Optimization of Preparation and Brewing Process of Radix Polygonum Multiflorum Preparata-Herba Taxilli Tea Bag by Orthogonal Test Combined with Comprehensive Weighted Score Analysis

[Objectives]This study aimed to optimize the preparation process of Radix Polygonum Multiflorum Preparata-Herba Taxilli tea bags.[Methods]Taking the comprehensive weighed score of total flavonoid content,soup color,aroma and taste as an indicator,the preparation process of tea bags was optimized using an orthogonal test.[Results]The results of the orthogonal test show that the optimal preparation process for the Radix Polygonum Multiflorum Preparata-Herba Taxilli tea bags are as follows:particle size of 14 meshes,solid to liquid ratio of 1∶40,brewing temperature of 70℃,and brewing time of 10 min.[Conclusions]The optimized preparation process is reasonable and feasible.It is suitable for the production of Radix Polygonum Multiflorum Preparata-Herba Taxilli tea bags.

白芍通过调控M2巨噬细胞极化有效缓解何首乌引发的特异质肝损伤

特异质药物性肝损伤(IDILI)是一种因药物引起的严重不良反应,通常发生在少数易感人群中。何首乌(PM)虽是一个常用的补益药,但许多临床数据已证明PM会引发IDILI。大多数IDILI的发生与机体免疫应激相关,然而对于PM导致IDILI的内在机制仍尚未被阐明。白芍(PRA)在临床上常与其他中药配伍,具有增效减毒缓解炎症等功效。但PRA是否能够缓解PM引发的肝损伤及内在机制仍未可知。在本研究中,通过网络药理学分析预测了PRA配伍PM在天然免疫中的相关靶点可能与巨噬细胞极化相关。同时采用非肝毒性剂量的LPS复制免疫应激模型,通过肝功能指标及病理等结果显示,当PM与PRA联用后,肝损伤的程度有所改善,相关促炎因子TNF-α和IL-6下降,M2巨噬细胞相关因子也有所上升。在体外,PM抑制了小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)中IL-4诱导的Arg1及M2巨噬细胞标记物的表达,PRA则能够促进M2巨噬细胞极化,当二者配伍时,PRA可以改善PM对M2巨噬细胞极化的抑制作用。总之,这些研究结初步表明PRA能够通过促进M2巨噬细胞极化,降低炎症因子的表达,从而缓解PM引发的肝损伤,为解决何首乌引发的IDILI提供了新的思路和方案。

红参-制何首乌药对对神经细胞保护作用的谱效关系

目的建立红参-制何首乌药对不同提取工艺的超高效液相色谱(UHPLC)指纹图谱,并研究其对Aβ_(1-42)诱导HT22细胞模型保护作用的谱效关系。方法制备红参-制何首乌药对30%乙醇回流提取物、30%乙醇渗漉提取物、70%乙醇回流提取物、70%乙醇渗漉提取物和水提取物。采用UHPLC法进行测定并结合《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012A版)建立不同工艺提取物的UHPLC指纹图谱,并进行共有峰指认。采用Aβ_(1-42)诱导海马神经元HT22细胞,利用MTT法评估不同工艺提取物对模型的保护,考察红参-制何首乌药对不同提取工艺对神经细胞的保护作用;采用灰色关联度分析法、偏最小二乘法(PLS)分析不同提取工艺UHPLC指纹图谱中共有峰与神经细胞保护的相关性。结果红参-制何首乌药对不同提取工艺有19个共有峰,通过化学对照品指认13个成分。经灰色关联度分析发现,14个共有峰与神经细胞保护的关联度均大于0.6,呈相关性。经PLS分析发现10个成分对神经细胞保护作用的影响较大。结论建立红参-制何首乌药对不同提取工艺UHPLC指纹图谱并指认了19个共有峰成分;大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素、大黄素甲醚、20(S)-人参皂苷Rg2、人参皂苷Ro、人参皂苷Rd和14、17、18号峰所代表的化学成分可能是神经细胞保护作用的药效物质。

基于UPLC-MS分析技术测定不同产区制何首乌饮片中8个化学成分的含量

目的建立UPLC-MS分析技术同时测定不同产地制何首乌饮片中4种蒽醌类(大黄素甲醚、大黄素、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷和大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷)及3种鞣质类(没食子酸、儿茶素、表儿茶素)和1种二苯乙烯类(反式二苯乙烯苷)活性成分的含量。方法采用Ultimate UPLC-XB C18(2.1 mm×50 mm,1.7μm)色谱柱,流动相A为0.1%甲酸水溶液,流动相B为乙腈,线性梯度洗脱,流速为0.2 mL·min^(-1);采用电喷雾离子源(ESI)、负离子扫描模式,在多反应监测(MRM)条件下进行定量分析;并用IBM SPSS Statistics 22软件对数据结果进行聚类分析。结果建立的UPLC-MS可以较好地分离8种成分,各成分在相应浓度范围内与峰面积线性关系良好;其定量限和检测限范围分别为0.89~13.00和0.20~4.00 ng·mL^(-1);精密度、重复性、稳定性的RSD值(n=5)均小于5%;加样回收率在99.47%~101.49%,RSD均小于2.5%;聚类分析结果显示12批制何首乌样品分为3类,其中S1、S2、S5、S8~S12归为Ⅰ类,S6、S7归为Ⅱ类,S3和S4归为Ⅲ类;第Ⅲ类样本(广西、广东)中3类成分的平均含量相对较高。结论该方法可靠、准确、快速、重复性好,可用于制何首乌的质量控制与品质相关研究,并为其临床安全用药提供依据。

何首乌的抗衰老作用研究

目的探讨何首乌对抗D -半乳糖所致亚急性衰老的机制。方法将小鼠 30只随机分为 3组 :对照组、衰老模型组和何首乌治疗组。衰老模型组、何首乌治疗组用D 半乳糖皮下注射 ,1次 /d ,连续 6周造成小鼠衰老。第 3周时 ,何首乌治疗组给小鼠灌胃何首乌。第 6周末处死。测定不同组织脂褐质 (lipofuscin ,LPF)、Na+ /K+ ATP酶 (Na+ /K+ ATPase)、超氧化物歧化酶 (superoxidedismutase ,SOD)和丙二醛含量。结果何首乌可降低小鼠脑组织和肾组织的LPF含量 ,升高心肌Na+ /K+ ATPase活性和肝脏SOD活性。结论何首乌具有抗衰老作用 。

制何首乌中四个有效成分含量的高效液相色谱法测定

目的建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定制何首乌中二苯乙烯苷、黄豆苷元、大黄素、大黄素甲醚的方法。方法采用高效液相色谱法;色谱柱为Diamonsil C18(5μm,250 mm×4.6 mm);柱温35℃;流速1.2 ml/min;检测波长280nm;流动相为甲醇∶0.5%醋酸溶液(42∶58)。结果被测定峰与其他组分峰完全分离。二苯乙烯苷、黄豆苷元、大黄素甲醚和大黄素的线性范围分别为0.908 4～9.084μg(R2=0.999 8),0.1236～1.236μg(R2=0.999 7),0.6048～6.048μg(R2=0.999 9),0.3648～3.648μg(R2=0.999 2);平均回收率(n=6)分别为100.2%,(RSD=1.9%),98.53%(RSD=2.0%),100.7%(RSD=2.8%)和99.95%(RSD=2.0%)。结论该方法准确、简便、重复性好,可作为制何首乌中二苯乙烯苷、黄豆苷元、大黄素、大黄素甲醚的含量测定方法,并易于推广。

不同炮制工艺对何首乌中二苯乙烯苷含量的影响

目的考察炮制工艺和炮制时间对何首乌中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(二苯乙烯苷)含量的影响。方法将何首乌分别采用黑豆汁拌蒸0、2、4、6、8、10 h和传统工艺(九蒸九晒)炮制后,用HPLC测定炮制饮片中二苯乙烯苷的含量。结果不同炮制工艺的饮片中二苯乙烯苷含量顺序为传统工艺炮制品>生品>黑豆汁拌蒸品。用黑豆汁拌蒸,二苯乙烯苷的含量先逐渐上升而后下降,以6 h为峰。结论应规范何首乌饮片的炮制时间。

何首乌炮制工艺的研究

目的:优选何首乌的最佳炮制工艺;HPLC法检测二苯乙烯苷的含量。方法:以二苯乙烯苷的含量为指标,采用正交实验法对炮制工艺进行优选研究,并以优选出的炮制方案做平行实验,HPLC法检测二苯乙烯苷的含量。结果:蒸制时间48h是最好条件。结论:本法可作为何首乌推荐标准。

中药对晶状体氧化损伤的防治作用

目的探讨制首乌、北沙参、紫丹参抗晶状体氧化损伤的作用机制。方法用D-半乳糖皮下注射,将2月龄大鼠制成衰老模型,然后用制首乌、北沙参、紫丹参3味药灌胃,40 d后检测衰老大鼠晶状体组织中谷胱甘肽过氧化物酶(gluta-thione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(maleic dialdchyde,MDA)的活力和含量。结果中药治疗组晶状体中GSH-Px、SOD的活力较衰老模型组明显增加(P<0.01),MDA的含量较衰老模型组明显降低(P<0.01)。结论制首乌、北沙参、紫丹参3味药联合应用具有抗晶状体氧化损伤的作用。

基于转运体探讨何首乌提取物对大鼠肾脏的影响

目的阐明向大鼠长期给药何首乌醇提物(PME)和水提物(PMW)对其肾脏的影响。方法分别向大鼠灌胃给药何首乌PME和PMW 42 d,考察大鼠生化指标及肾脏病理变化,并测定给药后肾脏主要转运体基因(Oat1,Oat2,Oct2,Mrp2,P-gp)的表达,从转运体角度分析何首乌致肾损伤的作用机制。结果研究发现PME和PMW给药后,血清生化PME组的尿素氮(BUN),肌酐(CRE),总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)均显著升高(P<0.01),PMW组的BUN,CRE和TP显著升高(P<0.01),ALB数值升高,但不具统计学意义(P>0.05)。肾脏病理结果显示PME组和PMW组均可见肾脏色素沉着,PME组可见肾小管变性。基因表达检测结果发现,PME组Oat1,Oct2,P-gp和Mrp2均显著性下调(P<0.01),Oat2显著性上调(P<0.01)。PMW组Oat1,Oct2和Mrp2显著性下调(P<0.01),Oat2显著性上调(P<0.01),P-gp变化不具统计学意义(P>0.05)。结论经过长期给药,两种提取物均可引起大鼠肾脏损伤,且PME作用更显著。肾毒性作用机制可能与何首乌相关成分对肾脏转运体的影响相关,潜在肾毒性成分可能为二苯乙烯苷和大黄素。

何首乌生品与炮制品薄层层析鉴别方法研究

目的研究采用薄层层析(TLC)鉴别方法区别何首乌生品与炮制品的可行性。方法研究样品为来自全国不同地区的3个批次的何首乌样品与10个批次的制何首乌样品,以及道地产地何首乌生品通过不同炮制工艺、不同炮制时间制备的炮制品。TLC鉴别条件:硅胶G薄层板,5-羟甲基糠醛为对照品,以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(1∶1)为展开剂,喷以15%α-萘酚乙醇溶液,在90℃加热至斑点显色清晰,日光下检视。结果供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,制何首乌显相同颜色的斑点,何首乌没有显示相同颜色的斑点。结论建立的TLC鉴别方法可以区分何首乌生品与炮制品。

野生与栽培何首乌的质量比较

对野生何首乌块根（野生品）与栽培何首乌块根（栽培品）中的总蒽醌（Ⅰ）、游离蒽醌（Ⅱ）、结合蒽醌（Ⅲ）、二苯乙烯苷（Ⅳ）、磷脂（Ⅴ）、金属元素（Ⅵ）的含量进行了测定，并对二者的醇提物质进行了薄层层析比较。结果表明，野生品与栽培品中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ的含量基本相同，栽培品中Ⅳ和Ⅴ的含量稍低于野生品，栽培何首乌基本可以代替野生何首乌药用；并应注意药材的采收期。

制何首乌对CTLA-4抗体诱导的PD-1^(-/-)小鼠肝损伤模型的改善作用

目的探讨制何首乌对CTLA-4抗体诱导PD-1^(-/-)小鼠肝损伤的作用特点及其免疫学机制。方法10只SPF级C57BL/6品系的PD-1^(-/-)小鼠随机分为对照组(n=4)和制何首乌组(n=6)。两组小鼠均于实验前3 d、前1 d及实验开始后每周腹腔注射CTLA-4抗体,同时分别给予0.9%NaCI溶液和何首乌连续灌胃42 d,第43天处死后留血和肝组织,进行生化、病理、免疫组织化学染色及肝组织流式细胞检测。结果制何首乌组小鼠ALT、AST水平较对照组有降低趋势为(43.2±15.5)U/L比(32.8±6.7)U/L和(32.3±7.5)U/L比(23.8±14.1)U/L但差异均无统计学意义(均P>0.05)。对照组小鼠肝脏病理表现为多个大小不等的炎症坏死灶,主要以巨噬细胞和CD4^(+)T细胞浸润为主;而制何首乌组的炎症坏死灶数量显著减少,为121.5(104.0,147.3)比24(17.5,61.5),(P=0.014),肝组织浸润的巨噬细胞、CD4^(+)T细胞数量亦明显减少。流式细胞检测显示,与对照组相比,制何首乌组肝脏内巨噬细胞比例显著降低(2.39±0.77)%比(1.37±0.28)%,(P=0.028),中性粒细胞比例显著降低(0.58±0.11)%比(0.34±0.14)%,(P=0.025),且其分泌的TNF-α比例显著降低(30.15±10.69)%比(11.56±6.05)%,(P=0.012);CD4^(+)T及CD8^(+)T细胞比例虽没有显著变化,但CD4^(+)T细胞活化比例显著降低(26.20±3.47)%比(16.74±6.95)%,(P=0.044),CD8^(+)T细胞分泌颗粒酶B比例显著降低(77.05±4.23)%比(59.70±10.81)%,(P=0.020)。结论制何首乌通过抑制巨噬细胞募集、中性粒细胞和效应性T细胞活化,对CTLA-4抗体诱导PD-1^(-/-)小鼠肝损伤模型起到改善和保护作用。

党参与首乌等混合注射液上调抗氧化酶表达作用的实验研究

目的探讨党参、首乌、天麻、麦冬、白术、续断混合注射液对快速老化大鼠学习记忆及血、肝、肾、海马、脑皮质抗氧化酶SOD,GSH-PX和过氧化物MDA的影响。方法采用氟哌啶醇造成大鼠获得性记忆缺失动物模型,通过电跳台回避法和腹腔注射党参、首乌等混合注射液,观察对照组、模型组、实验组大鼠行为学改变,测定各组大鼠血和组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和脂质过氧化物丙二醛(MDA)的含量。结果与对照组、模型组比较,党参、首乌等混合注射液可维持学习记忆功能,并使多种组织SOD和GSH-PX显著升高、MDA显著降低,差别有非常显著性意义(P<0.001)。结论党参、首乌等混合注射液有改善学习记忆和上调抗氧化酶SOD、GSH-PX、下调过氧化物MDA表达作用,说明党参、首乌等传统中药延缓衰老与促进抗氧化机制、减轻氧自由基损伤有关。

何首乌的毒理研究

用高温炮制的何(赤)首乌提取液进行动物急性和亚急性毒理试验,并与对照组比较。结果表明:(1)肝功能(谷一丙转氨酶)和肾功能(尿素氮)正常;(2)血常规正常;(3)病理检查心、肝、肾无异常;因此用此法炮制的首乌及其提取液作为临床使用和食品添加剂食用是安全的。

不同何首乌特征图谱的初步研究及发酵何首乌主要成分的初步鉴定

目的：通过对何首乌、制何首乌及发酵何首乌特征图谱的初步研究,比较何首乌、制何首乌及发酵何首乌化学成分的差异,并运用HPLC-TOF/MS技术对发酵何首乌中的主要化学成分进行初步鉴定,为阐明发酵何首乌的药理作用打下良好的基础。方法：采用HPLC梯度洗脱的方法测定了不同何首乌的特征图谱,计算它们的相似度并对发酵何首乌中主要色谱峰进行了初步鉴定。结果：4批何首乌,3批制何首乌及同一来源的何首乌、制何首乌、发酵何首乌特征图谱与其对照特征图谱的相似度均大于0.99。初步鉴定了发酵何首乌中的8个化合物。结论：4批何首乌、3批制何首乌之间亲缘关系可能较近。发酵何首乌与同一来源的何首乌、制何首乌之间相关性较好,化学成分总体相似,未发现新成分。

基于内毒素特异质模型的何首乌毒性与炮制工艺研究

目的基于内毒素特异质肝损伤模型,考察不同炮制程度的何首乌对大鼠肝脏的损伤作用,以优选何首乌最为安全的炮制工艺。方法采用无毒剂量的脂多糖(LPS,尾静脉注射2.8 mg/kg)制备内毒素特异质模型大鼠,模型大鼠和正常大鼠均灌胃给予12.96 g/kg不同炮制程度(0、8、16、24、32 h)的何首乌50%乙醇提取物,各给药1次,检测大鼠血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平以及HE染色观察肝脏病理学改变。结果在灌胃给予不同炮制程度的何首乌50%乙醇提取物后,正常SD大鼠上,未见明显肝损伤作用,炮制24 h,32 h组ALT,AST值低于正常组;在内毒素特异质模型上,生首乌的ALT,AST值显著升高,炮制8 h,炮制16 h的ALT,AST值均高于正常组。结论何首乌以常压炮制32 h最为安全。

基于UPLC-MS/MS检测技术探讨清蒸时间对何首乌26种化学成分的影响

目的探究《中华人民共和国药典》(2020年版)(简称“《中国药典》”)收载的清蒸炮制法,在不同炮制时间(0~48 h)下对何首乌中主要化学成分含量的影响。方法制备《中国药典》清蒸样品;建立超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-MS/MS)测定何首乌中26种成分的分析方法并进行检测。结果建立了准确可靠的UPLC-MS/MS测定何首乌中蒽醌、二苯乙烯苷、黄酮、酚类化合物含量的方法;随着蒸制时间的延长,26种成分的含量发生了明显变化:游离蒽醌类成分(大黄素、大黄素甲醚)先降低后升高,结合蒽醌类成分(大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄素-6-O-葡萄糖苷)、大黄酸、大黄素-1-甲醚、cis-THSG、虎杖苷、表儿茶素和芦丁先升高后降低,大黄素二蒽酮、大黄素-8-O-(6’-甲基丙二酰)吡喃葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-(6’-甲基丙二酰)吡喃葡萄糖苷、trans-THSG、白藜芦醇、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-(2”-O-阿魏酰)-β-D-吡喃葡萄糖苷、儿茶素和决明酮-8-O-β-D-葡萄糖苷降低,酚类成分升高。结论本方法操作简单、准确度高、重复性好,可以用于何首乌中26种化学成分的定量检测分析。制首乌中26种成分的含量与蒸制时间密切相关,蒽醌类、二苯乙烯苷类、黄酮类、酚类发生规律性变化,对何首乌质量产生重要影响。

炆制对何首乌中蒽醌糖苷类成分的影响及其减毒效应

目的 探讨炆制对何首乌中蒽醌糖苷类成分的影响及其减毒效应。方法 采用液相色谱-质谱联用(LC-MS)法对何首乌药材及其不同炮制品的蒽醌糖苷类成分进行定性分析;进一步采用正常人肝细胞系(L02肝细胞)作为评价模型,以谷丙转移酶(ALT)、谷草转移酶(AST)、谷氨酰胺转肽酶(GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)为评价指标,对何首乌不同炮制品及变化的蒽醌糖苷类成分的肝脏毒性进行评价。结果 何首乌炮制前后的变化成分为蒽醌糖苷类成分大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷。肝细胞毒性实验中,何首乌不同炮制品毒性由大到小依次为:何首乌药材>制何首乌饮片>九蒸九晒何首乌饮片>炆何首乌饮片;炆制后消失的大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷具有肝脏毒性,且随着浓度的减小,肝毒性降低。结论 何首乌的多种炮制方法均有减毒作用,以炆制为优;炆制后消失的蒽醌糖苷类成分被证实具有肝脏毒性,推测蒽醌糖苷类成分为何首乌肝脏毒性的物质基础,为临床安全用药提供了依据。

膨化对制首乌中二苯乙烯苷的提取率的影响研究

目的比较制首乌膨化前后二苯乙烯苷的提取率随时间的变化,确定各自最大提取率所需时间。方法用超声波分别提取膨化前后制首乌中的二苯乙烯苷,依照2005版《中国药典》方法测定不同时间提取液中二苯乙烯苷的含量,根据浓度与时间的相关性确定最佳提取时间。结果未膨化的制首乌在60 min左右二苯乙烯苷的提取率最大(3.31%),而膨化制首乌为20 min左右(3.25%)。结论膨化对制首乌中二苯乙烯苷的含量影响不大,但能够使二苯乙烯苷的提取速率明显加快。