何首乌毛状根培养及其活性成分的产生

利用发根农杆菌LBA940 2诱导药用植物何首乌产生毛状根。PCR扩增和Southern印迹杂交实验证实发根农杆菌中Ri质粒的T DNA片段已整合进入植物核基因组中。经过基本培养基的筛选和毛状根生长动力学的考察 ,确立了何首乌毛状根在MS培养基中的最佳继代时间为 30d左右。HPLC实验测定结果显示 ,毛状根培养物中大黄酸的含量是原植物的 2

何首乌毛状根的诱导及其培养

利用发根农杆菌LBA940 2和R16 0 1诱导药用植物何首乌产生毛状根。由PCR扩增和Southern杂交证实 ,由LBA940 2诱导的毛状根整合了Ri质粒的TL DNA片段 ;冠瘿碱的高压纸电泳证实 ,由两种菌诱导的毛状根整合了Ri质粒的TR DNA片段。毛状根经抗生素和温度除菌后 ,表现出粗壮、绒毛密集、分枝多 ,且在无激素的培养基上能够快速稳定繁殖的特性。经筛选得到何首乌毛状根优良离体培养系PC9e和PC1e。

白首乌C-21甾体苷体外抑制大鼠胶质瘤细胞生长的作用

目的:评价白首乌C-21甾体苷(CGB)体外抑制大鼠胶质瘤C6细胞生长的作用。方法:C6细胞在CGB处理24、48、72 h后,以MTT法检测细胞活性;AnnexinV/PI双染或用PI单染后,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期。结果:CGB 30、60、120 mg/L显著抑制C6细胞活性(P<0.001),呈浓度、时间依赖性;CGB 60、120 mg/L显著提高细胞凋亡率(P<0.001),并能明显阻滞细胞周期,增加G0/G1期细胞比例(P<0.05),降低S期细胞比例(P<0.01)。结论:CGB能显著抑制体外培养的大鼠胶质瘤细胞的生长,并能诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期。

转基因何首乌毛状根化学成分的研究

目的研究转基因何首乌毛状根中的化学成分。方法采用硅胶、Sephadex LH-20、ODS柱色谱等方法分离何首乌毛状根中的化学成分,并根据理化性质和波谱数据鉴定其化学结构。结果从何首乌毛状根60%乙醇提取物中分离得到了12个化合物。利用理化性质及波谱技术确定其结构分别为:2,3,5,4'-四羟基反式二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(1)、没食子酸(2)、没食子酸甲酯(3)、3,5-二羟基苯甲酸(4)、丁香酸(5)、对羟基苯甲酸(6)、胡萝卜苷(7)、β-谷甾醇(8)、豆甾醇(9)、烟酸(10)、碳直链十七酸(11)、碳直链三十一酸(12)。结论上述12个化合物均为首次从转基因何首乌毛状根中分离得到;化合物3,4,5,6为首次从该种植物中分离得到。

制首乌对亚急性衰老大鼠血清乳酸脱氢酶活性及胸腺、脾脏质量的影响

[目的]探讨不同蒸制时间制首乌对亚急性衰老大鼠抗衰老作用,并探讨最佳蒸制时间.[方法]取Wistar系大鼠,随机分为正常组、模型组(每日给予D-半乳糖50mg/kg)、人参皂苷组(每日给予人参皂苷100mg/kg,D-半乳糖50mg/kg)、生首乌组(每日给予生首乌4.5g/kg,D-半乳糖50mg/kg)、黑豆汁制首乌0,2,4,6,8,10h(蒸制时间)组(每日给予制首乌4.5g/kg,D-半乳糖50mg/kg),均连续给予42d.末次给药后采血,测定血清乳酸脱氢酶活性,剖取胸腺及脾脏,称取胸腺及脾脏质量.[结果]不同蒸制时间黑豆汁制首乌组大鼠血清乳酸脱氢酶活性均显著低于模型组,胸腺及脾脏质量均显著高于模型组.[结论]黑豆汁制首乌可延缓D-半乳糖所致大鼠的衰老.

不同蒸制时间首乌对鼠肠蠕动的影响

[目的]探讨不同蒸制时间的首乌对鼠肠蠕动的影响.[方法]采用肠道炭末推进法分析不同蒸制时间首乌对小鼠排便次数、小肠墨汁推进率和大鼠结肠墨汁推进率的影响.[结果]生首乌组及清蒸制2,4,6 h组小鼠排便次数增加,与生理盐水组比较有显著性差异;生首乌组及清蒸制2,4,6,8 h组大、小鼠肠推进率较生理盐水组明显增加,相比较有显著性差异.[结论]生首乌及蒸制2,4,6,8 h的制首乌具有促进鼠肠蠕动的作用,而蒸制10 h的制首乌的肠蠕动作用则明显减弱,故制首乌的最佳蒸制时间为10 h.

润燥止痒胶囊致急性肝衰竭

1例25岁女性患者因湿疹、荨麻疹遵医嘱服用润燥止痒胶囊（4粒，3次/d），1个月余后出现乏力、皮肤及巩膜黄染，食欲差，尿液变黄。实验室检查示丙氨酸转氨酶2211 U/L，天冬氨酸转氨酶3977 U/L，总胆红素299.0μmol/L，直接胆红素157.2μmol/L。入院诊断：急性肝衰竭（药物性）。给予保肝、降酶、退黄治疗。入院第6天患者出现发热、呕吐和腹胀，腹腔积液检查示细胞总数2110×10^6/L，白细胞计数1200×10^6/L，中性粒细胞0.80，诊断为原发性腹膜炎，给予抗感染治疗。第7天患者烦躁不安，反应迟钝，血氨107μmol/L，诊断为肝性脑病，给予脱氨治疗；第9天患者呈昏睡状态，呼吸困难，行气管插管；第10天患者神志不清，压眶无反应，双侧瞳孔散大，对光反射迟钝；第11天高热伴血压下降，血氨306μmol/L，诊断为肝性脑病（ IV期），给予药物、灌肠和连续血液滤过等治疗；第12天患者终因腹腔感染致感染性休克死亡。

制何首乌与白蒺藜联用致急性肝衰竭

1例14岁女性患儿服用制何首乌和白蒺藜煎剂治疗白癜风（剂量不详）。38 d后出现巩膜及皮肤黄染,42 d后出现意识障碍。实验室检查：外周血白细胞计数13.8×10~9/L,凝血酶原时间27.6 s,凝血酶原活动度24%,活化部分凝血活酶时间75.7 s,纤维蛋白原1.08g/L,丙氨酸转氨酶510 U/L,天冬氨酸转氨酶254 U/L,总胆红素395.7μmol/L,直接胆红素319.4μmol/L,血氨65μmol/L;尿胆红素（＋＋＋）。诊断为药物性肝损伤,急性肝衰竭,肝性脑病。给予谷胱甘肽、丁二磺酸腺苷蛋氨酸、六合氨基酸、盐酸纳洛酮、醒脑静、乙酰谷酰胺、二氯醋酸二异丙胺、多烯磷脂酰胆碱、门冬氨酸鸟氨酸、奥美拉唑钠、甘露醇静脉滴注,乳果糖口服溶液鼻饲,间断输注新鲜冰冻血浆并行血浆置换。第5天患儿肝功能改善,意识转清;第16天痊愈。

何首乌单体成分对肝组织及细胞损伤的研究

目的探究何首乌三种单体成分二苯乙烯苷,大黄素,儿茶素等对肝组织及细胞损伤的情况。方法利用48只老鼠随机分为二苯乙烯苷组、大黄素组、儿茶素组、对照组,每组12只,二苯乙烯苷组、大黄素组、儿茶素组按照剂量1 g/kg,对照组给予相应量生理盐水,对大鼠连续灌胃28 d。给药过程中,观察大鼠一般状态。末次给药结束后,检测血清肝功能相关生化指标、HE染色观察肝组织病理形态学变化、Western blot检测肝组织凋亡相关蛋白表达。利用人正常肝细胞系LO2细胞,如动物实验一般分为四组。二苯乙烯苷组、大黄素组、儿茶素组分别采用7个不同浓度培养24 h及48 h,对照组加入生理盐水培养同样时间。利用CCK8观察细胞增殖情况,利用PCR检测凋亡相关因子mRNA表达情况。结果喂养28 d后,与对照组比较,二苯乙烯苷组、大黄素组、儿茶素组三组大鼠体重、摄食量、均无显著差异(P>0.05),大黄素组、儿茶素组大鼠肝组织可见病理性肝损伤现象,肝脏生化指标异常(P<0.05),且凋亡蛋白表达显著增高[Bcl-2:0.450±0.040比0.340±0.030、0.410±0.070,P<0.05;Caspase-3:0.030±0.000比0.760±0.030、0.270±0.060,P<0.01;Bax:0.020±0.001比0.440±0.030、0.150±0.040,P<0.01。];二苯乙烯苷组大鼠肝组织表现正常。正常肝细胞经过处理后,与对照组比较,大黄素组、儿茶素组显示二种单体成分呈浓度依赖性、时间依赖性抑制LO2正常肝细胞增殖(P<0.05),且肝细胞凋亡因子mRNA表达显著升高[Bax:0.89±0.12比1.74±0.05、1.29±0.01,P<0.01;Caspase-3:0.97±0.07比1.21±0.07、1.25±0.01,P<0.01;Bcl-2:1.39±0.18比0.06±0.06、0.56±0.11,P<0.01。];二苯乙烯苷组细胞与对照组相比,生存率无显著差异(P>0.05),肝细胞凋亡因子mRNA表达显著降低(P<0.05)。结论何首乌的二苯乙烯苷成分未见明显肝损伤,大黄素、儿茶素在体内外实验中均显示出肝组织及肝细胞损伤。