美洲商陆丝裂原(PWM)激活淋巴细胞及^(60)Coγ线辐射效应的研究

应用玫瑰花环法分离人外周血T、B淋巴细胞,T_4McAb标记淋巴细胞后经细胞亲和层析分离得到T_4^+和非T_4^+细胞。部分T、B、T_4^+和非T_4^+细胞接受10 Gy^(60)Coγ线照射。将各种细胞匹配分组培养,以~3H-TdR参入法观察PWM对淋巴细胞及其亚群激活功能和^(60)Coγ线的辐射效应。结果表明T、B淋巴细胞均可被PWM激活,B强于T细胞;PWM对B和非T_4^+细胞激活作用相当,唯T_4^+细胞最弱。PWM激活时。T与B、T_4^+与B细胞其DNA合成均有协同作用,前者的协同作用更大。当T、T_4^+或B细胞受到10Gy^(60)Coγ线照射后,它们之间的协同作用消失。非T_4^+与B细胞间既无协同作用亦无抑制作用。10 Gy^(60)Coγ线照射后,B和非T_4^+细胞~3H-TdR参入下降比T_4^+细胞严重,前二者的差别不显著。

胎儿胸腺细胞对PWM和PHA反应性比较

比较了ＰＷＭ和ＰＨＡ对胎儿胸腺细胞及Ｔｈｙ－Ｌ（比重≤１．０７４）和Ｔｈｙ－Ｈ（比重＞１．０７４）两亚群的增殖效应。研究结果表明：ＰＷＭ在较大浓度范围内（０．２～２０μｇ／ｍｌ）对胎儿胸腺细胞尤其是Ｔｈｙ－Ｌ有强烈诱导增殖作用，ＰＨＡ的诱导增殖作用呈明显剂量依赖关系，ＩＬ－２对ＰＨＡ的协同作用远较对ＰＷＭ的协同作用强；多聚甲醛处理的Ｕ细胞对ＰＷＭ和ＰＨＡ诱导的增殖均有辅助作用；Ｔｈｙ－Ｌ为胸腺细胞中对刺激敏感的亚群，而Ｔｈｙ－Ｈ对刺激不敏感。

凝集素美洲商陆(PWM)依赖的人单核细胞介导的肿瘤细胞凋亡

本研究探讨了凝集素美洲商陆(PWM)激活的人外周血单核细胞介导的细胞毒活性作用的机制。通过采用DNA电泳和PI-DNA染色流式细胞仪检测,我们发现在凝集素依赖的单核细胞介导的细胞毒作用(LDMC)中,靶细胞U937细胞和Raji细胞呈现出细胞凋亡现象。这种LDMC诱导的U937细胞的DNA断裂现象可被抗TNF-α单克隆抗体所阻止,但不能被单糖N-乙酰基葡萄糖胺(GlcNAc)所抑制。相反,GlcNAc可抑制LDMC诱导的Raji细胞的DNA断裂,而抗TNF-α单抗对此却无作用。PWM可以刺激单核细胞产生活性一氧化氮(NO),这种刺激作用在Raji靶细胞存在时可被加强,但这种加强作用可被GlcNAc所阻断。通过流式细胞仪分析发现PWM可与单核细胞和肿瘤细胞结合。这些结果提示,单核细胞和肿瘤细胞上存在的凝集素类受体可促使两种细胞之间在凝集素介导下相互接近,并通过诱发单核细胞产生细胞毒因子(TNF和NO),促进诱导靶细胞的细胞凋亡。

人外周血淋巴细胞及单核细胞表达PD-L1和PD-L2的动力学研究

目的:探讨PD-L1和PD-L2在正常人外周血静息和活化的B细胞、T细胞及单核细胞表面的表达规律。方法:利用荧光抗体染色和流式细胞术分析静息状态及经多克隆刺激剂脂多糖(LPS)和美洲商陆丝裂原(PWM)刺激6、24、48和72 h后表达PD-L1和PD-L2的B细胞和T细胞百分率,同时分析静息状态及经IFN-γ和LPS共同刺激244、8、72和96 h后表达PD-L2的单核细胞百分率。结果:静息B细胞和T细胞表面不表达PD-L1,LPS和PWM刺激6 h后表达PD-L1的B细胞百分率均显著高于静息B细胞,24 h达到最高,分别为(46.26±10.71)%和(43.67±6.14)%,之后随时间延长而降低;表达PD-L1的T细胞百分率在LPS刺激下无显著变化,但PWM刺激6 h后百分率明显高于静息条件,24 h达到最高,为(25.42±9.23)%,之后下降。静息B细胞和T细胞不表达PD-L2,活化后PD-L2表达也无明显上调。另外,静息状态单核细胞表面不表达PD-L2,体外活化24 h后表达PD-L2的单核细胞百分率显著上调,48 h达到最高为(28.70±14.22)%,之后随时间而降低。结论:活化的淋巴细胞表达PD-L1,但不表达PD-L2,后者在活化的单核细胞表面表达,并且后者达到高峰的时间迟于前者。

P物质对刀豆素A和美洲商陆诱导小鼠脾细胞产生γ干扰素的调节作用

本实验研究了不同浓度(10^(-11) ～10^(-5) mol/L)P物质(SP)在体外对刀豆素A(ConA)和美洲商陆(PWM)诱导小鼠脾细胞产生γ干扰素(IFN-γ)的影响。结果显示,10^(-11)～10^(-6)mol/L SP对10μg/mlPwM诱生IFN-γ没有影响。用5、2.5及1.25μg/ml ConA或PWM诱生时,10^(-9) ～10^(-5) mol/L SP可增高IFN-γ效价,10^(-7) ～10^(-5)mol/L SP作用更明显。单独加SP而不加诱生剂,未检测到IFN-γ.先加入10^(-9) ～10^(-6) mol/L SP 6h后,再加ConA诱生的IFN-γ效价,略高于同时加入10^(-9) ～10^(-6)mol/L SP时ConA诱生的IFN-γ效价。先加入10^(-5)mol/L SP,IFN-γ效价并不比同时加10^(-5) mol/L SP时增高,反而有降低的趋势.在先加入SP时,10^(-8)mol/L SP即表现出明显的增高IFN-γ效价的作用,而同时加SP,则在10^(-7)mol/L才有明显作用。

抗CD3、CD7单抗-PAPs免疫毒素的构建及其联合杀伤效应

[目的]应用抗人T淋巴细胞单抗(抗CD3和抗CD7),分别与商陆抗病毒蛋白(PAPs)偶联构成两种免疫毒素,并探讨这两种免疫毒素在体外联合对T淋巴细胞和T淋巴母细胞(CEM细胞)的杀伤效应。[方法]选用抗CD3和抗CD7杂交瘤细胞制备单克隆抗体腹水,经纯化后以SPDP为交联剂,将两种单抗分别与商陆抗病毒蛋白偶联构建成抗CD3和抗CD7单抗免疫毒素;分别以及联合后对T淋巴细胞和CEM细胞进行体外细胞毒试验。[结果]构建的两种单抗-PAPs免疫毒素活性良好,其特异性杀伤T淋巴细胞和T淋巴母细胞CEM细胞的效应比单一抗CD3-PAPs和抗CD7- PAPs更强,对照组仅有轻微的杀伤效应。[结论]成功地构建了抗 CD3和抗 CD7单抗-PAPs免疫毒素,及其不同抗原决定簇的单抗免疫结合物,并证明联合应用抗CD3-PAPs和抗CD7-PAPs免疫毒素有相加的杀伤效果。

定期无偿献血者B细胞免疫功能的研究

目的:通过对定期无偿全血捐献者、定期无偿血小板捐献者这两个特殊健康人群的B细胞数量以及抗体分泌功能的研究,评价定期捐血对机体体液免疫功能的影响。方法:采用流式细胞术对三组人群(定期无偿全血捐献者、定期无偿血小板捐献者、对照组)外周血中B细胞总数进行数量分析;分离外周血淋巴细胞,加丝裂原美洲商陆(PWM)体外培养10天,取培养上清,ELISA方法检测IgM及IgG的分泌量。采用F检验对三组样本进行方差齐性分析。当P>0.05时认为两个总体的方差相等,用完全随机设计两总体均数比较的t检验进行统计分析。由于Ig分泌量的数值较大,取对数后再做分析。结果:定期无偿全血捐献者及定期无偿血小板捐献者的B细胞数量与对照组的差异无统计学意义(P>0.05);定期无偿全血捐献者及定期无偿血小板捐献者IgM及IgG的分泌量与对照组的差异也无统计学意义(P>0.05)。结论:B细胞的恢复较快,机体在献血间隔期已经将B细胞的免疫功能调节到正常水平。定期献血者能正常发挥其B细胞的免疫功能。

无血清培养条件下丝裂原和单抗对rIL-2激活的淋巴细胞活性的影响

采用无血清培养体系,探索了PHA-P,PWM、Con-A及CD3McAb对rIL-2激活的正常人外周血淋巴细胞增殖及细胞毒活性的影响,并同合优质新生牛血清的培养体系进行了比较。结果表明,在无血清培养条件下:①rIL-2、rIL-2+PHA-P及rIL-2+CD3McAb激活的淋巴细胞的增殖及细胞毒活性均高于有血清培养;rIL-2+PWM激活的淋巴细胞仅在细胞毒活性方面高于有血清培养。②PHA-P、PWM、Con-A及CD3McAb对rIL-2激活的淋巴细胞的增殖均有促进作用,CD3McAb可增强其对K562及HL60的细胞毒活性,而PHA-P仅能增强其对K562的细胞毒活性。

商陆体外诱导抗体产生方法的改进及其应用

本文介绍一种商陆体外诱导抗体产生及其测定方法。该法在低浓度FCS的培养液中,将淋巴细胞用商陆连续诱导6d,然后用ELISA法测定淋巴细胞分泌到上清液中的Ig。因改二次培养为一次,不仅操作简化,而且节省淋巴细胞,易于在临床检测中应用。此法在中药研究中得到满意结果。

美洲商陆对人胎儿胸腺细胞表型的影响

利用妊娠中期水囊引产的胎儿胸腺细胞,通过直接免疫荧光染色技术,借助流式细胞计,研究了PWM(Pokeweed mitogen,美洲商陆)对胎儿胸腺细胞表型的影响。结果表明:①PWM能诱导胸腺细胞CD3分子和HLA-Ⅰ类抗原表达增加,CD1分子表达减少,CD38分子变化不大。②HLA-Ⅰ类抗原和CD1分子复合表达的变化表明,胸腺细胞在PWM作用下先上调HLA-Ⅰ类抗原,表达了HLA-Ⅰ类抗原的细胞再下调CD1分子。③胸腺细胞在PWM作用下,CD4^+SP细胞和CD4^-CD8^-DN细胞逐渐增加,CD4^+CD8^+DP细胞减少。

体外诱导和检测人类B细胞产生抗HLA抗体的研究

目的体外诱导和采用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测人类B细胞产生的抗HLA抗体。方法对7名健康志愿者采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC）并体外培养5d，以B细胞多克隆刺激原美洲商陆丝裂原（PWM）、葡萄球菌A蛋白菌体（SAC）体外刺激PBMC，采用ELISA和ELISPOT方法分别测定培养上清中Ig浓度和抗体分泌B细胞数，探索体外诱导PBMC产生Ig的适宜方法。采用该刺激方法和HLA特异的ELISPOT法，诱导和检测9例拟行肾移植预致敏对象PBMC产生的抗HLA抗体。结果与PWM单刺激相比，PBMC在PWM和SAC联合刺激后，有更多细胞存活的趋势（P=0．052），且培养上清中IgM的水平明显增加（P=0．03），而IgG的水平无明显变化（P〉0．05）。6例预致敏对象诱导和检测到抗HLA抗体。其特异性与各自培养上清中检测到的抗HIA抗体一致。结论PWM和SAC体外刺激PBMC，结合HLA特异的ELISPOT方法，能诱导和检测到人类B细胞产生的HLA抗体。

人精浆对不同丝裂原诱导淋转反应的影响

本文通过人精浆对PHA、ConA和PWM三种丝裂原诱导淋巴细胞转化反应的影响,间接了解HSP对T辅助、T抑制和B淋巴细胞功能的影响,结果发现不同浓度的精浆对三种丝裂原诱导的淋转反应均有明显抑制作用(P<0.05),且三种浓度HSP的抑制作用在无显著性差异(P>0.05);中浓度的精浆对PHA、ConA和PWM诱导转反应的抑制率分别为69.7、51.7和48.3％,说明精浆对机体的T辅助、T抑制性和B淋巴细胞功能均有明显的抑制作用。此外,还对精浆的免疫抑制作用机理和意义进行了讨论。