基于高效液相色谱指纹图谱的不同采收期虎杖叶的区分及多成分含量的测定

为研究不同采收期虎杖叶样品的品质差异,进行了题示研究。采收于3~10月的16批样品经烘干、粉碎后,分取0.1 g,加入80%(体积分数)甲醇溶液5 mL,超声45 min,离心10 min,取上清液,过0.22μm滤膜,滤液用高效液相色谱法(HPLC)测定。以不同体积比的乙腈和0.1%(体积分数)磷酸溶液的混合溶液为流动相,在Agilent HC-C_(18)(2)色谱柱上进行梯度洗脱分离。采集16批样品的色谱图,导入相似度评价系统进行相似度分析;以共有成分峰面积为变量,采用主成分分析(PCA)、系统聚类分析和正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)等化学模式识别法区分不同采收期的样品;以外标法对鉴定出的9种共有成分进行定量,并分析了这9种成分含量随季节变化的规律。结果显示:16批样品中含有17种共有成分,采收于3月的样品的相似度小于0.800;聚类分析将16批样品分为3类,和PCA分类结果一致;OPLS-DA筛选出5个潜在差异性质量标志物,可用于区分不同采收期样品的质量差异;不同采收期样品中芦丁、槲皮素、虎杖苷等成分随季节变化,二苯乙烯类、蒽醌类化合物在春季时含量最高,黄酮类化合物在秋季含量最高(槲皮素含量在7月达到峰值),酚酸类化合物含量变化较为平稳,可为虎杖叶的质量控制以及采收期的确定提供理论依据。

C18色谱柱的高效液相色谱法分析植物多环芳烃环境毒素

拟建立一套快速、准确且能应用于常规实验室检测植物中多环芳烃（PAHs）的方法。采用常规C18色谱柱代替PAHs专用色谱柱,并通过单因素和正交实验对色谱条件进行优化。采用检测波长300 nm、柱温30℃、进量样20μL、流速0.7 mL/min、乙腈作流动B相以0~3 min（50%A＋50%B）、3~30 min（100%B）梯度洗脱程序,各多环芳径的峰面积与其浓度呈良好的线性关系,相关系数≥0.9990,相对标准偏差均≤2%。研究建立的以C18色谱柱代替PAHs专用色谱柱检测方法,不仅能快速、准确的检测植物中PAH,而且降低了检测设备成本。

靶向铜死亡相关基因治疗类风湿关节炎生物信息学分析及干预中药的预测

目的探索铜死亡相关基因在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)中的表达及其作用机制,并筛选通过靶向铜死亡基因治疗RA的潜在中药。方法通过检索GEO数据库获得RA芯片数据,分析铜死亡基因在RA中表达水平;依据铜死亡基因表达情况构建高表达亚型和低表达亚型,并进行差异分析,筛选出与RA相关的铜死亡基因。按不同分组对基因表达矩阵进行免疫浸润分析,并分析免疫浸润细胞与铜死亡基因之间的相关性。利用Kobas在线工具对差异基因进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析。通过Herb数据库检索靶向铜死亡基因治疗RA的潜在中药及其有效成分,使用Autodock vina软件模拟药物与铜死亡靶蛋白结合活性。通过收集临床样本验证铜死亡相关基因在RA中表达水平。结果FDX1、DLD、DLAT、LIAS、GLS、LIPT1和PDHB 7个铜死亡相关基因在RA中差异表达。免疫浸润分析结果显示,在RA中活化的记忆CD4+T细胞、静息自然杀伤(natural killer,NK)细胞和中性粒细胞与铜死亡相关。富集分析结果显示,铜死亡主要与趋化因子信号通路、Toll样受体信号通路、白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、核因子-κB信号通路、p53信号通路和过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路相关。虎杖叶可能是靶向铜死亡基因治疗RA的潜在中药。分子对接结果显示,虎杖叶有效成分均有与铜死亡靶蛋白结合的可能。DLD、GLS、FDX1、DLAT在RA患者外周血单个核细胞中m RNA表达水平升高。结论铜死亡相关基因表达水平与RA病程进展相关,并预测虎杖叶是潜在靶向铜死亡基因治疗RA的药物,为RA的临床诊疗及药物开发提供了新的方向和理论基础。

虎杖叶斑病病原菌的鉴定、生物学特性及其有效杀菌剂研究

在湖北省十堰市房县虎杖种植基地调查发现虎杖叶斑病发生,为明确其病原菌种类及其发病规律,该研究根据科赫法则对虎杖叶斑病病原菌进行分离、纯化,测定病原菌致病性并研究其生物学特性。同时,采用菌丝生长速率法测定11种杀菌剂对该菌的抑制作用,筛选出合适的防控药物。结果表明,从虎杖染病叶片上分离出的病菌经分离筛选、形态鉴定及分子生物学鉴定,确定为大黄茎点霉Phoma rhei。其菌落形态、显微特征与Ph.rhei基本一致;且rDNA-ITS、TEF基因序列与Ph.rhei的同源性分别达到99.96%、99.43%。病原菌Ph.rhei最佳的生长温度为25℃,pH为7~10时生长状况较好,全黑暗或全光照的环境更适合该病原菌生长;杀菌剂筛选结果表明,0.3%丁子香酚、250 g·L^(-1)丙环唑、33.5%喹啉铜对该病原菌具有显著的抑制效果,EC_(50)分别为57.54、59.58、88.69μg·mL^(-1),丁子香酚为植物源杀菌剂,可作为绿色环保杀菌剂作用于虎杖叶斑病防治中。该研究首次报道虎杖叶斑病病原菌为大黄茎点霉Ph.rhei,对该致病菌进行了生物学特性研究及室内药剂筛选,为生产上虎杖叶斑病防治提供了理论依据。