酶解糖化滇黄精多糖的结构表征及其免疫活性

该论文研究了酶解糖化下的滇黄精多糖结构和免疫活性,以探究酶解糖化下的黄精多糖结构特征及免疫活性的影响。结果表明,酶解糖化黄精多糖(SPKP)的多糖和还原糖含量分别为94.05%、4.1%。多糖结构分析表明,SPKP的红外光谱在1016~1147和931 cm-1处有吡喃糖特征吸收峰;单糖组成及摩尔比为阿拉伯糖:半乳糖:葡萄糖:甘露糖:果糖=0.032:0.117:0.419:0.048:0.383,重均分子量(Mw)为3820 u。甲基化结果表明SPKP主要的糖苷键连接方式为(→4-Glcp-1→),占比47.1%,分支度为34.1%结合碘碘化钾和刚果红实验结果可以推测SPKP是一种含有复杂分支的三股螺旋多糖。RAW264.7细胞实验结果表明,酶解糖化黄精多糖在比较广的浓度范围内无毒性,均能促进细胞增殖,且有较高的细胞吞噬能力和NO水平,因此可以推测SPKP具有较好的免疫活性,且与其多糖结构有一定的关系。该研究可以为多糖与免疫活性的构效关系以及黄精新炮制方法的开发提供一定参考。

滇黄精多糖I的分离纯化及结构研究

以滇黄精为材料,经热水提取,乙醇沉淀和二乙氨基乙基(DEAE)纤维素柱、Sepha-dex柱层析分离得到3个多糖组分(PKPI,PKPⅡ及PKPⅢ),其中滇黄精多糖I(PKPI)主要由葡萄糖组成,相对分子质量M约为8100。经酸水解、乙酰化、甲基化反应、红外吸收光谱(IR)、核磁共振氢谱(1HNMR)、气相色谱(GC)及气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)分析证明其化学结构为以α-(1→4)葡萄糖为主链,并在6-O上有少量短支链。

不同基原与产地的黄精对比研究

目的对不同产地黄精药材进行多糖和浸出物含量测定,为黄精药材的优选提供参考。方法在全国范围收集黄精样品,用紫外分光光度法测定黄精中多糖含量,用稀乙醇作为溶剂测定黄精浸出物。结果野生滇黄精多糖含量在11.01%~17.22%,浸出物含量46.59%~58.16%,根茎繁殖和种植的滇黄精优于野生滇黄精;野生多花黄精多糖含量在10.39%~22.75%,浸出物含量48.67%~63.90%;野生黄精多糖含量在6.34%~16.79%,浸出物含量48.66%~63.09%。结论野生品种黄精多糖含量大小顺序为多花黄精>滇黄精>黄精,浸出物含量未见明显规律。品种种植中,贵州产滇黄精多糖含量与浸出物含量均较高,其次为多花黄精。

滇黄精不同外植体无菌体系的建立

目的:建立滇黄精外植体组织培养再生体系,为完善无菌快繁技术体系提供技术基础。方法:以根状茎、叶、花药为外植体,就不同的灭菌方案、不同浓度的激素对外植体进行诱导试验。结果:根状茎芽点最好的灭菌方案为75%酒精30s+0.2%HgCl2 15min的处理组合,诱导芽点生长的适宜培养基为6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+2,4-D 0.5mg/L;嫩叶片最佳的灭菌处理为0.1%HgCl2 13min,可控制污染率为18.7%,较好的诱导培养基为6-BA0.5mg/L+NAA1.0mg/L+2,4-D3.0mg/L。75%酒精20s+0.1%HgCl210min灭菌处理是花药较理想的灭菌方案,以KT1.0mg/L+2,4-D3.0mg/L为最适宜的诱导愈伤组织培养基。结论:试验中不同外植体均可完成再生体系。

黄精的本草考证

目的:研究本草中记录的中药黄精的基源植物,对黄精进行全方位的本草考证,为中药黄精提供文献依据。方法:查阅古籍,从源流、名称、产地、功效考证黄精。结果:通过翻阅历代文献以及《中国植物志》考证出现代药用黄精的品种来源有三种:多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua,黄精,Polygonatum sibiricum Red.滇黄精Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl。结论:中药黄精的疗效好,用量广,作为药食两用的植物,具有良好的发展及研究前景。

4个不同花色滇黄精品系花粉形态特征的电镜扫描分析

[目的]为滇黄精花粉形态学研究及进一步的分类和评价提供参考.[方法]选择4个不同花色的滇黄精品系,在植株形态比较的基础上,利用扫描电镜对花粉形状、外壁纹饰、极轴长(P)、赤道轴长等方面进行观察描述和比较.[结果]P1、P2和P3这3个品系之间除了花色的差异,在多数植物学特征性状上没有显著差异,而P4具有植株较矮、叶片窄小、花被短小以及根茎呈圆柱状、其横切面黄色等特点;滇黄精花粉粒大,长球形,极面观为椭圆形或纺锤形,具远极单沟,沟缘整齐,沟膜较清晰,无萌发孔,外壁很薄,两层,外壁表面具细网状雕纹;4个品系的花粉大小及形态结构上差异不大,花粉长68~ 70 μm,极轴59~ 72 μm,赤道轴23~31 μm,极轴(P,μm)×赤道轴(E,μm)分别为65 μm × 25 μm、70μm×28 μm、64μm×26μm、66 μm×26μm,P/E为2.5~2.6.[结论]尽管4个滇黄精品系花色迥异,但在花粉大小及形态结构上差异不大,难以进行定性和定量的比较.

Box-Behnken响应面法优化滇黄精产地加工炮制一体化工艺对黄精多糖的影响

目的:运用Box-Behnken响应面法优化滇黄精产地加工炮制一体化工艺。方法:采用蒽酮-硫酸紫外分光光度法检测,黄精多糖含量为评价指标。单因素试验确定因素最低水平和最高水平,结合Box-Behnken中心组合设计,对滇黄精蒸制时间、切片厚度、干燥温度3个因素进行优化。结果:滇黄精产地加工炮制一体化优化工艺为蒸制时间22 min、切片厚度3.6 mm、干燥温度61℃。优化工艺检测黄精多糖质量分数为12.12%,与预测值相接近,实验所建模型准确可靠。结论:Box-Behnken响应面优化滇黄精产地加工炮制一体化工艺切实可行,为筛选适宜滇黄精产地加工炮制一体化方法研究提供参考。

不同炮制方式对黄精有效成分含量的影响

以滇黄精为对象,研究九蒸九制过程中有效成分含量的变化,探究出滇黄精的最佳炮制工艺。试验中选取蒸制处理方法,采用紫外-可见分光光度法研究九蒸九制过程中多糖、总皂苷和蒽醌类化合物的含量变化。结果表明,随着蒸制处理次数的增加,滇黄精多糖的含量呈现出先下降后趋于稳定的变化,蒽醌类化合物含量呈下降趋势,总皂苷含量呈现出先上升后趋于稳定的变化。蒸制处理对滇黄精有效成分含量产生了一定影响,蒸制时长和次数并不是越多越好。研究结果为黄精的炮制工艺和高品质黄精产品开发提供了依据。

不同种植模式及种植年限对滇黄精产量及品质的影响

在云南省普洱市益智乡、糯扎渡乡和威远乡采集滇黄精样品36份,采用大田种植和林下种植两种模式,测定两种种植模式下不同种植年限(3、4、5和6 a)的产量,及其折干率、浸出物及多糖含量。结果显示:两种种植模式下,种植3~6 a生滇黄精块径数量为7~17.33个/株,鲜重为0.36~1.17 kg/株,折干率为18.87%~33.33%;两种种植模式均是5 a生产量最高,且大田模式产量高于林下模式;大田模式4 a生滇黄精折干率最大值为24.39%,而林下模式4 a生滇黄精折干率最大值为33.33%;大田模式浸出物明显高于林下模式,且6 a生采收时,最大值可达到91.8%;林下模式多糖含量(13.74%~17.40%),整体高于大田模式多糖含量(9.10%~13.52%)。

云南不同种植基地滇黄精中多糖含量测定分析

目的:研究云南不同种植基地滇黄精中多糖的含量,为滇黄精的开发利用提供参考。方法:以D-无水葡萄糖为对照品,采用苯酚-硫酸显色,紫外分光光度法进行测定,检测波长为487 nm。结果:云南不同种植基地滇黄精中多糖含量有一定差异,11批药材有10批多糖含量达到药典含量标准。结论:云南不同种植基地滇黄精质量整体较优,人工种植滇黄精是解决资源紧缺的可行措施。

滇黄精炮制前后化学成分变化研究

目的探究滇黄精Polygonatum kingianum传统炮制过程化学成分变化规律。方法按照九蒸九晒法进行滇黄精炮制,应用分光光度法和HPLC测定炮制过程中总多糖、总皂苷、总多酚、总黄酮和游离氨基酸的含量。应用UPLC-MS/MS的广泛靶向代谢组学技术检测原料和炮制后的代谢产物。结果随着炮制次数的增加,颜色逐渐加深,第3次蒸制后为深褐色,第4次至炮制结束缓慢转变为黑色。滇黄精原料具有麻味,第4蒸之后麻味消失,变为酸甜味。炮制过程中多糖和16种游离氨基酸含量降低,总皂苷、总黄酮和总多酚含量增加。广泛靶向代谢组学共检测到419个代谢物,氨基酸及其衍生物66个,脂质65个,酚酸类52个,黄酮类51个,有机酸42个,生物碱41个,核苷酸及其衍生物32个,甾体9个,木脂素和香豆素7个,异黄酮1个,萜类3个,其他类物质50个。结论系统阐述了滇黄精九蒸九晒炮制过程中化学成分的变化,九蒸九晒对滇黄精中的化学成分影响较大,随着炮制时间的增加,氨基酸及其衍生物和生物碱类化合物的相对丰度降低,有机酸和酚酸类相对丰度增加等。该研究可为炮制滇黄精有效成分的筛选与质量评价提供参考,同时差异性成分的发现为研究滇黄精生熟饮片中差异性物质的分析提供新思路,对滇黄精的扩大开发利用有重要意义。

光照胁迫对滇黄精多糖代谢酶活性的影响

为分析光照胁迫对滇黄精根茎多糖含量及代谢酶相关活性的影响,本研究以滇黄精为试材,利用遮阳网形成不同的光照梯度种植滇黄精。采用分光光度法测定滇黄精根茎多糖含量和蔗糖代谢相关酶(蔗糖合成酶SS,蔗糖磷酸合成酶SPS,蔗糖中性转化酶NI,蔗糖酸性转化酶AI,尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶UGP)活性。结果表明,不同的光照胁迫对蔗糖代谢酶活性的影响不同,其中在20%透光率光照条件NI和AI活性最高,100%透光率强光照下SS、SPS和UGP活性最高。随着光照强度的增加,SS、SPS与UGP活性升高,NI和AI活性降低。通过光照强度与5种酶活性的相关性分析发现,光照强度与SS活性呈正相关。本研究表明光照能影响蔗糖代谢酶的活性,适度的光照强度有利于滇黄精根茎多糖的积累,合理调控光照强度对滇黄精多糖的积累和提高滇黄精药材的质量有指导意义。本研究可为滇黄精拟境栽培和仿野生栽培提供了基础数据和理论依据。

不同产地滇黄精丛枝菌根真菌、深色有隔内生真菌定殖调查及与主要功效成分含量相关性分析

目的调查不同产地滇黄精根系中丛枝菌根真菌(AMF)和深色有隔内生真菌(DSE)定殖情况,并探讨其与主要功效成分之间的相关性。方法以产自于云南省5个样地的滇黄精为研究对象,采用碱解离-酸性品红染色法,调查AMF和DSE在滇黄精须根部位的定殖情况,并对典型形态结构进行拍照分析;采用硫酸苯酚法、香草醛-冰醋酸-高氯酸比色法、分光光度法和醇溶热浸法测定滇黄精根状茎中多糖、薯蓣皂苷元、总黄酮和浸出物含量,并通过皮尔森相关系数法分析AMF及其典型结构定殖率、DSE及其典型结构定殖率与4种功效成分含量之间的相关性。结果在5个样地中,AMF和DSE在滇黄精须根中的平均定殖率范围分别为26.25%~57.54%、31.67%~45.19%,其中样地红河州蒙自县(HHMZ)AMF和DSE定殖率均高于其他样地。4种功效成分与AMF、DSE定殖率及典型结构定殖率之间均呈正相关,其中多糖、薯蓣皂苷元和总黄酮含量与AMF、DSE定殖率相关性相对较高,AMF/DSE相关系数分别为0.838/0.887、0.819/0.703、0.785/0.855,且多糖含量与AMF菌丝定殖率、DSE定殖率呈显著相关。此外,AMF及典型结构定殖率与DSE及典型结构定殖率之间、4种功效成分含量两两之间均存有较高的相关性。结论AMF和DSE在滇黄精须根中有着较高的定殖率,且与主要功效成分含量之间呈正相关。本研究为实施滇黄精生态种植、采用生物手段增产增收提供了数据支持和实验依据。

重楼花叶坏死病毒侵染滇黄精的首次报道

滇黄精(Polygonatum kingianum Coll. et Hemsl)为百合科(Liliaceae)黄精属(Polygonatum)多年生草本植物,属于药食两用资源。用于补气养阴、健脾、润肺、益肾,现代药理研究发现具有抗氧化、抗病毒、抗肿瘤等作用。近年滇黄精人工种植发展迅速,病虫害问题凸显。2019-2020年在云南曲靖、昆明滇黄精种植基地调查发现滇黄精表现花叶、褪绿、叶片皱缩、植株矮小等症状(图1-A),该病害田间发病较为普遍,不同地块发生率在5%~15%,一些地块出现集中发病现象。为明确病原种类,本研究利用透射电子显微镜观察、转录组测序、序列分析,对侵染滇黄精的病毒进行鉴定。

普洱市滇黄精不同种植模式病虫害发生与防治

为了掌握滇黄精(Polygonatum kingianum Coll. et Hemsl.)不同种植模式下病虫害的发生情况,通过普查和样地调查相结合的方法对普洱市3个滇黄精种植基地进行调查。调查结果表明,3个种植基地滇黄精病虫害种类共15种,其中虫害9种,病害6种。大田种植基地病虫害发生最为严重,共有病虫害12种,其中重度危害2种,中度危害2种;林下种植基地病虫害4种,均为轻度危害;茶地套种基地病虫害8种,其中重度危害1种,中度危害2种。通过调查,掌握了普洱市3种种植模式下滇黄精病虫害发生种类及发生规律,了解了普洱市滇黄精病虫害防治现状,并提出了防治建议。