肺癌患者血清Pokemon、AGR2表达水平变化及其临床意义

目的探讨肺癌患者血清Pokemon、AGR2表达水平变化及其临床意义。方法收集NSCLC患者85例纳入NSCLC组,同时期收集体检正常85例纳入对照组。对比两组血清Pokemon、AGR2表达水平,及影响NSCLC患者血清Pokemon、AGR2表达因素,采用受试者工作特征(Receiver Operating Characteristic,ROC)曲线预测最佳临界值,对比不同血清Pokemon、AGR2表达患者疗效,并分析影响患者预后独立危险因素。结果NSCLC组血清Pokemon[(189.68±91.13)ng/ml]、AGR2[(15.62±5.22)ng/ml]水平均显著高于对照组(t=16.792,P<0.001;t=20.439,P<0.001)。肿瘤直径、TNM分期均为影响NSCLC预后的因素,P<0.05,性别、年龄、吸烟史、组织学类型、分化程度及淋巴结转移并不是影响NSCLC患者预后的影响因素,P>0.05。肿瘤直径≥5 cm、TNM分期Ⅳ期均为影响血清Pokemon、AGR2水平的因素。血清Pokemon水平AUC=0.832(95%CI:0.674~0.988),血清AGR2水平AUC=0.814(95%CI:0.651~0.954)。Pokemon<135.08 ng/ml组和AGR2<15.52 ng/ml组患者治疗总有效率均显著高于Pokemon≥135.08 ng/ml组、AGR2≥15.52 ng/ml组(χ^(2)=6.079,P=0.014;χ^(2)=7.774,P=0.005)。淋巴结转移、Pokemon≥135.08 ng/ml、AGR2≥15.52 ng/ml均是影响NSCLC患者生存的独立危险因素,P<0.05。结论晚期NSCLC患者血清Pokemon、AGR2表达水平上升,均可作为化疗疗效及预后评估指标。

Pokemon蛋白在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨乳腺癌中Pokemon(POK erythroid ontogenic factor)蛋白的表达及其意义。方法采用免疫组织化学SP法检测52例乳腺癌、20例癌旁正常组织、20例乳腺增生组织Poke-mon蛋白的表达,并对其与临床病理特征的关系进行分析。结果①Pokemon蛋白表达于乳腺癌细胞核和细胞质。乳腺癌细胞核Pokemon蛋白高表达率为71.2%(37/52),显著高于癌旁正常乳腺组织40%(8/20)、乳腺增生组织25%(5/20),P<0.05。②乳腺癌组织中有腋窝淋巴结转移组细胞核Pokemon蛋白高表达率(82.8%)显著高于无腋窝淋巴结转移组(56.5%),P<0.05。结论Pokemon蛋白高表达可能在乳腺癌发生中起重要作用且与腋窝淋巴结转移相关。

胃癌组织Pokemon和p14^(ARF)表达率及其在临床生物学行为中的意义

目的探讨胃癌组织中Pokemon、p14^(ARF)蛋白表达率及其与临床生物学行为的关系。方法取手术切除胃癌组织标本50例,正常胃黏膜组织标本20例,用免疫组织化学方法检测胃癌组织、正常胃黏膜组织Pokemon和p14^(ARF)蛋白的表达,并且分析二者表达情况与胃癌患者性别、年龄、肿瘤部位、瘤体大小、大体分型、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、临床分期等临床生物学特征的关系。结果①在胃癌组织和正常胃黏膜组织中Pokemon和p14^(ARF)均表达于细胞核,在阳性染色的细胞核中呈现棕黄色颗粒。Pokemon蛋白表达率在胃癌组织中为78%,在正常胃黏膜组织中为45%,二者差异有统计学意义(P<0.05)。p14^(ARF)蛋白表达率在胃癌组织中为42%,在正常胃黏膜组织为90%,二者差异有统计学意义(P<0.05)。②胃癌组织中Pokemon蛋白表达率在有淋巴结转移组为87.5%,在无淋巴结转移组为40%,二者差异有统计学意义(P<0.05)。随着肿瘤增大、浸润程度加深及临床分期升高,胃癌组织中Pokemon蛋白表达有升高趋势。③胃癌组织中p14^(ARF)蛋白表达率在有淋巴结转移组为37.5%,在无淋巴结转移组为80%,二者差异有统计学意义(P<0.05)。随着肿瘤分化程度的降低、浸润程度的加深及临床分期的升高,胃癌组织中p14^(ARF)蛋白表达有降低的趋势。④胃癌组织中,Pokemon与p14^(ARF)蛋白表达呈现负相关(r=-0.280,P=0.049)。结论胃癌组织Pokemon高表达和p14^(ARF)低表达可反映胃癌的发生发展、侵袭及转移等临床生物学行为的程度。

Pokemon和NF-κBp65在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨Pokemon和NF-κBp65在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌发生、转移的相关性。方法应用免疫组化方法,检测52例乳腺癌、20例癌旁乳腺组织Pokemon蛋白和NF-κBp65的表达,并进行统计分析。结果乳腺癌、癌旁乳腺组织细胞核Pokemon蛋白高表达率分别为71.2%、40.0%,两者有显著性差异(P<0.05),细胞核NF-κBp65阳性率分别为57.7%、35.0%,两者无显著差异(P>0.05)。细胞核Pokemon蛋白表达与乳腺癌淋巴结转移密切相关(P<0.05)。细胞核NF-κB65表达与乳腺癌组织学分级相关(P<0.05)。乳腺癌细胞核Pokemon蛋白高表达与NF-κBp65阳性表达呈正相关(P<0.05)。结论Pokemon和NF-κBp65可能共同参与了乳腺癌的发生和转移,Pokemon可能是NF-κBp65的1个重要调节因子。

Pokemon mRNA在乳腺癌中的表达及与c-myc相关性分析

目的:探讨人乳腺癌中原癌基因c-myc和Pokemon mRNA在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌发生、转移的相关性。方法:收集浸润性导管癌组织、癌旁乳腺组织、正常乳腺组织各45、20和20例,用原位杂交法检测Pokemon mRNA表达,并用免疫组织化学法检测浸润性导管癌c-myc表达,并进行统计分析。结果:乳腺癌细胞质Pokemon mRNA的表达率为71.2%(37/45),显著高于癌旁正常乳腺组织40%(8/20)、乳腺增生组织25%(5/20),三者有显著性差异(P<0.05),细胞质c-myc阳性率分别为86.67%、60.0%、50.0%,三者有显著性差异(P<0.05)。细胞质Pokemon mRNA表达与乳腺癌淋巴结转移、组织学分级相关(P<0.05)。细胞质c-myc表达与乳腺癌腋窝淋巴结转移相关(P<0.05)。45例乳腺癌细胞质Pokemon mRNA与c-myc表达呈正相关(γ=0.585,P<0.05)。结论:Pokemon mRNA的表达可能在乳腺导管癌的组织发生中起关键作用,c-myc的过度表达可能与乳腺癌Pokemon基因转录激活有关。

Pokemon和P14^(ARF)蛋白在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨Pokemon和P14ARF蛋白在人肝细胞癌组织中的表达及相关性,分析其与肝细胞癌转移复发的关系。方法应用免疫组织化学法检测60例肝细胞癌组织和癌旁组织中Pokemon和P14ARF蛋白的表达情况。结果Pokemon及P14ARF在60例肝细胞癌及癌旁组织中的表达差异均有统计学意义(P<0.05)。Pokemon的表达与临床分期、肿瘤直径、肿瘤分化程度密切相关(P<0.05);P14ARF的表达与肿瘤分化程度密切相关(P<0.05)。Pokemon的表达和P14ARF的表达呈显著负相关(γ=-0.268,P=0.038)。结论 Pokemon和P14ARF蛋白在肝细胞癌的发生及发展中起着重要作用。

Pokemon基因表达与胃癌耐药性的关系

目的探讨pokemon基因表达与胃癌细胞药敏性及耐药基因的关系。方法取60例胃癌组织和癌旁组织石蜡标本,采用免疫组化技术检测组织中pokemon蛋白及耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、肺耐药蛋白(LRP)、生存素(survivin)的表达,并分析pokemon蛋白与其他4种蛋白的关系。采用磺酰罗丹明B(SRB)蛋白染色法检测5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)、奥沙利铂(L-OHP)对胃癌细胞株SGC7901、胃癌耐药细胞株SGC7901/ADR、胃上皮细胞株GES-1的抑制作用;qPCR及蛋白质印迹法检测上述3种细胞株中pokemon和耐药基因的表达。合成针对pokemon的siRNA并转染SGC7901/ADR细胞,检测转染前后SGC7901/ADR细胞的化疗药敏性及耐药基因的变化。结果胃癌组织中pokemon、P-gp、MRP1、LRP、survivin蛋白的阳性表达率均高于癌旁组织(P<0.05);pokemon蛋白表达与P-gp、survivin蛋白表达间存在正相关关系(r=0.385 2,P=0.002;r=0.342 4,P=0.007)。Pokemon、P-gp、MRP1、survivin蛋白在SGC7901/ADR细胞株中的表达高于细胞株SGC7901及GES-1;SGC7901/ADR细胞株的耐药性最强,SGC7901次之,GES-1最弱(P<0.01)。Pokemon-siRNA转染SGC7901/ADR细胞后细胞中pokemon mRNA的表达明显受到抑制;转染后化疗药物对细胞的抑制能力增强,P-gp、survivin表达减弱(P<0.05)。结论 Pokemon与P-gp、survivin通过相互调控而促进胃癌耐药性的形成。Pokemon可能成为胃癌靶向治疗的候选基因。

Pokemon蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表达及其意义

目的检测膀胱尿路上皮癌组织中Pokemon蛋白的表达,分析其与临床病理特征间的关系。方法收集2010年3月～2013年8月宁波大学附属医院泌尿外科27例膀胱尿路上皮癌术中切除的癌、癌旁及临近正常组织,应用免疫印迹法（Western blot）检测标本中Pokemon蛋白的表达,并对其与膀胱癌的临床病理特征进行分析。结果 Western blot检测到Pokemon蛋白在膀胱尿路上皮癌组织中表达较高、在癌旁及正常组织中表达较低,差异有统计学意义（P〈0.05）。膀胱癌组织中Pokemon蛋白表达与肿瘤病理分级有关,而与患者的性别、年龄、吸烟史及TNM临床分期无明显相关。结论 Pokemon蛋白表达和膀胱尿路上皮癌的发病及恶性程度有关,可能成为膀胱尿路上皮癌治疗的有效靶点。

人Pokemon蛋白锌指结构域的表达与纯化

旨在原核表达Pokemon基因的锌指结构域,纯化获得GST-Zinc finger的融合蛋白。以人胶质瘤T98G细胞的c DNA为模板,利用PCR扩增带有Bam H I和Sal I酶切位点的人Pokemon基因的锌指结构域,然后将其克隆到p GEX-4T-1原核表达载体中。将正确的重组载体转入大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,再利用Magne GST particles亲和纯化Zinc finger融合蛋白,最后通过Western blot鉴定此融合蛋白。结果显示,成功构建p GEX-4T-1-Zinc finger原核表达载体;30℃条件下,0.2 mmol/L的IPTG能诱导出大量的可溶性GST-Zinc finger蛋白;经Magne GST particles纯化的GST-Zinc finger蛋白可被识别Pokemon锌指结构域的抗体特异识别。纯化的GST-Zinc finger蛋白可用于后续的生物学研究。

阿帕替尼辅助DP方案治疗晚期非小细胞肺癌的疗效及对血清hCAP18和Pokemon表达的影响

目的探讨阿帕替尼辅助多西他赛联合顺铂(DP)方案治疗晚期非小细胞肺癌患者的疗效及对血清人类阳离子抗菌蛋白18(hCAP18)及Pokemon表达的影响。方法将114例晚期非小细胞肺癌患者,根据随机数字表法分为对照组和观察组,每组各57例。对照组给予DP方案,观察组给予阿帕替尼辅助DP方案,21 d为1个疗程,随访2年。对比2组治疗前后的临床疗效和血肿瘤标志物(CYFRA21-1、VEGF以及CEA)水平、血清hCAP18和Pokemon水平、生存情况和不良反应(心脏毒性、血小板减少、肝肾功能损害、白细胞减少和胃肠道反应)。结果观察组的客观缓解率(ORR)(70.18%)和疾病控制率(DCR)(92.98%)明显高于对照组(ORR:50.88%,DCR:77.19%),差异有统计学意义(均P<0.05)。治疗后2组肿瘤标志物水平和血清hCAP18和Pokemon水平均较治疗前降低,且观察组较对照组降低更明显(均P<0.05)。观察组的平均生存期[(11.19±2.57)年比(9.48±2.12)年]和1年生存率(54.39%比35.09%)均明显高于对照组(均P<0.05)。2组的各种不良反应发生率比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论阿帕替尼联合DP治疗可能发生协同作用,增强抗肿瘤效果,可有效改善患者的临床疗效,提高患者的生存率,且未增加不良反应发生率。

乳腺癌组织中Pokemon和p53蛋白的表达及其相关性研究

目的:研究乳腺癌组织中Pokemon和p53蛋白的表达及其相关性。方法:采用免疫组化En Vision染色法,对200例样本进行检测和对比分析。结果:细胞核中出现棕黄色颗粒,即为阳性表达。Pokemon和p53在乳腺癌组织中的表达率分别为89.00%和81.00%,均高于乳腺癌周围组织的阳性表达率(P<0.05);在200例患者样本中,两者均为阳性表达的有137例,均为阴性表达的有20例,两者表达呈现出高度的正向相关性(rs=0.731,P<0.05)。结论:Pokemon和p53蛋白之间存在明显的正向相关性,两者的表达在乳腺癌的发生及发展上有着重要的联系。

Pokemon在原发性肝癌中的表达及诊断价值

目的研究Pokemon在原发性肝细胞癌（HCC）患者血清中的表达，比较Pokemon、甲胎蛋白（AFP）、AFP-L3、γ羧基凝血酶原（DCP）对HCC的诊断价值。方法将研究对象分为3组，HCC组30例、良性肝病组34例、正常对照组30例，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测3组血清中Pokemon、AFP、AFP-L3、DCP的表达水平并分析差异；通过受试者工作特征（ROC）曲线获得Pokemon、AFP、AFP-L3、DCP的最佳诊断界值，并对4种标志物的敏感性、特异性进行分析。结果HCC组血清中Pokemon表达量为（22.63±6.82）ng/ml，高于良性肝病组的（3.54±1.26）ng/ml及正常对照组的（1.95±0.57）ng/ml（t=8.594，P＜0.001；t=10.021，P＜0.001）。Pokemon的表达量与HCC患者的肿瘤直径（t=2.678，P=0.021）、TNM分期（t=2.578，P=0.034）有关。HCC组AFP、AFP-L3、DCP的表达量分别为（774.56±96.52）ng/ml、（26.37±2.54）ng/ml、（93.49±30.45）mAU/ml，良性肝病组分别为（22.21±3.57）ng/ml、（7.05±2.71）ng/ml、（34.68±10.13）mAU/ml，正常对照组分别为（14.65±4.45）ng/ml、（3.84±1.09）ng/ml、（25.87±9.01）mAU/ml，三组间差异均有统计学意义（F=58.46，P=0.000；F=12.47，P=0.000；F=23.41，P=0.000）。Pokemon、AFP、AFP-L3、DCP诊断HCC的敏感性和特异性分别为84.6%和87.5%、52.5%和78.9%、95.0%和80.0%、77.1%和87.5%。结论Pokemon在HCC患者血清中的表达明显升高，其诊断HCC的敏感性及特异性高于AFP，提示Pokemon对HCC的诊断有一定价值。

Pokemon蛋白和p53蛋白在卵巢癌组织中的表达及其意义

目的探讨卵巢癌组织中Pokemon蛋白和p53蛋白表达，明确其与临床病理的关系。方法选取52例卵巢癌组织作为观察组，60例卵巢良性病变组织作为对照组。免疫组化测定两组组织中Pokemon蛋白和p53蛋白的表达。结果观察组和对照组中Pokemon蛋白阳性率分别为69．2％（36／52）和11．7％（7／60），差异有统计学意义（χ2=12．74，P〈0．01）。观察组和对照组中p53蛋白阳性率分别为78．8％（41／52）和15．0％（9／60），差异有统计学意义（χ2=22．71，P〈0．01）。Pokemon蛋白表达与卵巢癌患者的肿瘤浸润深度（χ2=9．16，P〈0．05）、临床分期（χ2=5．86，P〈0．05）、淋巴结是否转移（χ2=32．28，P〈0．01）和是否复发（χ2=27．08，P〈0．01）均有显著的关系，与肿瘤分化程度（χ2=0．82，P〉0．05）无明显关系。p53蛋白表达与卵巢癌患者的肿瘤浸润深度（χ2=8．24，P〈0．05）、临床分期（χ2=9．24，P〈0．05）、淋巴结是否转移（χ2=19．62，P〈0．01）和是否复发（χ2=21．16，P〈0．01）均有显著的关系，与肿瘤分化程度（χ2=0．77，P〉0．05）无明显关系。经相关性分析，Pokemon蛋白和p53蛋白阳性表达有明显正相关关系（r=0．297，P〈0．05）。结论Pokemon蛋白和p53蛋白与卵巢癌的诊断、病变程度和预后均有密切关系。

抑制Pokemon蛋白表达对人肺癌细胞株NCI-H520的作用

目的利用RNA干扰（RNAi）技术将针对性构建的重组质粒转染人人肺癌细胞株NCI-H520，观察下调Pokemon基因对人肺癌细胞生物学行为的影响。方法利用Ambion公司设计软件设计针对Pokemon基因的2条小干扰RNA（siRNA）序列，并合成2对互补的siRNA编码DNA片段，定向克隆至RNAi-ReadypSIREN-RetroQ载体的BamHI和EcoRI位点，构建重组体质粒，分别命名为pSIREN-Pokemon-1和pSIREN-Pokemon-2，同时设立转染空载体对照组。Westernblot检测人肺癌细胞中Pokemon蛋白表达，噻唑蓝（M1vr）比色实验检测转染后细胞的增殖抑制结果，流式细胞分析技术检测转染后细胞周期的分布。结果利用RNAi-Ready pSIRENR RetroQ载体构建的重组质粒可以成功抑制人肺癌细胞NCI-H520中Pokemon蛋白的表达。Westernblot检测发现人肺癌细胞NCI-H520中Pokemon蛋白高水平表达，转染后其表达水平明显下降。转染后第3天，M1Tr比色实验显示pSIREN-Pokemon-1组（0．0015±0．0030）和pSIREN-Pokemon-2组（0．0086±0．0015）与pSIREN-Pokemon.0组（0．0230±0．0010）比较差异有统计学意义（P〈0．05），而pSIREN-Pokemon-1与pSIREN-Pokemon-2组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。流式细胞分析检测发现转染siRNA细胞与转染空载体细胞的细胞周期差异无统计学意义（P〉0．05）。pSIREN-Pokemon-1转染组及pSIREN-Pokemon-2转染组形成克隆的数量（18．0±0．3、16．0±0．4）明显低于pSIREN-Pokemon-O组（52．0±0．4，P〈0．05）。结论使用pSIREN载体成功构建的重组质粒转染人肺癌细胞可有效抑制原癌基因Pokemon的表达。转染后细胞增殖受到抑制，生长速度减慢。抑制Pokemon蛋白表达对细胞周期无明显影响。靶向siRNA可以存人肺癌细胞中抑制Pokemon蛋白表达，负调节肺癌细胞生长。

FGFR1、FGFR3和Pokemon在膀胱癌中的表达及相关性研究

目的通过观察FGFR1、FGFR3和Pokemon在膀胱癌组织的表达情况,探讨它们在膀胱癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化检测296例膀胱癌和48例正常膀胱组织中FGFR1、FGFR3和Pokemon蛋白的表达情况。结果 1)FGFR1在膀胱癌不同病理分期、分级及初发复发的表达率为:Ta-T1期7.5%,T2-T4期18.1%(p<0.01);低级别2.8%,低-高级别11.9%(p<0.05),高级别14.3%的(p<0.01);初发表达6.8%,复发表达率17.1%(p<0.01)。2)FGFR3在膀胱癌不同病理分期、分级的表达率为:Ta-T1期68.1%,T2-T4期35.0%(p<0.01));低级别75.0%,低-高级别60.3%(p<0.05),高级别44.9%(p<0.01)。3)Pokemon在膀胱癌不同病理分级及初发复发的表达率为:低级别47.2%,低-高级别66.7%(p<0.01),高级别80.6%(p<0.01);初发59.2%,复发80.0%(p<0.01)。结论 FGFR1在膀胱癌中的表达与病理分级、分期成正相关,复发表达明显高于初发;Pokemon在膀胱尿路上皮癌中的表达与病理分级成正相关,复发表达也明显高于初发,表明它们可能主要参与膀胱癌发展及转移等过程。FGFR3在膀胱癌中的表达与病理分级、分期成负相关,表明它可能在膀胱癌发展早期及低级别肿瘤发展中发挥着重要作用。

新疆地区维汉妇女宫颈病变组织中Pokemon与P14ARF表达情况的研究

目的探讨新疆地区维汉妇女宫颈疾病及其癌变组织中Pokmon蛋白与P14ARF蛋白的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测240例新疆地区维汉族妇女宫颈病变中Pokmon蛋白和P14ARF蛋白的表达。维汉妇女各120例,依据病理诊断结果分为4组,非瘤变组(正常及慢性炎症组)30例、CINⅠ组30例、CINⅡ—Ⅲ组30例、宫颈鳞癌组30例。结果宫颈病变组织中Pokemon与P14ARF蛋白在维汉族之间的表达差异无显著性(P>0.05);随着宫颈病变程度的加重,不同组别之间Pokemon与P14ARF蛋白的表达有显著差异(P<0.05)。结论 Pokemon蛋白与P14ARF蛋白表达与宫颈疾病及其癌变的发生密切相关,呈正相关,Pokemon蛋白与P14ARF蛋白在新疆地区维汉妇女宫颈病变及其癌变中表达不存在民族差异。

转录因子增强激活子结合蛋白-4对子宫内膜癌细胞恶性增殖的影响

目的利用体外细胞模型,研究转录因子增强激活子结合蛋白-4(TFAP4)对子宫内膜癌细胞恶性增殖的影响及探讨其可能的作用机制。方法利用小干扰RNA技术沉默子宫内膜癌细胞(HEC-1-A和RL95-2)内源性增强激活子结合蛋白-4(AP-4)的表达后,通过平板克隆及软琼脂克隆形成实验检测肿瘤细胞单克隆形成及非锚定生长能力的变化。利用碘化吡啶染色流式细胞术分析肿瘤细胞周期的变化,并利用荧光定量PCR技术检测CDKN1A的转录水平。利用生物信息学分析预测CDKN1A的启动子区域内是否存在AP-4及锌指蛋白Pokemon的结合位点,进一步利用染色体免疫共沉淀技术验证AP-4及Pokemon是否共同结合到CDKN1A的启动子区域。每次实验设3个复孔,每个实验重复3次以上,两组间数据比较采用t检验,多组间数据比较采用单因素方差分析,检验水平α=0.05。结果沉默内源性AP-4的表达后,两种子宫内膜癌细胞(HEC-1-A和RL95-2)的克隆形成能力降为0.38倍至0.55倍,软琼脂克隆形成能力降为0.21倍至0.27倍。进一步发现,沉默内源性AP-4的表达能诱导两种子宫内膜癌细胞发生G0/G1期阻滞并增加CDKN1A的转录水平为7.34倍至9.22倍。公共数据库分析显示,CDKN1A的启动子区域内存在AP-4及Pokemon相邻的结合位点,沉默内源性AP-4后能同时降低AP-4及Pokemon与CDKN1A的启动子区域的结合,其中AP-4的富集率降至0.07倍至0.21倍,Pokemon的富集率降至0.04倍至0.18倍。结论沉默内源性AP-4能在体外模型中,抑制子宫内膜癌细胞的恶性增殖,其机制可能与破坏了AP-4/Pokemon转录复合物对CDKN1A的转录抑制,从而阻抑了肿瘤细胞的周期运行。