番茄多聚半乳糖醛酸酶cDNA的克隆及其对番茄中PG表达的反义抑制

通过PCR扩增获得了包含多聚半乳糖醛酸酶(PG)全部阅读框架的1.5kb cDNA,经限制酶酶谱和部分序列分析鉴定无误后,将其以反方向插入含两个增强子的35S启动子和Nos3＇端之间,构建成表达PG反义RNA的双元载体,经农杆菌途径转化番茄品种“丽春”,获得了60株抗卡那霉素再生植株,经PCR检测,证明有2/3的再生植株有外源PG基因导入,成熟果实的PG粗提液的SDS-PAGE分析表明:若干株系中PG蛋白量较对照有不同程度的下降。PG活性亦同步下降,其中一个株系3~#,PG酶活下降了93％。这些结果表明外源PG基因的反方向导入有效地抑制了内源PG基因的表达。

转反义PG基因番茄果实细胞结构变化的研究

经细胞学观察发现 ,转反义PG基因番茄果实在不同成熟期及存放前后 ,其果皮外面几层细胞的厚度都比未转基因的厚 1～ 5 μm ,细胞结构、细胞质和细胞核等的状态都有明显区别。尤以贮存后更为明显 ,未转基因果实的果皮细胞结构解体、细胞质凝聚、细胞核变的模糊程度都比转基因的严重。经外源乙烯处理后 ,转基因和未转基因果实的细胞结构也有相似的变化。结果表明 :反义PG基因的转入降低了PG活性 ,并且减弱了外源乙烯的作用 ,延缓了果实的衰老 ,提高了耐贮性能 。

番茄ACC合成酶基因的反义RNA-核酶嵌合基因植物表达载体的构建及对番茄的转化

将克隆的番茄 ACC合成酶基因的反义 RNA-核酶嵌合的 DNA序列用 Hind 和 Kpn I切割后重组于植物表达载体 p GA643中 ,用三亲融合法导入农杆菌 LBA4 40 4中 ,采用叶盘法转化番茄子叶 ,诱导出再生小植株 ,获得了卡那霉素的抗性植株 .提取植物总 DNA,用p GA643作探针 ,通过斑点杂交 ,已筛选出整合有外源基因的工程植株 .为进一步研究该嵌合基因对 ACC合成酶基因表达的影响及获得商品化的转基因番茄奠定了基础 .

番茄ACC合成酶cDNA克隆及其对果实成熟的反义抑制

利用ＲＴＰＣＲ技术克隆了ＡＣＣ合成酶多基因家族成员之一ＬＥＡＣＣ２编码区约１７ｋｂ的ｃＤＮＡ，经酶切图谱和序列分析鉴定无误后，反向插入到植物表达载体ｐＢｉｎ４３７中，构建了表达ＡＣＣ合成酶反义ＲＮＡ的二元载体。经农杆菌途径转化番茄“丽春”品种后，通过ＰＣＲ检测从抗卡那霉素再生植株中筛选到６株转基因植株，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交确证了外源基因是以单拷贝插入到番茄染色体中；对果实乙烯释放的测定结果表明转基因番茄果实的乙烯释放量仅为对照的３０％左右，在室温下转基因番茄果实采后保存６０ｄ以上仍然没有变红、软化。以上结果表明其反义ＲＮＡ在转基因番茄中的表达能有效地抑制乙烯的生物合成从而延缓果实成熟，表现出良好的耐储保鲜特性。对转基因植株子一代（Ｔ１）的分析结果进一步表明反义ＡＣＣ合成酶基因以典型的单基因方式传到子代。通过对子二代的分析已初步筛选到一个耐储藏的转基因番茄纯合品系。

多聚半乳糖醛酸酶反义基因在转基因番茄中的表达

番茄的多聚半乳糖醛酸是一种在果实成熟阶段特异性表达的酶。为了研究它在果实成熟中的作用，将其ｃＤＮＡ与花椰菜花叶病毒３５５启动子嵌合后，以反义基因的形式经农杆菌介导导入番茄植株，进一步分析了反义基因的整合与表达。结果表明，在转基因番茄中，反义基因的表达能明显抑制果实内源多聚半乳糖醛酸酶的活性。

番茄多聚半乳糖醛酸酶反义cDNA克隆的遗传转化与转基因植株再生

番茄多聚半乳糖醛酸酶反义ｃＤＮＡ克隆的遗传转化与转基因植株再生叶志彪，李汉霞，周国林（华中农业大学园艺系，武汉４３００７０）关键词番茄；反义ｃＤＮＡ；多聚半乳糖醛酸酶；转基因植株ＧｅｎｅｔｉｃＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＡｎｔｉｓｅｎｓｅｃＤＮＡ...

多聚半乳糖醛酸酶反义基因转化加工番茄

利用农杆菌EHA105介导转化,将PG基因转入加工番茄B04植株。通过对影响外植体转化的因素(预培养时间、侵染时间、农杆菌浓度、共培养时间)进行了深入探讨,建立了加工番茄品种B04子叶外植体的高频遗传转化体系,并通过农杆菌介导法将PG反义基因导入加工番茄品种B04,获得PG抗性植株。其最佳预培养时间为2天;当农杆菌的菌液浓度为OD600=0.6、侵染时间为10 min时转化率最高;其最佳的共培养时间为2天。对获得的41株抗卡那霉素转基因植株进行PCR检测,其中9株为阳性植株,其转化率为22%。初步证实了部分加工番茄B04植株中已导入PG反义基因。