应用MTT实验检测其对5-FU的敏感性。结果 与对照组相比,HCT116-ARID3A过表达组(F=151.300,P<0.001;F=11.980,P=0.003;F=5.250,P=0.005)和SW1116-ARID3A过表达组(F=404.902,P<0.001;F=215.901,P<0.001;F=3.185,P=0.023)细胞受5-FU的抑制效率增加,药物和ARID3A表达水平的作用效应存在交互作用。而敲减ARID3A后,相较于对照组细胞表现出了对5-FU敏感性的降低,均P<0.05。进一步筛选出ARID3A的下游靶基因AKR1C3,qRT-PCR实验结果显示,在过表达ARID3A的HCT116和SW1116细胞中,AKR1C3的mRNA水平均低于相应对照组细胞(HCT116:0.395±0.054 vs 1.000±0.162,t=6.147,P=0.004;SW1116:0.250±0.017 vs 1.000±0.332,t=3.911,P=0.017);而在ARID3A敲减细胞中则相反,即AKR1C3的mRNA水平高于相应对照组细胞(HCT116:2.886±0.421 vs 1.000±0.080,t=7.621,P=0.002;SW1116:2.990±0.851 vs 1.000±0.148,t=3.909,P=0.016)。在过表达ARID3A的HCT116和SW1116细胞中,AKR1C3的蛋白水平均低于相应对照组细胞(HCT116:0.780±0.010 vs 1.000±0.012,t=19.630,P=0.004;SW1116:0.130±0.012 vs 0.240±0.029,t=4.880,P=0.032)。而在ARID3A敲减细胞中则相反,即AKR1C3的蛋白水平均高于相应对照组细胞(HCT116:1.630±0.040 vs 1.030±0.026,t=18.140,P=0.005;SW1116:1.070±0.153 vs 0.450±0.033,t=5.590,P=0.031)。并进一步明确ARID3A与AKR1C3结合并发挥其对AKR1C3的转录抑制作用。在HCT116和SW1116细胞中,过表达AKR1C3后,相较于对照组细胞均表现出了对5-FU敏感性的减弱,药物和AKR1C3表达水平的作用效应存在交互作用,均P<0.05。而敲减AKR1C3后,相较于对照组细胞表现出了对5-FU敏感性的增强,均P<0.05。结论 ARID3A通过抑制结肠癌细胞中的耐药相关基因AKR1C3促进结肠癌细胞对化疗药物5-FU的敏感性。

子宫内膜癌组织PRDM1、KIF23蛋白表达与临床病理特征及预后的关系研究

目的:探讨子宫内膜癌组织PR结构域蛋白1(PRDM1)、驱动蛋白家族成员23(KIF23)蛋白表达与临床病理特征及预后的关系。方法:选择2012年4月至2015年8月期间于我院行手术治疗的80例子宫内膜癌患者作为研究对象。检测子宫内膜癌组织以及癌旁组织中PRDM1、KIF23蛋白表达。分析PRDM1、KIF23蛋白表达与临床病理特征的关系。分析不同PRDM1、KIF23蛋白表达患者5年总生存率的差异。分析子宫内膜癌患者预后的影响因素。结果:与癌旁组织相比,子宫内膜癌组织中PRDM1、KIF23蛋白表达阳性率上调(P<0.05)。有淋巴结转移以及FIGO分期Ⅲ期患者的PRDM1、KIF23蛋白表达阳性率明显高于无淋巴结转移以及FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期患者,组间差异显著(P<0.05)。PRDM1、KIF23蛋白阳性患者的5年总生存率明显低于PRDM1、KIF23蛋白阴性患者,组间差异显著(P<0.05)。Cox比例风险回归分析结果显示:PRDM1、KIF23蛋白表达、淋巴结转移、FIGO分期是子宫内膜癌患者预后的影响因素(P<0.05)。结论:在子宫内膜癌当中PRDM1、KIF23蛋白表达阳性率升高,有淋巴结转移、FIGO分期较高的患者PRDM1、KIF23表达阳性率上调,PRDM1、KIF23表达阳性患者5年总生存率下降。

脓毒症急性肺损伤患者RhoA/ROCK1和NF-κB/NLRP3信号通路及其下游信号分子的变化

目的 分析Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho激酶1(ROCK1)、核因子κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)信号通路及其下游信号分子在脓毒症患者急性肺损伤(ALI)中的变化。方法 回顾性分析海口市第四人民医院2018年1月-2020年12月122例脓毒症患者临床资料,其中41例并发ALI(ALI组),81例无ALI(非ALI组),并纳入32名健康体检者作为对照组。脓毒症患者均于入院24 h内收集外周静脉血标本,对照组则收集体检当日外周静脉血。比较3组外周血单个核细胞(PBMCs)NF-κB、NLRP3信使核糖核酸(mRNA)表达水平,并记录NF-κB/NLRP3信号通路上游基因(RhoA、ROCK1)、下游基因[半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(caspase-1)]mRNA表达水平及下游炎症因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18];根据肺损伤预测评分(LIPS)将41例并发ALI的脓毒症患者分为LIPS≥7分组,LIPS<7分组,比较两组上述基因mRNA、炎症因子水平,并评估脓毒症并发ALI患者LIPS评分与上述基因mRNA、炎症因子表达水平的相关性。结果 ALI组LIPS评分高于非ALI组(P<0.05)。ALI组与非ALI组PBMCs NF-κB、NLRP3、RhoA、ROCK1、caspase-1 mRNA相对表达水平及血清IL-1β、IL-18高于对照组(P<0.05),ALI组高于非ALI组(P<0.05)。脓毒症并发ALI患者中,LIPS≥7分组PBMCs NF-κB、NLRP3、RhoA、ROCK1、caspase-1 mRNA相对表达水平及血清IL-1β、IL-18高于LIPS<7分组(P<0.05);Pearson相关性分析显示,LIPS评分与上述各基因mRNA及炎症因子均呈正相关(r=0.389、0.472、0.511、0.539、0.518、0.469、0.457,P均<0.05)。结论 Rho/ROCK、NF-κB/NLRP3信号通路及其下游信号分子可能共同参与了脓毒症ALI的发生发展,临床可针对该发生机制探寻治疗新方向。

Comparative transcriptomic analysis of vascular endothelial cells after hypoxia/re-oxygenation induction based on microarray technology

Objective: To provide comprehensive data to understand mechanisms of vascular endothelial cell(VEC) response to hypoxia/re-oxygenation. Methods: Human umbilical vein endothelial cells(HUVECs) were employed to construct hypoxia/re-oxygenation-induced VEC transcriptome profiling. Cells incubated under 5% O2, 5% CO2, and 90% N2 for 3 h followed by 95% air and 5% CO2 for 1 h were used in the hypoxia/re-oxygenation group. Those incubated only under 95% air and 5% CO2 were used in the normoxia control group. Results: By using a well-established microarray chip consisting of 58 339 probes, the study identified 372 differentially expressed genes. While part of the genes are known to be VEC hypoxia/re-oxygenation-related, serving as a good control, a large number of genes related to VEC hypoxia/re-oxygenation were identified for the first time. Through bioinformatic analysis of these genes, we identified that multiple pathways were involved in the reaction. Subsequently, we applied real-time polymerase chain reaction(PCR) and western blot techniques to validate the microarray data. It was found that the expression of apoptosis-related proteins, like pleckstrin homology-like domain family A member 1(PHLDA1), was also consistently up-regulated in the hypoxia/re-oxygenation group. STRING analysis found that significantly differentially expressed genes SLC38A3, SLC5A5, Lnc-SLC36 A4-1, and Lnc-PLEKHJ1-1 may have physical or/and functional protein–protein interactions with PHLDA1. Conclusions: The data from this study have built a foundation to develop many hypotheses to further explore the hypoxia/re-oxygenation mechanisms, an area with great clinical significance for multiple diseases.

糖尿病大鼠心肌缺血再灌注时Rev-erbα与NLRP3炎症小体的关系

目的评价糖尿病大鼠心肌缺血再灌注时Nr1D1核受体亚家族1,组D,成员1(Rev-erbα)与NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体的关系。方法SPF级健康成年雄性SD大鼠,体重210~240 g,采用腹腔注射1%链脲佐菌素60 mg/kg制备1型糖尿病模型。取非糖尿病大鼠18只,采用随机数字表法分为2组:非糖尿病假手术组(NS组,n=6)和非糖尿病心肌缺血再灌注组(NIR组,n=12)。取糖尿病大鼠30只,采用随机数字表法分为3组:糖尿病假手术组(DS组,n=6)、糖尿病心肌缺血再灌注组(DIR组,n=12)和糖尿病心肌缺血再灌注+Rev-erbα抑制剂SR8278组(DIR+SR组,n=12)。采用结扎左冠脉前降支30 min后再灌注120 min的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型。DIR+SR组于缺血前1 h时经股静脉注射SR82782 mg/kg。再灌注结束时经采用ELISA法检测血清CK-MB、LDH和cTnI浓度,TTC法测心肌梗死面积百分比,HE染色法观察心肌组织病理学结果,Western blot法检测心肌组织Rev-erbα、NLRP3和IL-1β的表达水平。结果与假手术大鼠比较,心肌缺血再灌注大鼠血清CK-MB、LDH和cTnI浓度升高,心肌组织Rev-erbα、NLRP3和IL-1β表达上调(P<0.05),心肌组织病理学损伤明显;与NIR组比较,DIR组心肌梗死面积百分比、血清CK-MB、LDH和cTnI浓度升高,心肌组织Rev-erbα、NLRP3和IL-1β表达上调(P<0.05),心肌组织病理学损伤加重;与DIR组比较,DIR+SR组心肌梗死面积百分比、血清CK-MB、LDH和cTnI水平降低,心肌组织Rev-erbα、NLRP3和IL-1β表达下调(P<0.05),心肌组织病理学损伤减轻。结论Rev-erbα可促进NLRP3炎症小体活化,参与糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的病理生理机制。

微小RNA-9对乳腺癌细胞MCF-7增殖与转移能力的影响及其机制

目的 检测微小RNA（miRNA,miR）-9在乳腺癌组织中的表达,分析其在乳腺癌发生发展中所发挥的功能;在体外通过功能获得或失去实验观察miR-9对乳腺癌细胞生长及转移能力的影响,并探讨其相关的调控机制.方法 采用实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测40例乳腺癌组织及其配对的周边非肿瘤组织中miR-9的表达量,分析其表达与肿瘤临床病理参数之间的关系.采用细胞增殖实验（5-乙炔基-2＇脱氧尿嘧啶核苷,EdU法）、侵袭及迁移实验（Transwell法）及Western blot实验研究miR-9对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响及相关的调节机制.结果 miR-9在乳腺癌组织及乳腺癌细胞株MCF-7中的相对表达量分别为0.027±0.002与0.032±0.004,显著低于癌旁的非肿瘤组织及正常的乳腺上皮细胞株MCF-10-2A（分别为0.059±0.044与0.068±0.016;P＜0.01）;此外,miR-9的表达量与乳腺癌患者肿瘤的大小、淋巴转移及肿瘤分期相关.体外功能学实验结果表明：与miR-ctrl组比较,凋亡、增殖、侵袭及迁移率分别为（5.2±0.6）％、（10.8±0.9）％、（54.3±6.7）％、（127.5±9.8）％,过表达miR-9可促进MCF-7细胞的凋亡[（10.5±2.3）％,P＜0.05],抑制MCF-7细胞的增殖[（5.7±1.9）％,P＜0.05]、侵袭[（35.3±14.8）％,P＜0.05]及迁移能力[（90.4±6.9）％,P＜0.05];相反,当抑制miR-9的表达时,可明显抑制MCF-7细胞的凋亡[（1.4±1.1）％,P＜0.05],但却显著促进其增殖[（14.5±2.3）％,P＜0.05]、侵袭（67.1±5.5,P＜0.05）及迁移能力（145.4±8.6,P＜0.05）.Western blot结果进一步表明,miR-9可通过转录后调节La蛋白域家族成员1（LARP1）的表达而在细胞中发挥上述生物学效应.结论 在体外过表达miR-9可抑制肿瘤细胞的增殖及转移能力.