基于转运体的何首乌致肝损伤作用机制探讨

目的:阐明长期给药何首乌醇提物(PME)和水提物(PMW)致大鼠肝损伤的可能机制。方法:分别制备PME和PMW。雄性SD大鼠随机分为对照组、阳性对照异硫氰酸α-萘酯(ANIT 100 mg·kg)组、PMW组(15 g·kg)、PME组(12 g·kg)。PME、PMW组大鼠给药剂量相当于60 g·kg生药量,约为临床最大量的110倍,灌胃给药42 d,每日给药1次。ANIT组于第40天灌胃给药1次。采用试剂盒方法检测大鼠血清生化指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆汁酸(TBA)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)水平;采用苏木素-伊红(HE)染色法检测大鼠肝脏病理变化;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定给药后大鼠肝脏组织中胆汁酸、胆红素代谢相关转运体有机阴离子转运多肽1a1(OATP1a1)、OATP1b2、多药耐药相关蛋白2(MRP2)、MRP3、胆盐外排泵(BSEP)、Na~+-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、P-糖蛋白(P-gp)mRNA表达水平。结果:与对照组比较,PMW组大鼠血清中AST水平显著降低(P<0.05),ALT和ALP水平显著升高(P<0.05);PME组大鼠血清中AST水平显著降低(P<0.05),ALT、TBA和ALP水平显著升高(P<0.01);PMW组于PME组TBIL水平差异无统计学意义。病理结果显示,PME、PMW给药后均可引起不同程度的肝损伤,并且PME组表现更为严重。qRT-PCR结果表明,PMW和PME可同时影响胆红素和胆汁酸代谢过程中摄取和外排转运体的表达,均可显著下调外排转运体MRP2、BCRP mRNA表达水平,上调摄取转运体OATP1a1、OATP1b2 mRNA表达水平;PME可显著下调BSEP、P-gp、NTCP mRNA表达水平;PMW可显著上调NTCP、BSEP、P-gp mRNA水平;两者对MRP3 mRNA表达水平影响差异无统计学意义。结论:经过长期诱导后,PME、PMW均可引起大鼠肝损伤,其作用机制与影响胆红素和胆汁酸相关转运体相关,PME和PMW引发肝损伤程度存在差异,可能与两者对具体转运蛋白的作用不同相关。

何首乌炮制工艺的研究

目的:优化何首乌高压炮制工艺,比较其与传统炮制工艺的差异。方法:采用正交设计,以水浸出物、二苯乙烯苷、水溶性糖含量为指标优化何首乌高压炮制工艺;比较高压炮制品与传统炮制品各指标含量、高效液相指纹图谱、不同分子量糖百分含量比的差异。结果:高压炮制何首乌影响因素大小依次为蒸制温度>蒸制时间>干燥温度;高压炮制法和传统炮制法热动力过程不同,所炮制的何首乌无论是醇溶性成分变化还是多糖分子量变化都存在差异。结论:高压炮制法能否代替传统炮制法,需药效学的进一步验证。

何首乌提取物大鼠体内组织蓄积比较研究

目的:旨在通过考察何首乌70%乙醇提物(PME)和水提物(PMW)在大鼠体内不同组织的成分蓄积差异,推测何首乌引起不良反应的原因。方法:建立大鼠不同组织中二苯乙烯苷、大黄素和大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)定量分析方法;并定量分析连续42 d灌胃PME和PMW后大鼠肝、肾、血浆和胆汁中3个成分的蓄积情况。结果:PME给药组大鼠体内不同组织中相同成分蓄积量明显高于PMW给药组。2个给药组中3个成分选择性蓄积的靶器官基本相同,二苯乙烯苷主要蓄积在肝脏中,大黄素主要蓄积在肾脏中,大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷主要蓄积在胆汁中,而血浆中3个成分的含量均较低。结论:何首乌中二苯乙烯苷、大黄素和大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷在大鼠体内的蓄积情况具有明显的组织选择性。与PMW给药组相比,PME组大鼠给药后体内蓄积成分含量高,可能是其导致临床不良反应的主要原因。其中,二苯乙烯苷大量蓄积于大鼠肝脏中,成为何首乌引发肝损伤的重要潜在毒性物质;大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷主要蓄积在胆汁中,有引发胆汁淤积的风险;大黄素主要蓄积部位为肾脏,其与肝毒性是否直接相关仍需进一步探讨。

制何首乌质量标准的初步研究

用偏光显微镜观察了淀粉粒在何首乌炮制过程中的变化，并结合测定水溶性浸出物含量，能有效地控制何首乌炮制质量。

制何首乌多糖的超声提取工艺

目的:优选超声提取制何首乌中多糖的最佳工艺。方法:采用正交设计的方法,考察提取时间、提取温度、料液比、提取次数对制何首乌多糖得率的影响,优选出最佳的超声提取工艺,并与热水浸提法进行比较。结果:超声提取的最佳条件为用25倍的水,70℃超声提取,提取时间50 min,提取2次,多糖的得率20.04%,与热水浸提法相比提取时间明显减少。结论:该方法快速、高效、可行。

生、制何首乌水提物改善MCD饲料诱导小鼠非酒精性脂肪性肝炎的研究

该研究观察生何首乌和制何首乌水提物对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)的改善作用及其初步机制。采用蛋氨酸胆碱缺乏饲料(methionine-choline-deficient diet,MCD)喂养小鼠6周进行造模,开始造模2周后小鼠灌胃50,100,200 mg·kg^-1的生何首乌水提物(Polygoni Multiflori Radix water extract,PMRWE)或制何首乌水提物(Polygoni Multiflori Radix Praeparata water extract,PMRPWE),连续给药4周。6周后结束实验,过程中持续监测小鼠体质量变化并记录;检测血清生化指标谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)与谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)的活力;进行肝脏病理切片染色观察以及NAFLD活动性评分(NAFLD activity score,NAS)的计算;检测肝组织中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,甘油三酯(triglyceride,TG)和游离脂肪酸(non-esterified fatty acids,NEFA)的含量,并进行肝组织油红O染色观察;应用荧光实时定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)法检测肝组织中β氧化相关分子mRNA的表达。结果显示,100,200 mg·kg^-1的PMRWE及50,100,200 mg·kg^-1的PMRPWE能够改善MCD诱导NASH病变中的肝损伤;100,200 mg·kg^-1的PMRWE及50,100,200 mg·kg^-1的PMRPWE能够减少MCD诱导NASH病变中肝脏的脂质堆积;不同剂量的PMRPWE均能够逆转MCD诱导NASH病变中肝组织中下降的β氧化相关分子mRNA的水平。以上研究表明,PMRPWE与PMRWE能够通过促进肝脏脂肪酸β氧化,减少肝脏脂质累积,减轻肝脏损伤,从而发挥改善NASH的作用,且PMRPWE的作用明显优于PMRWE。