3种何首乌单体成分致SD大鼠急性肾脏损伤组织病理学研究

目的研究连续14 d经口灌胃给予SD大鼠3种何首乌单体成分体内急性肾毒性形态学特征。方法50只雄性SD大鼠随机分为对照组,大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷28、280、1120 mg·kg^(-1)剂量组,大黄素型单蒽酮6.5、65、650 mg·kg^(-1)剂量组及大黄素甲醚6.5、65、650 mg·kg^(-1)剂量组。连续14 d经口灌胃给予,给药结束后进行动物麻醉及剖检,并对主要脏器进行大体病理学检查及称重,而后对固定的组织脏器进行制片和组织病理学检查。结果大体病理学检查仅大黄素型单蒽酮650 mg·kg^(-1)剂量组1只大鼠双侧肾脏可见白色结节,对照组,大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷3个剂量组,大黄素型单蒽酮6.5、65 mg·kg^(-1)剂量组以及大黄素甲醚3个剂量组的大鼠均未见大体病理学改变。与对照组相比,3种何首乌单体成分各剂量组动物肾脏的绝对质量及脏/体比均未见统计学差异(P>0.05)。组织病理学检查发现大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷可引起肾脏肾小管透明小滴生成;大黄素型单蒽酮可引起肾脏肾小管色素沉着,并且加重肾小管嗜碱性变;大黄素甲醚未对肾脏造成明显的急性损伤。结论连续14 d经口灌胃给药,大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和大黄素型单蒽酮可引起SD大鼠肾脏发生一定的形态学改变,而大黄素甲醚未对SD大鼠肾脏造成形态学改变。

HPLC法测定生发散中羟芪衍生物的含量

目的:建立一种测定生发散中何首乌特征成分2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量的方法。方法:采用Hypersil BDSC18柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相为乙腈-水(18:82);紫外检测波长为320nm。结果:线性范围为0.45-2.25μg,r=0.999 8,回收率99.5％,RSD为1.2％(n=6)。结论:本法测定生发散中2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量,操作简便,结果准确、可靠。

基于细胞色素氧化酶CYP2D6的何首乌肝细胞毒性及相关成分研究

目的探究何首乌及其主要成分对人肝细胞L02中细胞色素氧化酶CYP2D6 mRNA表达的影响以及抑制CYP2D6活性或表达对何首乌肝细胞毒性的影响及相关成分辨识。方法利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)确定何首乌水提物(Polygoni Multiflori Radix,PMR)及其主要成分对L02细胞CYP2D6 mRNA表达的影响;使用CYP2D6抑制剂奎尼丁初步探究PMR对CYP2D6低活性L02细胞系的细胞毒作用;构建CYP2D6沉默的L02细胞系L02-shCYP2D6,进一步研究L02细胞中CYP2D6表达降低对PMR及其主要成分肝细胞毒性的影响;可能的肝细胞毒性成分与人肝微粒体进行体外孵育,通过考察加入不同CYP450酶特异性抑制剂对其代谢消除率的影响,探究影响其代谢的主要CYP450酶。结果在实验浓度下,PMR和芦荟大黄素(AE)对CYP2D6 mRNA表达有显著抑制作用(P<0.01),大黄素(EM)无明显影响,2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(TSG)仅在高浓度有一定激活作用,其余浓度无影响;PMR联合奎尼丁作用于L02细胞,发现PMR在高浓度下对L02细胞有一定毒性(P<0.01),各浓度抑制剂与之联用后均明显加重了其肝细胞毒性(P<0.01);PMR及其主要成分作用于CYP2D6敲低的L02细胞系,除TSG在高浓度下提升了肝细胞毒性外(P<0.01),PMR、EM、AE在实验浓度范围内肝细胞毒性均显著增加(P<0.01);人肝微粒体体外孵育实验显示,CYP2D6为EM、AE重要的代谢酶。结论PMR能够抑制肝细胞中CYP2D6的表达,而CYP2D6的低活性或低表达能够加重PMR肝细胞毒性,其中主要的毒性成分为EM和AE。