ISOLATION AND PURIFICATION OF ALKALOIDS FROM PLUMULA NELUMBINIS BY DOUBLE-COLUMN ADSORPTION CHROMOTOGRAPHY

The performance of adsorption and separation for liensinine, isoliensinine and neferine was studied by double-column adsorption chromatography using macroporous adsorption and cation exchange resins. The alkaloid extract with 49.2% total contents by mass representing 10.6% liensinine, 10.6% isoliensinine and 28.0% neferine respectively was prepared by D72 cation exchange resins, in which most of the impurities were water-soluble alkaloids. Furthermore,the alkaloid extract with 82.6% total contents by mass containing 33.1%, 15.0% and 34.5% of the three adsorbates respectively was prepared by double-column adsorption chromatography using AKS-W macroporous adsorption and D72 cation exchange resins. As a result, the content of single and total alkaloids has been greatly increased by the double-column adsorption chromatography.

莲子心中具有心肌细胞保护活性的化学成分研究

为了寻找莲子心(Nelumbinis Plumula)具有心肌细胞保护活性的化学成分,本研究采用多种柱色谱技术分离和纯化莲子心的80%乙醇提取物,运用^(1)H NMR、^(13)C NMR等波谱技术和文献数据比对鉴定化合物结构,并对化合物进行心肌细胞保护活性筛选。从莲子心80%乙醇提取物分离纯化得到14个化合物,分别鉴定为柚皮苷(1)、山柰酚-3-O-β-D-芸香糖苷(2)、芹菜素-6-C-β-L-阿拉伯糖-8-C-β-D-葡萄糖苷(3)、木犀草素-7-O-β-D-新橙皮苷(4)、木犀草素-3′-O-β-D-葡萄糖苷(5)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(6)、橙皮苷(7)、异夏佛塔苷(8)、松脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷(9)、对香豆酸-4-O-β-D-葡萄糖苷(10)、对香豆酸(11)、苯乙基6-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-β-D-葡萄糖苷(12)、淫羊藿次苷D1(13)、淫羊藿次苷F2(14)。化合物1~6、9、11~14均为首次从莲子心中分离得到。黄酮类化合物1~8对缺氧/复氧损伤下的小鼠HL-1心肌细胞具有明显的保护作用,对小鼠HL-1-STAT3-Luc细胞中STAT3的表达也具有促进作用,且均具有剂量依赖性。

莲子心米曲霉发酵物对特应性皮炎缓解效果的研究

该研究旨在探究莲子心经米曲霉发酵后其产物在细胞层面对特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)的潜在治疗作用。通过HPLC监测莲子心米曲霉发酵过程,并采用液相色谱-飞行时间-质谱联用技术鉴定了其特征转化产物结构。在肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)/干扰素-γ(interferon-gamma,IFN-γ)双炎症因子诱导的AD细胞模型中,对米曲霉莲子心发酵前后的不同组分,进行了白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、巨噬细胞来源趋化因子(macrophage-derived chemokine,MDC)、胸腺激活调节趋化因子(thymus and activation-regulated chemokine,TARC)和氧化应激(谷胱甘肽、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和丙二醛)水平的考察。结果表明,通过米曲霉发酵能有效分解莲子心中的异莲心碱及甲基莲心碱,生成小分子苄基异喹啉类生物碱衍生物。在细胞层面的评价结果表明,相比于发酵前,莲子心发酵产物不仅可以更好的缓解模型中HaCaT细胞的氧化应激反应,而且对MDC、TARC和IL-6的分泌具有更强的负调控作用。综上,米曲霉可对莲子心中的特征性生物碱进行转化,且产物在TNF-α/IFN-γ双炎症因子诱导的AD细胞模型中表现出更强的抗炎效果。该研究为后续开发发酵来源的功能性食品、化妆品以及药品提供理论依据和新思路。

不同提取方法的莲子心多糖结构与理化性质比较

该研究考察了热水浸提(HWE)、超声辅助提取(UAE)、酶辅助提取(EAE)和微波辅助提取(MAE)四种不同提取方法对莲子心多糖理化性质的影响。结果表明,相比传统热水浸提,其他三种提取方法均能够提高莲子心多糖的得率、纯度、糖醛酸含量,其中微波辅助提取法的多糖得率、多糖纯度和糖醛酸含量最高,分别为4.37%、67.85%、7.10%。三种辅助提取方法得到的莲子心多糖的分子量都发生不同程度的降解。超声辅助和酶辅助提取得到的莲子心多糖中半乳糖的含量分别为16.51%、9.66%,高于传统热水浸提得到的莲子心多糖中4.93%半乳糖含量,但并没有检测出木糖;微波辅助提取法与热水浸提法单糖组成种类相同,半乳糖醛酸的含量为7.59%,高于热水浸提法。微波辅助提取方法得到的莲子心多糖吸热峰ΔH值、交叉频率值最高,分别为为54.89 J/g、50.23 rad/s,具有更高的表观粘度。可见,微波辅助提取方法较适于莲子心多糖的提取。

莲子心总黄酮多元醇提取工艺筛选及其性能研究

莲子心作为一种药食同源的植物,极具开发潜力。该研究通过单因素实验和响应面Box-Behnken设计实验筛选并优化莲子心总黄酮的多元醇超声辅助提取工艺,对该工艺获得的莲子心提取物进行了安全性及体外抗氧化、抑菌和抗敏活性的测定。结果表明,在提取溶剂为1,2-己二醇,溶剂体积分数87%,料液比3.6∶100(g∶mL),提取时间39 min的条件下,莲子心总黄酮得率为1.80%±0.08%,且其质量浓度在1.2 g/L以下时无刺激性,对DPPH和ABTS自由基的半数抑制质量浓度分别为0.76和0.69 g/L,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的最小抑菌质量浓度分别为0.56,1.12和0.14 g/L;且其对透明质酸酶的半数抑制质量浓度为0.35 g/L。该研究提供了一种简单、安全、高效的莲子心总黄酮提取工艺,在保证较高总黄酮得率的基础上兼顾其提取物的生物活性,为莲子心资源的开发提供了理论依据。

莲子心中黄酮苷类化合物分离鉴定及其抗氧化活性研究

研究莲子心(plumula nelumbinis)中黄酮苷类大极性成分及其抗氧化活性。选择80%乙醇进行初步提取分离,得到莲子心粗提物。先后选用D001阳离子交换树脂和AB-8大孔树脂对粗提物进行柱层析得到莲子心总黄酮部分。进一步选择硅胶柱、Sephadex LH-20柱、ODS反向柱、制备型HPLC等对莲子心总黄酮部分进行分离纯化,并利用波谱解析和理化性质对黄酮苷类化合物的结构进行鉴定,最终确定了11个化合物为:异牡荆素(isovitexin,1)、牡荆素(vitexin,2)、异夏佛托苷(isoshaftoside,3)、夏佛托苷(shaftoside,4)、金丝桃苷(hypericin,5)、芦丁(rutin,6)、芹菜素-6(apigenin-6),8-二吡喃葡萄糖苷(8-glucopyranoside,7)、4-羟基苯乙醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(icariside D2,8)、忍冬苦苷(lonicerin,9)、荭草苷(orientin,10)、异荭草苷(isoorientin,11);并对7种黄酮苷类化合物进行了DPPH自由基清除活性测试。化合物8为首次从莲属植物中分离得到;活性测试结果表明,化合物5、6的抗氧化活性较好,当浓度为120μmol·L-1时,其DPPH自由基清除率达到了和Vc相当的效果。

莲子心中黄酮类物质的提取和测定

采用碱溶酸析法和微波间歇加热提取法,成功地提取了莲子心中黄酮类物质。经HCl-锌粉反应和红外光谱鉴定,提取物为黄酮类物质。另外,利用分光光度法,以芦丁标准品为标准对莲子心中的总黄酮进行了测定,其质量分数分别为4.135mg/g和6.266mg/g。同时讨论了时间对测定方法的影响,结果表明,显色时间在4min内稳定。

超声波辅助乙醇提取莲子心总黄酮及其抗氧化活性的研究

通过超声波辅助乙醇提取莲子心总黄酮,用单因素及正交实验选择最佳提取工艺条件,研究了黄酮提取物对羟基自由基的清除效果及抗油脂氧化作用。结果表明,当用80%乙醇按料液比1:25(g:mL)在超声功率250W及超声温度50℃的水浴中提取30min后,莲子心黄酮的提取率为2.23%。该提取物具有清除羟基自由基及抗油脂氧化作用,对植物油的抗氧化能力强于对动物油的抗氧化能力,表明莲子心黄酮提取物可作为天然抗氧化剂使用。

莲子心中酚性生物碱3种主要成分定量分析及其特征图谱研究

目的 :建立同时测定莲子心中酚性生物碱 :莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱含量的RP -HPLC法以及酚性生物碱的特征图谱。方法 :采用RP -HPLC法 ,流动相为乙腈 水 三乙胺 (2 5∶75∶0 .1 ,用磷酸调 pH3.3) ,紫外检测波长 2 82nm ,流速0 .8mL·min-1 ,进样量 2 0 μL。结果 :莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱线性方程显示线性关系良好。特征图谱研究确定了酚性生物碱 1 6个共有峰。结论 :本方法简便、准确 ,重现性好 ,专属性强 ,可为莲子心中生物碱类物质标准提取物质量控制提供参考。

莲子心总生物碱滴丸的制备工艺及含量测定

目的:研究影响莲子心总生物碱滴丸制备工艺的各种因素,确立最佳制备工艺和含量测定方法。方法:以滴丸的溶散时限、圆整度及丸重为指标,采用正交设计试验法对影响因素进行考察。同时采用HPLC测定滴丸中莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱的含量。结果:最佳工艺为总生物碱提取物与含75%PEG4000复合基质比例为1∶5,药液温度85℃,冷却液为二甲基硅油,冷却温度10℃,冷却柱长为100 cm,滴距4 cm,滴速30滴/m in;滴丸中生物碱平均质量分数:莲心碱为24.6 mg.g-1、异莲心碱为24.7 mg.g-1、甲基莲心碱为79.4 mg.g-1,总生物碱为128.7 mg.g-1。结论:制得的滴丸溶散时限、圆整度及丸重均符合质量要求,测定方法简便易行。

莲子心及Nef对实验性糖尿病及肥胖大鼠模型的影响

目的 观察莲子心及甲基莲心碱 (neferine ,Nef)对链脲佐菌素 (streptozotocin ,STZ)和高糖高脂制作的大鼠糖尿病及肥胖模型的影响 ,并与二甲双胍 (metformin ,Met)作对照。方法 STZ(30mg/kg)一次性ip后给予高糖高脂饮食 8周造模 ,莲子心乙醇提取物 5 0 0mg(生药 ) /kg、Nef 10mg/kg灌胃给药 1个月。结果 Nef用药后空腹血糖 (FBG)显著低于给药前及模型组 (P <0 .0 1) ,与Met组相当 ,莲子心空腹血糖 (FBG)低于模型组 (P <0 .0 5 ) ;莲子心的总胆固醇 (TCHO)、甘油三脂(TG)和低密度脂蛋白 (LDL -C)显著低于模型组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ,而Nef的TCHO、TG显著低于模型组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。结论 提示莲子心及Nef对实验性糖尿病及肥胖大鼠有一定的降低血糖及调节血脂作用。

薄层扫描法测定莲子心中甲基莲心碱及莲心碱含量

目的 :建立测定莲子心中甲基莲心碱及莲心碱含量的方法。方法 :超声提取莲子心中有效成分 ,用薄层扫描法测定其主要成分含量。结果 :甲基莲心碱及莲心碱回收率分别为97 91 %、99 28 % ;相关系数分别为0 996和0 999。结论 :方法简单可靠、重现性好 ,具有良好的线性关系 ,可用于莲子心或其它复方制剂中甲基莲心碱及莲心碱的定量分析。

高效液相色谱法同时测定莲子心中四种异喹啉生物碱的含量

目的:建立同时测定莲子心中四种异喹啉生物碱-莲心季铵碱、莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱含量的离子对反相高效液相色谱(RP-HPLC)法.方法:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,色谱柱:HibarTR,5μm,250 mm×4.6 mm;流动相:乙腈-水-冰醋酸(55:45:1,每1000 ml中加入4 g十二烷基磺酸钠);流速:1.2 ml/min;检测波长:282 nm;柱温:30℃.结果:莲心季铵碱在0.94～2.82μg,莲心碱在1.14～3.42μg,异莲心碱在0.7～2.1μg,甲基莲心碱在0.96～2.88μg范围内均呈良好线性关系;并均具有较好的加样回收率(＞95%).结论:该分析方法快速、准确、灵敏度高,重复性好,可用于同时对药材莲子心中四种异喹啉生物碱的含量测定.

均匀设计法优选莲子心的半仿生提取工艺

目的:优选半仿生法提取莲子心中总生物碱的工艺条件。方法:采用均匀设计法优选半仿生提取工艺;以总生物碱含量、干 浸膏得率为指标,考察药材的提取时间、溶媒量、pH值等因素对提取工艺的影响。结果:优选工艺为莲子心加8倍量水提取3次,3 煎用水的pH值分别为5．0、6．0、8．0,煎煮总时间为4h。结论:本法为莲子心的提取提供了理论依据。

莲心碱及莲心碱高氯酸盐初步稳定性考察及莲子心不同部位中莲心碱的含量测定

目的 考察了莲心碱及莲心碱高氯酸盐的稳定性 ;并测定了莲子心不同部位 (幼叶和胚根 )中莲心碱的含量。方法 采用反相离子对 HPL C法 ,通过两种不同流动相 ,确证了莲心碱及莲心碱高氯酸盐的纯度并考察了莲心碱及莲心碱高氯酸盐的稳定性。采用甲醇 -水 -冰醋酸 -辛烷磺酸钠 -乙酸钠 (5 5∶ 4 5∶ 0 .6∶ 10 m mol/ L∶ 5mm ol/ L)为流动相 ,以莲心碱高氯酸盐为对照品测定了莲子心不同部位 (幼叶和胚根 )中莲心碱的含量。结果 莲心碱在各种条件下均不稳定 ,对光照尤其敏感。而莲心碱高氯酸盐除对光照稍显不稳定外 ,在其他各种条件下均较稳定。莲子心幼叶中莲心碱的含量约为胚根中莲心碱的含量的 4～ 5倍。结论 在含量测定时应采用莲心碱高氯酸盐作对照品 ;

正交实验法优选莲子心生物碱的提取工艺

目的优选莲子心生物碱的最佳提取工艺。方法以紫外分光光度法测定生物碱的含量,采用正交实验法对莲子心的提取工艺进行优选。结果最佳提取工艺为:药材粉碎成粗粉,用10倍量的甲醇进行回流提取。结论最佳提取工艺可以有效地提取莲子心中的生物碱,工艺操作简单、合理。

2种HPLC检测器测定莲子心中3种酚性生物碱含量的比较

目的建立反相HPLC-荧光检测(fluorescence detector,FD)法,测定中药莲子心中莲心碱(liensinine,Lien)、异莲心碱(isoliensinine,Iso)和甲基莲心碱(neferine,Nef)等3种酚性生物碱的含量,并与HPLC-紫外检测器(ultraviolet-vis-ible detector,UVD)的测定结果进行比较。方法采用Phecda C18色谱柱(5μm,4.6 mm×250 mm),乙腈-0.015 mol/L十二烷基磺酸钠-冰醋酸(55∶45∶1)为流动相;流速:1.0 mL/min;柱温:30℃。FD的激发波长为280 nm,发射波长为319 nm;UVD的检测波长为282 nm。结果用FD检测莲子心中3种酚性生物碱的回归方程和相关系数(r)分别为:ALien=134 994CLien+970 790,rLien=0.999 0;AIso=330 030CIso+647 307,rIso=0.999 3;ANef=165 207CNef+807 442,rNef=0.999 5。三者均具有良好的加样回收率(>95%),且所得莲子心中Lien、Iso和Nef的含量与UVD测得值基本一致。结论 HPLC-FD法测定莲子心中莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱含量方法可靠、结果准确,与HPLC-UVD法一样适用于莲子心药材中酚性生物碱的定量控制。

7种中草药粗提液对肺成纤维细胞增殖抑制作用的比较研究

目的观察7种中草药粗提液对肺成纤维细胞增殖的作用,为中药治疗肺纤维化筛选苗头药物。方法根据肺纤维化的病理机制,确定赤芍、毛冬青、莲子心、瑞香狼毒、猫眼草、千金子、蒲公英粗提物为备筛药物,利用大鼠原代培养肺成纤维细胞,加入不同浓度的提取液,采用细胞形态学观察、MTT比色法,比较其对细胞增殖的抑制作用,并以乳酸脱氢酶(LDH)的测定来观察其细胞毒性。结果莲子心、狼毒、千金子对大鼠肺成纤维细胞有显著的抑制作用,其中效果最佳、细胞毒作用最小的为莲子心提取物。结论莲子心是一种有希望的治疗肺纤维化的苗头药物。

莲子心提取物毛细管电泳指纹图谱研究

目的建立中药材莲子心提取物毛细管电泳（HPCE）指纹图谱。方法制备莲心碱对照品溶液和10批莲子心提取物供试品溶液。采用毛细管区带电泳模式压力进样，分析10批莲子心提取物供试品所有的峰数、峰值和峰位等参数以及色谱图，建立HPCE指纹图谱，并利用“中药指纹图谱相似度评价系统（2004A）”软件分析其指纹图谱的相似度。结果 选定15个共有峰作为构成莲子心提取物指纹图谱稳定的特征峰，建立HPCE指纹图谱。相似度评价分析结果表明10批莲子心提取物HPCE指纹图谱相似度均在0．900～1．000之间，表明其指纹图谱整体面貌基本一致。结论 建立的莲子心提取物HPCE指纹图谱稳定、可靠，可作为莲子心提取物的特征指纹图谱，为莲子心提取物的定性鉴别及内在质量评价提供了新的参考依据。

大孔吸附树脂对莲子心中有效成分的分离纯化研究

目的研究大孔吸附树脂吸附分离莲子心中莲心碱、异莲心碱及甲基莲心碱的工艺条件及参数。方法考察了AKS-W、AB-8和H214树脂对莲心碱、异莲心碱及甲基莲心碱的静态及动态吸附性能,并采用HPLC定量分析莲心碱、异莲心碱及甲基莲心碱。结果AKS-W树脂对莲子心中有效成分有较好的吸附分离效果,提取物中莲心碱、异莲心碱及甲基莲心碱的质量分数分别提高到10.2%、6.7%和11.9%。结论大孔型非极性吸附树脂AKS-W对莲子心中有效成分是一种较为理想的分离介质。