Quantitative Detection of Inositol Hexakisphosphate (InsP6) in Crop Plants Using Polyacrylamide Gel Electrophoresis (PAGE)

Inositol phosphates are essential for cell development and signaling in all living organisms. Inositol hexakisphosphate (InsP6) is the most abundant phosphoinositol in both plants and animals. While the concentration of inorganic phosphorous (Pi) is often limited in soil, some plants overcome this limitation by creating a phosphate reservoir that serves as a source of Pi during phosphate deficiency. Although this strategy benefits plant development and signaling under adverse environmental conditions, excessive accumulation of Pi in crop plants has raised serious concerns about its toxicity and ill effects on human health. Consumption of crop plants with high InsP6 content or food products made from these crops is found to reduce nutrient intake significantly by way of chelating essential metal cations in human and livestock fed by such plants. Therefore, it is necessary to determine InsP6 contents in crop plants. Several methods have been developed for the screening and detection of InsP6 in plants. These detection methods however, are complex, labor-intensive, and often provide inaccurate results. We have developed a fast, reliable, and cost-effective method for the detection and quantification of InsP6 in plants using polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) with potential applications in industry, quality control labs, and research projects.

Optimization of SSR-PCR Non-denatured Polyacrylamide Gel Electrophoresis Conditions in Kernelled Apricot

[Objective] The aim was to optimize the SSR-PCR non-denatured polyacrylamide gel electrophoresis conditions in kernelled apricot.[Method]25 accessions of kernelled apricot and three accessions of edible apricot were selected as experimental materials to screen the repeatable SSR loci with high polymorphism by the use of SSR markers combined with non-denatured polyacrylamide gel electrophoresis.And the effect of different factors on electrophoresis conditions was compared to explore the optimal SSR-PCR non-denatured polyacrylamide gel electrophoresis conditions in kernelled apricot.[Result]The optimal non-denatured polyacrylamide gel electrophoresis conditions for SSR-PCR were established as follows：polyacrylamide gel concentration 6%,the ratio of acrylamide to bisacrylamide 29∶1,electrophoresis at 1 000 V for 2-3 h,and staining for 15 min within 0.1% AgNO3.[Conclusion]The optimum electrophoresis system has provided some technical foundations to further study the phylogenetic relationship of kernelled apricots by SSR markers.

Separation of non-denatured proteins using semi-crosslinked polyacrylamide capillary gel electrophoresis

This work presents an approach to build a high-performance, low-viscous and replaceable separation matrix, semi-crosslinked polyacrylamide （semi-CPA） capillary gel electrophoresis. Non- denatured basic proteins, such as lysozyme, cytochrome C, ribonuclease A and trypsin were separa- ted. The impacts of monomer and cross-linker concentrations on protein separation were studied, and the ability of dynamic capillary inner wall coating was demonstrated. The UV absorption interfer- ence by semi-CPA gel matrix was successfully overcome by a partial filling technique, which results in sensitivity 20 times higher than other protein separation method. The excellent separation ability, reproducibility and dynamic coating ability made semi-CPA an ideal separation media in both capillar- y electrophoresis and microfluidic chip separation scheme.

乳及乳制品中乳铁蛋白含量的快速SDS-PAGE荧光检测方法

该研究采用新型的Chromeo P503(P503)染料替代考马斯亮蓝染色方法,以克服脱色染色步骤繁琐、耗时长(≥5 h)的不足,建立一种乳及乳制品中乳铁蛋白的快速简便十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis,SDS-PAGE)检测方法。P503染料标记蛋白产生强烈的红色荧光发射,在30 min内一步操作即可完成,并且进行脱铁处理后消除乳铁蛋白铁饱和度对于荧光信号的干扰,保证定量的准确性。根据凝胶成像图中78 ku蛋白条带是否存在及其灰度值的大小,实现乳铁蛋白的定性与定量检测。在优化的实验条件下,线性范围为15~75μg/mL,检出限为5.11μg/mL,加标回收率在75.79%~108.09%之间,表明该方法具有较高的灵敏度和准确性。SDS-PAGE和P503结合无需进行肝素亲和柱前处理,便可直接应用于乳及乳制品中乳铁蛋白快速简便的准确定量检测,P503染料标记还可以用于其它乳蛋白的SDS-PAGE快速低成本定量检测,从而为乳品质量控制和营养评价及加工工艺研究提供有力工具。

Research on Sex and Tissue Differences in Isozymic Phenotype of Varicorhinus macrolepis through Isozyme Electrophoresis

Polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) and biochemical staining method were used in this study for the analysis on malate dehydrogenase (MDH,E.C. 1.1.1.37) isozymes zymogram in 11 different types of tissues of male and female Varicorhinus macrolepis. It had been found for the first time that the phenotype of malate dehydrogenase (MDH),acid phosphatase (ACP) and superoxide dismutase (SOD) showed difference between male and female V. macrolepis,and there was no difference among different individuals in the same sex. Therefore,the electrophoresis band of malate dehydrogenase,acid phosphatase and superoxide dismutase could be used as an indicator for the identification of gender and tissues of V. macrolepis,which would provide basic data for the developmental genetics,variety improvement and directed breeding of V. macrolepis groups,thus facilitating the development and protection of this valuable fish species.

低背景、高分辨率PAGE简易银染法

聚丙烯酰胺凝胶电泳银染一直存在耗时长、步骤繁琐等缺陷,是其批量应用的瓶颈。文章报道了一种低背景、高分辨率的PAGE简易银染方法,该法在降低NaOH浓度和批量显带方面进行了有益的探索,建立了节省时间、节约试材,对批量显带尤为实用的简易银染法。

PAGE银染和条带回收方法的改进

为了提高聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）的银染效果和条带回收的效率,以广玉兰DNA为材料进行ISSR-PCR分析,比较了两种银染（常规银染法和快速银染法）和条带回收法（乙醇糖原法和改进的煮沸法）.结果显示：两种银染方法效果一致,但常规银染要用2-3 h,而快速银染仅用30 m in,是常规银染的1/6-1/4;改良的煮沸法回收条带比乙醇糖原法更简便、更快捷.因此,快速银染和改良的煮沸法条带回收法可以应用在以后的研究中.

用变性PAGE-银染法鉴定小麦抗条锈基因Yr5的RAPD标记

以小麦抗条锈病基因Yr5的供体亲本Triticumspeltaalbum作为对照 ,对近等基因系Yr5 6×AvocetS和感病亲本AvocetS进行RAPD分析。扩增产物用 4%变性PAGE分离 ,银染显色。在变性PAGE上可以检测到 50～ 10 0条带 ,是琼脂糖凝胶电泳的 5倍以上。筛选了 2 40个随机引物 ,发现 2 3条稳定的多态性DNA片段 ,初步检测表明其中6条与Yr5基因具有连锁性。用 12 1株AvocetS和Yr5 6×AvocetS杂交制备的F2 代分离群体进一步进行的遗传连锁性检测表明 ,多态性DNA片段S13 2 0 2 0 7和S13 4 83 6 3 分别与Yr5基因完全连锁和紧密连锁。结果表明 ,用变性PAGE分离PCR产物并结合银染显色 ,提高了小麦RAPD分析的多态性水平 。

普通小麦×大麦杂交后代中间材料的GISH及PAGE鉴定

利用基因组荧光原位杂交 (GISH)及种子贮藏蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)对普通小麦×大麦杂交后代中间材料进行了鉴定分析。GISH结果表明 ,WBA984和WBA9812为二体小大麦异附加系 ,WBS0 2 15和WBS0 2 6 4为小大麦二体异代换系 ,WBT0 2 12 5和WBT0 2 183为端部易位系 ;种子贮藏蛋白PAGE分析表明 ,WBA9812和WBS0 2 6 4含有大麦特有的高分子量麦谷蛋白亚基和在γ区含有大麦特有的醇溶蛋白带型 ,WBA9812为大麦 5H附加系 ,WBS0 2 6 4为 1B/ 5H代换系 ,WBT0 2 12 5为 1BL/ 5HL端部易位系。

SDS－PAGE研究丝素蛋白的组成

ＳＤＳ－ＰＡＧＥ研究丝素蛋白的组成于同隐，蔡再生，黄伟达（复旦大学高分子科学研究所，生物化学系，上海，２００４３３）关键词丝素蛋白，亚基组成，聚丙烯酰胺凝胶，电泳由于丝素蛋白结构的复杂性及其易变性、水解等原因，致使研究结果往往互不相同。Ｔａｓｈｉｒｏ...

SDS-PAGE-薄层扫描联用法测定3种不同来源的乳铁蛋白

目的:建立快速、简便测定鲜牛奶、转基因牛奶和人乳中乳铁蛋白的方法。方法:在对样品脱脂和去除酪蛋白时,水洗乳脂、酪蛋白以提高乳铁蛋白的回收率。通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分离乳清蛋白,薄层扫描法定量。对电泳和薄层扫描的条件进行优化,电泳使用1.0mm×10齿的试样格、分离胶质量浓度12g/mL、分离电压100V、上样量5μL、染色3h、脱色2h;薄层扫描采取锯齿、双波长、透射的扫描方式,Y步长和摆幅宽分别为0.1mm和8mm。结果:可以分离不同来源乳中的乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白;乳铁蛋白加标回收率分别为104.53%、108.37%,同板精密度RSD值为3.1003%和1.8151%,在100～2000μg/mL范围内呈线性关系,相关系数为0.9988和0.9990。结论:此方法可以用于3种乳中乳铁蛋白的测定。

利用盐溶蛋白PAGE电泳法检测玉米种子的研究

应用玉米盐溶蛋白PAGE电泳方法检测了10个玉米品种的纯度及其杂交种的真实性。通过品种间的盐溶蛋白谱带的对比,发现其中有2条蛋白带是各品种所共有的,而除这些共有的蛋白带以外,各品种还具有一些特异条带。根据每个品种特有的蛋白条带,建立其特征条带图谱,可应用于该品种的相关鉴定工作。

用PAGE电泳法检测腹泻婴幼儿粪便中轮状病毒RNA

目的 探讨婴幼儿轮状病毒感染诊断方法。方法 用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)检测轮状病毒RNA。结果 41份腹泻婴幼儿粪便标本中有 16份为RNA阳性 ,阳性率为 39%。结论 用PAGE电泳方法检测轮状病毒RNA准确可靠 。

用含底物SDS-PAGE检测明胶酶活性

将明胶加入SDS-聚丙烯酰胺凝胶中，电泳后样品中所含明胶酶按分子量大小不同停留于凝胶中的特定位置。用TritonX-100 除去SDS 使酶复性后，明胶酶便可分解凝胶中的底物。底物被分解处考马斯亮蓝染色时不着色，因此在蓝色背景下可见酶所在位置呈白色条带，根据白色条带的深浅和宽窄可判断酶活性的高低。用此方法检查了大鼠不同组织中的明胶酶活性及传代培养对血管平滑肌细胞分泌明胶酶的影响。结果显示，大鼠不同组织及不同龄大鼠同种组织胶酶活性存在差异。另外，传代培养的平滑肌细胞与组织间分泌明胶酶的种类亦不同。

PAGE凝胶电泳银染方法的改进

为改良DNA聚丙烯凝胶电泳(PAGE)银染方法,采用PCR方法扩增鸡基因组微卫星DNA序列后,经PAGE分离扩增产物和pBR322DNA/BsuRI标准分子质量,利用2种银染法对微卫星位点进行检测,分析其灵敏度和可行性。结果表明,2种方法都能染出Marker的所有条带,灵敏度均为25ng,但在染色所需时间和可操作性方面,改进的染色方法优于San-guinetti等所建立的方法。改进的银染方法染色过程较快,仅需25min左右,且染色液和显影液可回收利用。该方法能显著提高检测分辨率,在实际应用中提高了染色效率。

SDS-PAGE凝胶电泳法对不同种鹿茸蛋白质差异化研究

目的:利用电泳方法研究市场上药典规定品种的鹿茸饮片及其混淆品中蛋白质的差异,为鹿茸的免疫鉴定技术研究提供研究依据。方法:采用蛋白溶解液法提取各鹿茸蛋白,以牛血清蛋白为对照,利用Bradford法测定鹿茸水溶性蛋白的浓度,利用SDS-PAGE凝胶电泳法分析花鹿茸、马鹿、新西兰赤鹿及驯鹿的蛋白差异。结果:用7.5%分离胶系统分离花鹿茸、新西兰马鹿、马鹿及驯鹿的水溶性蛋白,四者蛋白条带有差异。结论:利用SDSPAGE凝胶电泳法考察不同品种鹿茸的蛋白差异,为不同品种鹿茸的定性研究提供依据和研究基础。

试剂盒配合琼脂糖EB染色法和PAGE银染法分析线粒体DNA A1555G突变的比较研究

目的通过比较试剂盒配合琼脂糖EB染色法和PAGE银染法分析线粒体DNAA1555G突变的不同特点,探索应用标准试剂盒和PAGE银染方法检测线粒体DNAA1555G突变的快速筛查和诊断方法。方法采用线粒体DNAA1555G突变诊断试剂盒配合PAGE胶电泳银染法检测线粒体DNA1555位点正常者229例,A>G突变阳性者17例,验证此试剂盒配合PAGE银染法检测的有效性和准确性。结果线粒体DNAA1555G突变诊断试剂盒配合PAGE胶电泳银染法检测结果与酶切EB染色和测序结果完全吻合。结论线粒体DNAA1555G突变诊断试剂盒配合PAGE胶电泳银染法和试剂盒配合EB检测法较前者更为灵敏和清晰,在分析线粒体DNAA1555G突变方面具有简单、价廉、结果直观的特点,适合在中国用于进行此突变的大规模筛查或预防性检查。

不同浓度和梯度的SDS-PAGE胶对双向电泳中蛋白分离的影响

目的:探讨双向电泳中不同浓度和梯度的SDS-PAGE胶对肠道菌蛋白分离效果的影响。方法:制备弗氏2a志贺菌2457T野生株37℃晚期全菌蛋白质样品,进行不同浓度及梯度的SDS-PAGE,研究分离肠道菌蛋白最适宜的SDS-PAGE胶浓度。结果:获得了3个不同浓度(10%、12.5%和15%)的均一胶电泳图谱和3个不同梯度(4%～15%、10%～20%和12%～14%)的电泳图谱,并比较了这些图谱的分离效果;同时,为了分析肠道菌天然表达蛋白的相对分子质量范围,鉴定了8个极端相对分子质量蛋白。结论:对于肠道菌蛋白质的分离来说,12.5%的均一胶或12%～14%的梯度胶较为适宜。

SNP分型前的PAGE检测

目的：探讨单核苷酸多态性(single nucleotide polymmphism,SNP)分型前聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyaerylamide gel electro—phoresis,PAGE)的作用。方法：对3个DNA片段(DAOA基因的片段E1和E2、RGS4基因的片段S4)的PCR产物先用PAGE分析,然后用变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)分型,并比对结果。结果：PAGE能将片段E1、E2和S4中同一位点的SNP杂合子样本和纯合子样本区分开来,还能进一步将片段S4中SNP位点的2种不同纯合子样本区分开来。结论：PAGE能提高SNP的检测效率,而且具有成本低,操作简便的特点。

二硫苏糖醇和β-巯基乙醇在SDS-PAGE电泳过程中的扩散效应

目的:二硫苏糖醇(DTT)和β-巯基乙醇(2-ME)是十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术中最常用的2种还原剂。文中旨在观察这2种还原剂在SDS-PAGE电泳过程中的扩散效应及建立规避扩散效应的方法。方法:将含有还原剂的蛋白样品和未还原蛋白样品间隔上样进行电泳,通过观察未还原样品的电泳条带来判断是否受到邻近泳道还原剂的扩散影响。结果:还原剂DTT或2-ME可扩散到邻近泳道,使未还原蛋白样品发生部分还原,扩散效应的强弱与还原剂的含量成正相关。结论:SDS-PAGE电泳过程中DTT和2-ME均存在扩散效应,在同一块凝胶上同时分离还原蛋白和未还原蛋白时,至少应该在2个泳道间设置一空白泳道,以规避扩散效应。