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Isolation and characterization of two genes encoding polygalacturonase-inhibiting protein from Populus deltoides 被引量:9
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作者 Qiang Cheng Youzhi Cao Huixin Pan Mingxiu Wang Minren Huang 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第10期631-638,共8页
Polygalacturonase-inhibiting proteins (PGIPs) are extracellular proteins that belong to the leucine-rich repeat (LRR) protein superfamily. PGIPs inhibit fungal polygalacturonases (PGs) and promote accumulation o... Polygalacturonase-inhibiting proteins (PGIPs) are extracellular proteins that belong to the leucine-rich repeat (LRR) protein superfamily. PGIPs inhibit fungal polygalacturonases (PGs) and promote accumulation of oligogalacturonides, which activate plant defense responses. PGIPs play important roles in resistance to infection of pathogens. In this study, reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) and RNA ligase-mediated rapid amplification of cDNA ends (RLM-RACE) were used to isolate the full-length PGIP cDNA from Populus deltoides (GenBank accession no. of PdPGIP2 and PdPGIP4:EF684913 and EF684912). Domain analysis revealed that the deduced amino acid sequences of PdPGIP2 and PdPGIP4 had a typical PGIP topology. Phylogenetic analysis of known PGIPs indicated that the two PdPGIPs were clustered to the defense-related PGIP clade. Using real-time RT-PCR, the expression patterns of the two PdPGIPs following treatment with a fungal pathogen and defense-related signaling molecules were studied. The expression levels of PdPGIP2 and PdPGIP4 were both up-regulated when inoculated with the phytopathogenic fungus Marssonina brunnea. Therefore, it was proposed that the two PGIPs might be involved in the resistance to Marssonina brunnea in P. deltoides. 展开更多
关键词 polygalacturonase-inhibiting protein real-time RT-PCR Populus deltoides
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抗根腐病的转GmPGIP3基因小麦扬麦18的获得与鉴定 被引量:7
2
作者 党良 王爱云 +4 位作者 徐惠君 祝秀亮 杜丽璞 邵艳军 张增艳 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1833-1838,共6页
GmPGIP3是大豆的一种多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白,能够特异性地抑制部分病原真菌内切多聚半乳糖醛酸活性,从而减弱病原菌对植株的侵害。利用基因重组技术构建了GmPGIP3基因的单子叶植物表达载体pA25-GmPGIP3,通过基因枪介导法将pA25-GmPG... GmPGIP3是大豆的一种多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白,能够特异性地抑制部分病原真菌内切多聚半乳糖醛酸活性,从而减弱病原菌对植株的侵害。利用基因重组技术构建了GmPGIP3基因的单子叶植物表达载体pA25-GmPGIP3,通过基因枪介导法将pA25-GmPGIP3转入小麦品种扬麦18中。对转GmPGIP3基因扬麦18的T0至T2代植株进行PCR、Southern杂交、半定量RT-PCR和荧光定量Q-RT-PCR分析,并对根腐病进行抗性鉴定。结果表明,GmPGIP3已转入扬麦18,并在转基因小麦中遗传、转录和表达;与受体材料相比,5个GmPGIP3过表达的转基因小麦株系对根腐病的抗性有明显提高。 展开更多
关键词 多聚半乳糖醛酸抑制蛋白 Gmpgip3 转基因小麦 分子检测 根腐病 抗性
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新疆红肉苹果PGIP基因的克隆及原核表达 被引量:7
3
作者 孙华 王春燕 +5 位作者 宋杨 吴树敬 张芮 冯守千 陈晓流 陈学森 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期1-7,共7页
【目的】研究克隆新疆红肉苹果[Malus sieversii f.neidzwetzkyana(Dieck)Langenf]PGIP基因并进行原核表达,探讨其抗病机制。【方法】根据Genbank中已经发表的‘金冠’苹果PGIP保守区域设计1对特异引物,以新疆红肉苹果叶片总RNA为模板,... 【目的】研究克隆新疆红肉苹果[Malus sieversii f.neidzwetzkyana(Dieck)Langenf]PGIP基因并进行原核表达,探讨其抗病机制。【方法】根据Genbank中已经发表的‘金冠’苹果PGIP保守区域设计1对特异引物,以新疆红肉苹果叶片总RNA为模板,T/A克隆后进行序列测定,并对该序列进行分析。随后将该蛋白成熟肽cDNA片段连接到原核表达载体pET30a(+)中,构建融合表达质粒,转化到E.coli BL21(DE3)中进行表达。【结果】序列分析表明,新疆红肉苹果PGIP基因cDNA编码区全长993 bp,编码330个氨基酸残基,命名为MsPgip,GenBank登录号为JQ001783。MsPgip分子质量为36.6 kD,等电点为7.05,有6个潜在的N-糖基化位点,信号肽为N端24个氨基酸残基。该蛋白质还具有2个连续的24个氨基酸残基大小的LRR基序(LSQLKNLTFLDLSFNNLTGAIPSSLSQ LPNLNALHLDRN-KLTGHIPIS)。与已克隆的‘澳洲青苹’、‘金冠’、‘富士’苹果PGIP氨基酸序列同源性均高达99%。原核表达产物经SDS-PAGE分析表明,表达蛋白的分子质量与预期一致。【结论】克隆了新疆红肉苹果PGIP基因,并可在大肠杆菌中表达。 展开更多
关键词 新疆红肉苹果 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白 基因克隆 表达
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桃PGIP蛋白基因片段的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达 被引量:12
4
作者 古英洪 汤浩茹 张义正 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期3191-3199,共9页
【目的】克隆桃(Prunus persica)多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(polygalacturonase-inhibiting protein,PGIP)基因,并进行原核表达研究。【方法】根据李属植物pgip保守区域设计1对特异引物,以桃叶片总RNA为模板,通过RT-PCR获得了约1kb的cDN... 【目的】克隆桃(Prunus persica)多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(polygalacturonase-inhibiting protein,PGIP)基因,并进行原核表达研究。【方法】根据李属植物pgip保守区域设计1对特异引物,以桃叶片总RNA为模板,通过RT-PCR获得了约1kb的cDNA片段,T/A克隆后进行序列测定,并对该序列进行分析。随后将该蛋白成熟肽cDNA片段克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建融合表达质粒,转化到Escherichia coli Rosetta-gami(DE3)pLysS中进行表达。【结果】测序结果显示,桃多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白cDNA编码区长993bp,编码330个氨基酸残基,命名为Pppgip。PpPGIP分子量为36.4kD,等电点为7.42,信号肽为N端24个氨基酸残基,具有7个潜在的N-糖基化位点。Pppgip与李属其它pgip核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为93.2%~94.6%和89.7%~92.7%。同源树分析表明,该基因明显区别于其它pgip,与马哈利樱桃pgip的关系较近,与寿星桃、桃栽培品种‘久保’等pgip的关系都较远。该基因所编码的蛋白质的三维结构含11个α-螺旋和21个β-折叠,中心LRR结构域由10个串联的LRRs基序组成。原核表达产物经SDS-PAGE分析表明,重组蛋白主要以包涵体形式出现。【结论】克隆了桃PGIP基因,并可在大肠杆菌中表达。 展开更多
关键词 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白 基因克隆 序列分析 基因表达
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黄瓜CsPGIP基因的克隆及表达分析 被引量:4
5
作者 贾庆利 巩振辉 +1 位作者 李大伟 黄炜 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期11-16,共6页
以加工型黄瓜材料NW99为对象,利用RT-PCR技术克隆黄瓜多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因(PGIP),并分析其基因编码序列、组织表达特异性和诱导表达模式。结果表明:(1)从黄瓜中克隆到一个PGIP基因,命名为CsPGIP;CsPGIP基因全长1 026bp,读码框9... 以加工型黄瓜材料NW99为对象,利用RT-PCR技术克隆黄瓜多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因(PGIP),并分析其基因编码序列、组织表达特异性和诱导表达模式。结果表明:(1)从黄瓜中克隆到一个PGIP基因,命名为CsPGIP;CsPGIP基因全长1 026bp,读码框987bp,无内含子,编码328个氨基酸残基,具有xxLxLxxNxLt/sGxIPxxLxxLxxL结构域,属于Pgip基因家族。(2)CsPGIP基因与甜瓜PGIP基因同源性最高,与十字花科Pgip基因同源性较高。(3)CsPGIP在黄瓜各个器官都表达,但表达水平具有组织特异性,在嫩叶中表达量最高,在茎中表达量最低;该基因表达明显受到水杨酸诱导,可能在抵御外界病原菌入侵过程中起重要作用。 展开更多
关键词 黄瓜 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白 基因克隆 实时定量PCR 水杨酸
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小麦在与水杨酸诱导的应答过程中PGIP的积累 被引量:10
6
作者 阮期平 周立 刘勇 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 2000年第4期313-316,共4页
以SW8 9 2 5 89小麦品系为材料 ,利用自制的小麦抗PGIP血清和dot immunobindingassay ,并结合PGIP粗提液对endo PG的抑制实验 ,研究了小麦内源多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白 (PGIP)水平与水杨酸之间的应答关系 .发现用水杨酸处理过的PGIP粗... 以SW8 9 2 5 89小麦品系为材料 ,利用自制的小麦抗PGIP血清和dot immunobindingassay ,并结合PGIP粗提液对endo PG的抑制实验 ,研究了小麦内源多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白 (PGIP)水平与水杨酸之间的应答关系 .发现用水杨酸处理过的PGIP粗提液在NC膜上的显色斑点颜色均较H2 O处理的PGIP粗提液深 ,而且对en do PG的抑制程度也高于未用水杨酸处理的PGIP粗提液 .这充分说明水杨酸能诱导小麦内源PGIP水平稳定的提高 .此结果为进一步弄清PGIP抗病机理提供了有用的资料 .图 4表 1参 展开更多
关键词 水杨酸 诱导 pgip 小麦
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抗全蚀病、根腐病的转PgPGIP1基因小麦的获得与鉴定 被引量:4
7
作者 杨丽华 王金凤 +5 位作者 杜丽璞 徐惠君 魏学宁 李钊 马翎健 张增艳 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1576-1581,共6页
全蚀病和根腐病是小麦(Triticum aestivum)重要的土传真菌病害。PgPGIP1是人参(Panax ginseng)的一种多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白,可以抑制部分病原真菌分泌的多聚半乳糖醛酸酶的活性。本研究人工合成了PgPGIP1基因,并构建PgPGIP1基因的... 全蚀病和根腐病是小麦(Triticum aestivum)重要的土传真菌病害。PgPGIP1是人参(Panax ginseng)的一种多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白,可以抑制部分病原真菌分泌的多聚半乳糖醛酸酶的活性。本研究人工合成了PgPGIP1基因,并构建PgPGIP1基因的单子叶植物表达载体pA25-PgPGIP1,通过基因枪介导法将其转入小麦品种扬麦18中。对转PgPGIP1基因的T0至T4代植株进行PCR、RT-PCR和Q-RT-PCR分析,并对其全蚀病和根腐病抗性进行鉴定。结果表明,PgPGIP1基因能够在4个转基因小麦株系中遗传、转录与表达。与未转基因的小麦扬麦18相比,4个转基因小麦株系对全蚀病与根腐病的抗性明显提高,说明PgPGIP1表达增强了转基因小麦对全蚀病与根腐病的抗性。 展开更多
关键词 人参多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白 转基因小麦 全蚀病 根腐病 抗性
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胡萝卜抗冻蛋白失去PGIP家族抑制多聚半乳糖醛酸酶的活性(英文) 被引量:3
8
作者 张党权 王宏斌 +3 位作者 刘兵 冯冬茹 何炎明 王金发 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1027-1036,共10页
含有LRR基序的胡萝卜抗冻蛋白虽然具有抗冻活性,但却属于植物PGIP家族。胡萝卜抗冻蛋白虽然在氨基酸序列上属于PGIP家族,但却失去了抑制外源真菌的PGase活性,并且获得了一个重要的活性——抑制冰晶的生长和重结晶。胡萝卜抗冻蛋白的这... 含有LRR基序的胡萝卜抗冻蛋白虽然具有抗冻活性,但却属于植物PGIP家族。胡萝卜抗冻蛋白虽然在氨基酸序列上属于PGIP家族,但却失去了抑制外源真菌的PGase活性,并且获得了一个重要的活性——抑制冰晶的生长和重结晶。胡萝卜抗冻蛋白的这种活性的变化一直被认为是由于植物自身长期进化的结果,并认为最初的DcAFP也应当具有抑制PGase的活性。采用酵母双杂交来分析DcAFP是否还拥有PGIP的活性。通过RT-PCR克隆了真菌互格链格孢(Alternariaalternata)的PGase的cDNA,然后分别将PGase与DcAFP的完整编码框构建成酵母双杂交的捕获质粒和诱饵质粒,经过预实验表明两者都不能产生自激活作用,酵母双杂交实验表明两者不能产生相互作用,说明DcAFP完全失去了抑制PGase的活性,这种活性的丢失是由于位于β-螺旋上凹面的LRR基序中非保守的氨基酸残基发生了大量的碱性氨基酸的取代,导致结合的凹面从负电荷富集区变成了正电荷表面,从而不能通过静电作用与PGase的正电荷表面相结合。 展开更多
关键词 植物抗冻蛋白 多聚半乳糖醛酸酶 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白 LRR 酵母双杂交
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苹果PGIP基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量:8
9
作者 熊帅 张军科 谌悦 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2010年第2期123-128,134,共7页
【目的】从富士苹果幼果果实中克隆多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)基因,并进行原核表达,为进一步研究PGIP的生物学功能奠定基础。【方法】根据Genbank中已经发表的苹果PGIP基因序列设计引物,采用RT-PCR从苹果果实中扩增PGIP基因cDNA,... 【目的】从富士苹果幼果果实中克隆多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)基因,并进行原核表达,为进一步研究PGIP的生物学功能奠定基础。【方法】根据Genbank中已经发表的苹果PGIP基因序列设计引物,采用RT-PCR从苹果果实中扩增PGIP基因cDNA,回收目的基因片段并连接到pMD18-T载体,鉴定后进行测序。然后将PGIP全长cDNA和去信号肽的cDNA导入到pET-32a(+)表达载体中,分别获得融合表达质粒pET-PGIP和pET-PGIP-X,将其分别转化大肠杆菌BL21感受态细胞,用不同终浓度IPTG进行诱导表达,收集表达产物并进行SDS-PAGE电泳。对pET-PGIP-X基因工程菌表达产物的可溶性进行检测。【结果】苹果PGIP cDNA序列长为1 091 bp,编码区为993 bp,可编码330个氨基酸残基,将其命名为MdPGIP;重组表达质粒pET-PGIP和pET-PGIP-X在宿主大肠杆菌中分别表达出分子质量约49.6和46.1 ku的融合蛋白,pET-PGIP-X表达产物以包涵体的形式存在。【结论】成功克隆了苹果PGIP基因,并在大肠杆菌中获得高效表达。 展开更多
关键词 苹果 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白 基因克隆 内源多聚半乳糖醛酸酶
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云南野生中华猕猴桃PGIP基因的克隆与分析 被引量:4
10
作者 于瑶 刘小珍 +1 位作者 刘惠民 张汉尧 《经济林研究》 北大核心 2013年第4期73-77,共5页
多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)是存在于多种植物细胞壁中的一种糖蛋白,它能专一性识别真菌多聚半乳糖醛酸酶并抑制其活性,并能在一定程度上抑制真菌对植物细胞壁的降解。该蛋白在植物抵制真菌病害的发生中发挥着重要作用。文中利用PC... 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)是存在于多种植物细胞壁中的一种糖蛋白,它能专一性识别真菌多聚半乳糖醛酸酶并抑制其活性,并能在一定程度上抑制真菌对植物细胞壁的降解。该蛋白在植物抵制真菌病害的发生中发挥着重要作用。文中利用PCR技术,从抗病能力较强的云南野生中华猕猴桃中成功地克隆了多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因(PGIP)的完整开放阅框架,并对其进行了序列和BLAST比对分析,此外,还通过生物信息学分析,对该基因氨基酸序列进行了结构域分析和蛋白质高级结构预测。结果表明:所得的PGIP基因996 bp为一个完整的开放阅读框,编码332个氨基酸;该片段与其它植物中的PGIP有很高的同源性,其与美味猕猴桃的同源性最高(达99%),与美洲李、越桔灌蓝莓和葡萄的PGIP基因的同源性分别为96%、78%、72%。该基因的成功克隆与文中的分析结果,为后续的基因功能确证及猕猴桃品种改良打下了基础。 展开更多
关键词 中华猕猴桃 pgip基因 克隆 分析
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Endo-PG诱导培养小麦细胞PGIP产生的研究 被引量:3
11
作者 周立 李建吾 +1 位作者 郑远旗 余露 《生物化学杂志》 CAS CSCD 1997年第3期365-367,共3页
The activity of polygalacturonase inhibiting protein (PGIP)was assayed in four kind of cultures induced endo-polygalacturonase (endo-PG). It was discovered that endo-PG stimulated obviously the accumulation of PGIP. T... The activity of polygalacturonase inhibiting protein (PGIP)was assayed in four kind of cultures induced endo-polygalacturonase (endo-PG). It was discovered that endo-PG stimulated obviously the accumulation of PGIP. The PGIP contents of SuMai No. 3 and SA-Ⅱ cells,which are fungal disease-resistant,are higher than the contents of Mian Yang No. 11 and JingHua No.1. It is indicated in cell level that PGIP has relation to resistance of plant. 展开更多
关键词 小麦 细胞 pgip Endo-PG
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水稻多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因(Ospgip1)原核表达及编码产物生物信息学分析 被引量:2
12
作者 陈夕军 刘晓维 +3 位作者 左示敏 童蕴慧 潘学彪 徐敬友 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期136-142,共7页
据GenBank及相关文献提供的序列,从水稻基因组DNA中扩增出930 bp的Ospgip1基因完整开放阅读框。原核表达Ospgip1基因,表达产物能显著抑制水稻纹枯病菌菌丝生长及其多聚半乳糖醛酸酶活性。生物信息学分析表明,OsPGIP1为分子量32.8 kDa、p... 据GenBank及相关文献提供的序列,从水稻基因组DNA中扩增出930 bp的Ospgip1基因完整开放阅读框。原核表达Ospgip1基因,表达产物能显著抑制水稻纹枯病菌菌丝生长及其多聚半乳糖醛酸酶活性。生物信息学分析表明,OsPGIP1为分子量32.8 kDa、pI 7.26的疏水蛋白,主要位于细胞壁(55.6%),信号肽切点位于第17和18位氨基酸之间。在N端和C端各有4个半胱氨酸残基,形成3个二硫键(第56和63位、第278和298位、第300和308位氨基酸)。以α-螺旋、β-折叠和不规则盘绕等为主要结构原件,具有典型的富含亮氨酸重复(LRR)结构。相比其他植物的PGIP,OsPGIP1缺少第7个LRR。在空间上9个LRR形成类似凹陷或裂隙结构,可能是其与病原菌多聚半乳糖醛酸酶互作的活性位点区。 展开更多
关键词 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白 原核表达 生物信息学分析 纹枯病 水稻
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苜蓿多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白2(MsPGIP2)基因多态性分析 被引量:3
13
作者 桂枝 皮永硕 +2 位作者 袁庆华 曲泽鹏 高建明 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期1073-1079,共7页
本研究旨在分离苜蓿多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白2(MsPGIP2)基因的基因组序列全长,分析序列变异。首先采用引物热不对称PCR的基因组DNA步移法分离其基因组序列全长,然后通过克隆测序分析了MsPGIP2基因在3个苜蓿品种(‘润布勒’、‘苏普斯... 本研究旨在分离苜蓿多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白2(MsPGIP2)基因的基因组序列全长,分析序列变异。首先采用引物热不对称PCR的基因组DNA步移法分离其基因组序列全长,然后通过克隆测序分析了MsPGIP2基因在3个苜蓿品种(‘润布勒’、‘苏普斯坦’与‘公农1号’)中的多态性。结果显示,MsPGIP2基因的基因组DNA序列全长1 126bp,可分为信号肽、内含子和LRR区3部分。MsPGIP2基因的基因组序列中共有46个变异位点(频率>0.02)。在信号肽区,没有变异位点;在内含子区,有5个SNP位点和2个InDel变异位点;而在LRR区,共发现了39个SNP位点,其中非同义突变占61.5%。在3个苜蓿品种中共发现了15个等位基因(即单倍型),通过对LRR区核苷酸的系统发育分析将他们分成3类。结论认为,MsPGIP2基因具有较大的变异,各等位基因间发生了频繁的重组交换,是一个为适应病原微生物PG的进化而快速进化的基因。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 pgip基因 单核苷酸多态性
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紫花苜蓿PGIP同源基因克隆与序列核苷酸多态性分析 被引量:3
14
作者 桂枝 肖婷 +4 位作者 皮永硕 袁庆华 杨建翔 刘妍 高建明 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1603-1611,共9页
多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)是植物重要的防卫蛋白之一,了解PGIP基因的核苷酸序列是对其进行分子遗传学与分子生物学研究的前提与基础。本研究采用同源克隆法,从16个紫花苜蓿(Medicago sativa)品种的集群DNA中克隆了7个苜蓿PGIP基... 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)是植物重要的防卫蛋白之一,了解PGIP基因的核苷酸序列是对其进行分子遗传学与分子生物学研究的前提与基础。本研究采用同源克隆法,从16个紫花苜蓿(Medicago sativa)品种的集群DNA中克隆了7个苜蓿PGIP基因的部分基因组编码序列,分别对应于蒺藜苜蓿(M.truncatula)7个不同的PGIP基因,并命名为Ms PGIP5、Ms PGIP6、Ms PGIP7、Ms PGIP8、Ms PGIP9、Ms PGIP10和Ms PGIP11。其中,Ms PGIP5、Ms PGIP6、Ms PGIP8、Ms PGIP9和Ms PGIP11的单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)位点间的平均距离分别为20、74、34、423和21 bp,差异较大。对Ms PGIP5、Ms PGIP6、Ms PGIP8和Ms PGIP11进行荧光标记PCR单链构象多态性(FPCR-SSCP)分析,结果表明,其等位基因数目与PCR片段长度的比值分别为20、56、22和19 bp,变化趋势与这4个基因SNP位点间的平均距离基本一致。比较而言,在发现的7个苜蓿PGIP基因中,Ms PGIP9序列高度保守,Ms PGIP5和Ms PGIP11的变异较大,而Ms PGIP6与Ms PGIP8的变异中等。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 pgip 基因组序列分离 单核苷酸多态性 荧光标记PCR单链构象多态性
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油菜Bnpgip2-1基因的克隆表达与生物信息学分析 被引量:1
15
作者 陈夕军 张磊 +3 位作者 陈羽 张家豪 童蕴慧 徐敬友 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期701-706,共6页
据GenBank及相关文献提供的序列设计引物,从油菜基因组DNA中扩增出Bnpgip2-1基因完整开放阅读框。该基因全长1 068bp,与已发表的Bnpgip2基因序列(登录号:AF529694)有98%的相似性。RT-PCR分析表明,该基因(已申请序列号为KJ820998)具一个7... 据GenBank及相关文献提供的序列设计引物,从油菜基因组DNA中扩增出Bnpgip2-1基因完整开放阅读框。该基因全长1 068bp,与已发表的Bnpgip2基因序列(登录号:AF529694)有98%的相似性。RT-PCR分析表明,该基因(已申请序列号为KJ820998)具一个72bp的内含子(544-615),编码区为996bp,含4个限制性内切酶酶切位点(AvaⅠ,185;HindⅢ,536;EcoRⅠ,929;Apa LⅠ,972)。原核表达该基因,表达产物能显著抑制油菜菌核病菌多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性,抑制率达52.96%。生物信息学分析表明,表达产物Bn PGIP2-1有331个氨基酸,理论分子量为36.99k Da,p I为8.35,具强疏水性,主要存在于细胞壁。信号肽切点位于第22和23位氨基酸之间(SFS-KNL),N端和C端各存在5个和3个半胱氨酸残基,可形成3个二硫键;二级结构以α-螺旋(31.12%)、β折叠(16.01%)和无规则线圈(52.87%)为结构元件,具典型的LRR结构;三级结构为10个LRR按右手螺旋规则形成的一个开放裂隙区,可能负责其与病菌PG的互作。该基因的表达受病原菌侵染的强烈诱导,但对水杨酸(SA)处理不敏感,茉莉酸(JA)处理反而使其下调表达。 展开更多
关键词 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白 原核表达 生物信息学分析 核盘菌
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植物pgip基因特性及表达调控研究进展 被引量:3
16
作者 蒋豪 汤浩茹 《中国农学通报》 CSCD 2008年第8期63-68,共6页
多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)基因已成为植物抗真菌基因工程的研究热点之一,国内外已先后从25个属45种植物中克隆到了pgip基因或片段。截止于2008年3月1日,美国国立生物技术信息中心(The National Center for Biotechnology Informat... 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)基因已成为植物抗真菌基因工程的研究热点之一,国内外已先后从25个属45种植物中克隆到了pgip基因或片段。截止于2008年3月1日,美国国立生物技术信息中心(The National Center for Biotechnology Information,NCBI)GenBank中登记的pgip序列多达239条。本文从PGIPs的早期研究、自身特点以及表达调控方面综述了这种热点基因的研究进展,为更好的利用这一基因资源提供参考。 展开更多
关键词 植物 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白 分子特性 表达 调控
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油菜(Brassica napus L.)BnPGIP基因克隆及其表达分析 被引量:1
17
作者 周晓婴 陈松 戚存扣 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第3期488-493,共6页
以油菜品系甘蓝型油菜宁RS-1为植物材料,以南京油菜田里收集的核盘菌为致病菌,根据已经报道的油菜PGIP基因序列,设计简并引物。从宁RS-1基因组DNA中经PCR克隆到1条包含1个内含子与2个外显子的基因序列。序列比对分析显示,该基因与已公... 以油菜品系甘蓝型油菜宁RS-1为植物材料,以南京油菜田里收集的核盘菌为致病菌,根据已经报道的油菜PGIP基因序列,设计简并引物。从宁RS-1基因组DNA中经PCR克隆到1条包含1个内含子与2个外显子的基因序列。序列比对分析显示,该基因与已公布的油菜PGIP1基因的核苷酸序列和氨基酸序列同源性均达99%,编码区序列全长984 bp,编码332个氨基酸,富含亮氨酸。以翻译延伸因子EF-1α作为内标,利用半定量RT-PCR分析了BnPGIP基因在核盘菌未诱导和诱导后宁RS-1中的表达量差异。结果发现,核盘菌诱导后宁RS-1中的BnPGIP表达含量明显提高,表明宁RS-1在受到核盘菌侵染后体内的BnPGIP基因受到诱导表达。为进一步研究BnPGIP基因在抗核盘菌侵染的作用,构建了BnPGIP基因过量表达载体。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白 基因克隆 表达
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番木瓜诱导型基因CpPGIP2启动子的克隆与分析 被引量:1
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作者 申艳红 陈晓静 戴志林 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期156-163,共8页
【目的】获得诱导型基因Cp PGIP2启动子,并分析该启动子的功能。【方法】以番木瓜Cp PGIP2基因c DNA序列(HQ660394)搜索番木瓜基因组DNA序列,获得一段约2 000 bp的5’端上游DNA序列(ABIM01005077),参照该序列设计PCR特异引物,以番木瓜叶... 【目的】获得诱导型基因Cp PGIP2启动子,并分析该启动子的功能。【方法】以番木瓜Cp PGIP2基因c DNA序列(HQ660394)搜索番木瓜基因组DNA序列,获得一段约2 000 bp的5’端上游DNA序列(ABIM01005077),参照该序列设计PCR特异引物,以番木瓜叶片DNA为模板克隆该启动子,并进行生物信息学分析。将3个启动子片段替换p CAMBIA1301载体中的Ca MV 35S启动子,构建缺失启动子表达载体,以GUS瞬时表达检测缺失启动子表达活性。【结果】获得了Cp PGIP2起始密码子上游长为1 981 bp的调控序列,经分析该序列含有真菌、脱落酸、赤霉素、光照等多种响应元件,为诱导型启动子。构建了1个启动子全长表达载体和2个5’端缺失启动子表达载体,分别命名为p D0-1981、p D1-1204和p D2-261。启动子在番木瓜果肉中的瞬时表达显示,长度为1 204 bp的启动子表达活性最强。并且,该启动子在根、茎、叶、果肉和愈伤组织中均有不同程度的表达,在近外果皮的果肉处和根部表达最明显。【结论】本研究获得了Cp PGIP2启动子序列,确定了表达活性最强的启动子长度,初步分析了启动子的表达模式和顺式作用元件,为进一步深入研究Cp PGIP2基因功能以及将该启动子应用于植物基因工程育种奠定了基础。 展开更多
关键词 番木瓜 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白 启动子 调控元件 载体构建
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烟草PGIP基因在枯草芽孢杆菌中的表达
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作者 江翱 吴辉 +1 位作者 袁梦思 孙文秀 《湖北农业科学》 2015年第11期2767-2772,共6页
根据Gen Bank数据库报道的林烟草(Nicotiana sylvestris)PGIP基因c DNA序列,设计特异性引物,从普通烟草(Nicotiana tabacum)种植品种小黄金中分离得到了其g DNA序列,分析结果发现烟草PGIP基因没有内含子序列。信号肽分析结果表明,烟草P... 根据Gen Bank数据库报道的林烟草(Nicotiana sylvestris)PGIP基因c DNA序列,设计特异性引物,从普通烟草(Nicotiana tabacum)种植品种小黄金中分离得到了其g DNA序列,分析结果发现烟草PGIP基因没有内含子序列。信号肽分析结果表明,烟草PGIP基因含有一段长28个氨基酸的信号肽。将去除信号肽的烟草PGIP基因片段亚克隆至枯草芽孢杆菌表达载体p HT43中,转化枯草芽孢杆菌菌株WB600并进行IPTG诱导。SDS-PAGE电泳表明,重组菌株可成功表达目的蛋白质,分子质量符合预期大小;琼脂扩散试验结果发现,表达的烟草PGIP蛋白质能够明显抑制辣椒疫霉PGs的活性。 展开更多
关键词 烟草(Nicotiana tabacum) 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白质(pgips)基因 枯草芽孢杆菌 表达
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用于筛选植物PGIP的酵母双杂交PGase诱饵载体
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作者 张党权 谭晓风 《中南林学院学报》 CSCD 北大核心 2006年第4期5-8,共4页
对真菌抗性较强的植物能利用自身的多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(po lyga lacturonase-inh ib iting prote in,PG IP)来抑制真菌分泌的、降解植物细胞壁的主要物质——多聚半乳糖醛酸酶(po lyga lacturonase,PG ase)的活性.目前,快速、有... 对真菌抗性较强的植物能利用自身的多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(po lyga lacturonase-inh ib iting prote in,PG IP)来抑制真菌分泌的、降解植物细胞壁的主要物质——多聚半乳糖醛酸酶(po lyga lacturonase,PG ase)的活性.目前,快速、有效的获取植物PG IP的方法是通过酵母双杂交技术来进行的,而这首先要获得真菌PG ase的酵母诱饵载体.以真菌——互格链格孢PG ase的cDNA的为基础,将其克隆到M ATCHM AKER L exA Tw o-Hybrid System的诱饵载体中,并将诱饵载体(pL exA-PG ase)成功转化酵母菌株EGY 478[p8op-lacZ],经检测无自激活作用,可直接用于快速、大量地筛选植物PG IP. 展开更多
关键词 遗传育种 多聚半乳糖醛酸酶 酵母双杂交 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白 诱饵载体
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