苗药花蝴蝶回调CIA模型鼠血细胞变化的初步研究

目的 观察苗药花蝴蝶回调胶原诱导关节炎(CIA)模型鼠外周血细胞变化的初步作用机制。方法 40只大鼠随机分为花蝴蝶低剂量治疗组(花蝴蝶低组)、花蝴蝶高剂量治疗组(花蝴蝶高组)、甲氨蝶呤治疗组(甲氨蝶呤组)、CIA模型组(模型组)和正常组,分别按相关文献资料并结合民间用药经验灌胃给药。观察大鼠足关节肿胀度,检测大鼠外周血白细胞计数、淋巴细胞计数、单核细胞计数、淋巴细胞/单核细胞、红细胞计数、血细胞比容、血小板计数和平均血小板体积等指标,研究大鼠足关节病理切片等。结果 模型组大鼠足关节肿胀指数评分明显高于花蝴蝶低组、花蝴蝶高组、甲氨蝶呤组和正常组(P<0.01);正常组、甲氨蝶呤组、花蝴蝶高组、花蝴蝶低组足关节肿胀指数评分各组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与其他各组比较,模型组大鼠外周血白细胞计数、淋巴细胞计数、单核细胞计数、红细胞计数、血细胞比容、血小板计数均明显升高,而模型组大鼠外周血淋巴细胞/单核细胞、平均血小板体积均降低(P<0.01)。正常组、甲氨蝶呤组、花蝴蝶高组、花蝴蝶低组外周血相关检测指标各组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与其他各组比较,模型组大鼠膝关节骨髓腔淋巴细胞、单核细胞评分升高,而脂肪细胞评分降低(P<0.01)。正常组、甲氨蝶呤组、花蝴蝶高组、花蝴蝶低组大鼠膝关节骨髓腔淋巴细胞、单核细胞和脂肪细胞评分各组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 苗药花蝴蝶可能通过回调骨髓淋巴细胞、单核细胞、红细胞、血细胞比容、血小板等指标升高和平均血小板体积、淋巴细胞/单核细胞比值降低,回转CIA模型鼠外周血相应血细胞变化,最终缓解CIA模型鼠症状,这可能是苗药花蝴蝶治疗类风湿关节炎的初步作用机制之一。

赤胫散化学成分的研究

采用乙醇提取,硅胶柱层析分离和波谱方法鉴定结构,从赤胫散(Polygonum runcinatum Buch.-Ham.var.sinense Hemsl.)中分离出8个化合物,通过波谱数据分别鉴定为3,3′,4′-三甲基鞣花酸(1),3,3′-二甲基鞣花酸(2),3,3′,4-三甲基鞣花酸-4-O-β-D-葡萄糖(3),3,3′-二甲基鞣花酸-4-O-β-D-葡萄糖(4),没食子酸(5),没食子酸乙酯(6),邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(7),胡萝卜苷(8),所有化合物均为首次从该植物中分得。

羽叶蓼及变种赤胫散的过氧化物酶同工酶的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对六盘水境内羽叶蓼及变种赤胫散的4个居群的过氧化物酶(POD)同工酶进行了研究。结果表明:羽叶蓼与变种赤胫散POD同工酶酶带共10条,羽叶蓼酶带数为3条,赤胫散不同居群酶带数为4～9条。DPS聚类分析结果显示,羽叶蓼单独聚为一支,赤胫散4个居群聚为一支。羽叶蓼与赤胫散遗传差异较大,支持赤胫散从羽叶蓼的变种上升为独立的物种。

贵州赤胫散挥发油化学成分及其抗菌活性研究

目的比较研究贵州人工种植赤胫散与野生赤胫散挥发油化学成分及其抗菌活性,为赤胫散进一步开发利用提供实验依据。方法采用水蒸汽蒸馏提取挥发油,用气相色谱-质谱联用仪进行分析,用面积归一法计算有关成分的相对含量,采用滤纸片法测试赤胫散挥发油抑菌活性。结果经计算机检索并结合文献调研,从贵州人工种植赤胫散中分离出50种成分,鉴定出18种,鉴定率为36%,从贵州野生赤胫散中分离出60种成分,鉴定出18种,鉴定率为30%。两种药材的挥发油成分和含量差异显著。抗菌活性研究表明贵州赤胫散挥发油无抑菌活性。结论贵州赤胫散挥发油主要成分是棕榈酸,棉子油酸,亚麻仁油酸,植醇,但其含量不完全相同,而且每种赤胫散辉发油都含有其特异组分。两种不同来源的赤胫散挥发油都无抑菌作用。

苗药花蝴蝶回调CIA模型大鼠脂肪细胞变化的研究

目的探讨苗药花蝴蝶回调牛二型胶原蛋白诱导关节炎(CIA)模型鼠脂肪细胞变化的相关指标及其机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分为正常组(8只)及建模组(32只),建模组大鼠建模成功后分为CIA模型组、氨甲蝶呤组及花蝴蝶高剂量组、低剂量组,各8只,根据相关文献资料结合民间用药经验分别灌胃给药(正常组:生理盐水;氨甲蝶呤组:1.04 mg/kg氨甲蝶呤,每周2次;花蝴蝶高、低组:每天7.6、3.8 mg/kg花蝴蝶药液),35 d后停止。观察各组大鼠足肿胀情况,检测血液甘油三酯(TG)、类风湿因子(RF)、免疫球蛋白A(IgA)、IgG、IgM等指标,采用酶联免疫吸附测定法检测脂联素(ADPN)、白细胞介素-10(IL-10)等细胞因子,研究足关节病理切片等。采用SPSS25.0软件对实验数据进行统计学处理。结果CIA模型组大鼠关节肿胀指数评分及RF、IgM水平均明显高于其他组,IgG水平低于花蝴蝶低组而高于其他组,差异均有统计学意义(P<0.05),TG、ADPN、IL-10水平明显低于其他组,差异均有统计学意义(P<0.05)。CIA模型组大鼠足关节骨髓腔内现低度脂肪细胞,而白细胞弥漫性增生,与其他组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论苗药花蝴蝶可能通过回调CIA模型鼠脂肪细胞的减少,保证了正常的能量代谢(如TG等)和免疫调节因子分泌(如ADPN、IL-10等),促进了免疫调节作用(如回调了RF、IgG、IgM等),缓解了足关节炎症等。

赤胫散中总鞣质含量测定及提取工艺优化

目的:优化赤胫散中鞣质的提取工艺,建立赤胫散中总鞣质含量测定的方法。方法:采用磷钼钨酸-干酪素紫外分光光度法测定赤胫散中总鞣质含量,以提取物中总鞣质含量为评价指标,以碳酸钠浓度、提取时间和提取溶剂作为考察因素,采用正交设计法筛选赤胫散的提取工艺条件。结果:赤胫散中鞣质的线性范围为1~10 mg/L,相关系数为0.999 5,回收率(n=6)为99.06%(RSD=1.04)。结论:本方法简单、准确,可用于赤胫散中总鞣质含量的测定。

贵州产赤胫散药材的质量分析

目的:对贵州赤胫散的水分、杂质、灰分和酸不溶性灰分、农药残留量、干燥失重、炽灼残渣及浸出物进行测定,为控制赤胫散药材的质量提供实验依据。方法:按照《中国药典》中水分(烘干法)、杂质、灰分、农药残留量、干燥失重、炽灼残渣、浸出物的测定方法对贵州赤胫散进行测定。结果:贵州产的15批赤胫散药材杂质含量为0.05%~0.84%,水分含量为12.72%~13.40%,干燥失重结果为12.44%~13.94%,总灰分含量为2.04%~3.40%,酸不溶性灰分含量为0.33%~1.47%,炽灼残渣结果为2.52%~3.70%,水溶性浸出物含量为34.31%~38.45%,15批赤胫散药材均未检出8种有机氯残留农药。结论:实验结果为提升赤胫散药材的质量标准提供了科学依据。

桂千金子提取物对金黄色葡萄球菌体外抗菌作用及机制的初步研究

目的:探讨桂千金子提取物对金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性及作用机制。方法:通过体外抑菌试验,测定桂千金子乙醇提取物及其乙酸乙酯、正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),比较标准菌株金黄色葡萄球菌(SA)及临床分离的金黄色葡萄球菌(MSSA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的抗菌活性大小。测定桂千金子乙醇提取物作用后MRSA碱性磷酸酶(AKP)活性、外流DNA/RNA大分子含量、胞内蛋白含量的变化,采用电镜观察MRSA细胞形态。结果:桂千金子提取物对3种供试菌株的抑菌圈直径均大于15 mm,MIC为1.56~12.50 mg/mL,MBC为3.13~25.00 mg/mL,抗菌强度排序为乙醇提取物≈乙酸乙酯萃取物>正丁醇萃取物;与空白对照组比较,实验组AKP活性升高(P<0.05),各实验组与空白组外流DNA/RNA大分子含量和胞内蛋白含量比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);电镜下MRSA菌体细胞变形,表面粗糙有颗粒附着。结论:桂千金子提取物对金黄色葡萄球菌及其耐药菌株均具有显著的抗菌活性,其抗菌作用可能与细胞壁结构破损致通透性发生改变有关。

苗药赤胫散提取物的体外抑菌活性研究

目的:研究苗药赤胫散提取物的体外抑菌活性。方法:采用管碟法,以氯霉素和氟康唑为阳性对照,测定赤胫散的水提物和95%乙醇提取物及其乙酸乙酯、正丁醇部位萃取物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、福氏志贺氏菌、伤寒杆菌、枯草芽孢杆菌、绿脓杆菌、乙型溶血性链球菌、白色念珠菌、新生隐球菌等9种菌株的抑菌作用,筛选出具有抑菌作用的部位及对药物敏感的试验菌株。分别采用微量肉汤稀释法和琼脂培养基平板法,测定赤胫散95%乙醇提取物及其不同萃取部位对敏感菌株的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。结果:赤胫散的水提物几乎无抑菌活性;95%乙醇提取物对各菌株表现出不同程度的抑制作用,对伤寒杆菌等6种细菌的抑菌作用优于乙型溶血性链球菌及2种真菌;95%乙醇提取物的乙酸乙酯及正丁醇萃取部位表现出良好的抑菌作用,且乙酸乙醇萃取部位强于正丁醇部位,但对真菌均未见抑制作用;95%乙醇提取物对上述6种细菌的MIC、MBC分别为6.25~12.5、12.5~25 mg/mL,其乙酸乙酯部位的MIC、MBC分别为3.13~6.25、6.25~12.5 mg/mL,其正丁醇部位的MIC、MBC分别为6.25~12.5、12.5~25 mg/mL。结论:苗药赤胫散的95%乙醇提取物及其乙酸乙酯、正丁醇部位萃取物对伤寒杆菌等6种常见细菌具有明显的体外抑菌作用。

苗药赤胫散乙酸乙酯部位的化学成分分离及鉴定

目的分离苗药赤胫散乙酸乙酯部位的化学成分并鉴定。方法选取产自贵州省贵阳市开阳县城关镇的赤胫散干燥根,采用硅胶柱层析、制备薄层色谱法、重结晶及Sephadex LH-20凝胶柱层析等方法,对苗药赤胫散乙酸乙酯部位的化学成分进行分离纯化,根据波谱、质谱、理化特性及文献对照等方法鉴定其结构。结果分离得到9个化合物,鉴定为β-谷甾醇(1)、3,3′,4′-三甲基鞣花酸(2)、邻苯二甲酸正丁酯异丁酯(3)、香草酸(4)、丁香酸(5)、对羟基苯甲酸(6)、原儿茶酸(7)、没食子酸(8)及没食子酸乙酯(9)。结论化合物3、4、5、6及7是首次从赤胫散中分离得到,进一步完善了苗药赤胫散化学成分的研究。

赤胫散指纹图谱的建立及其3种化学成分含量的测定

目的建立赤胫散指纹图谱的定性分析和没食子酸、鞣花酸及3,3’-二甲基鞣花酸成分定量分析的测定方法。方法选取本省野生赤胫散药材17批次,采用高效液相色谱法(HPLC)建立赤胫散指纹图谱,采用相似度分析、聚类分析、主成分分析及正交偏最小二乘判别分析进行质量评价,并测定3种化学成分含量。结果建立了赤胫散的HPLC指纹图谱共有模式,确定了19个共有峰,17批次赤胫散的指纹图谱相似度为0.768~0.997,可分为2类;没食子酸、鞣花酸及3,3’-二甲基鞣花酸的含量,分别在1.23~39.20 mg/L(r=0.999 8)、7.98~255.30 mg/L(r=0.999 8)及0.90~28.80 mg/L(r=0.999 9)的进样浓度范围内线性关系良好,加样回收率为96.90%~103.48%,相对标准偏差(RSD)<3%。结论建立的赤胫散指纹图谱和含量测定方法准确可靠,可用于赤胫散的质量控制。

赤胫散中总黄酮含量的测定

以80%乙醇为提取溶剂,芦丁为标准品,用分光光度法于510nm处测定赤胫散中总黄酮含量为3.33%。

血当归总黄酮提取工艺优化及其体外抗氧化活性研究

目的:研究血当归总黄酮提取工艺及其体外抗氧化活性。方法:采用超声法提取血当归总黄酮,在510nm处测定总黄酮的含量,并通过单因素实验和L9(33)正交设计对提取工艺进行优化。并以抗坏血酸为阳性对照,探讨了其对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·),2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS^+·)及羟自由基(·OH)的清除能力。结果:血当归总黄酮提取的最佳条件为料液比1∶30g·mL^-1,乙醇浓度65%,提取时间45min,提取血当归总黄酮的含量可达90.05mg·g^-1。此条件下得到的血当归总黄酮提取物清除DPPH·,ABTS^+·和·OH的能力良好,尤其对ABTS+·清除能力最优,其IC50值分别为11.62、1.83、136.12mg·L^-1。结论:优化的提取工艺稳定、合理,血当归总黄酮有较好的体外抗氧化活性并呈现出良好的量效关系。

HPLC测定赤胫散中的3,3'-二甲基鞣花酸和3,3',4'-三甲基鞣花酸

目的采用HPLC测定赤胫散中的3,3＇-二甲基鞣花酸和3,3＇,4＇-三甲基鞣花酸。方法色谱柱为Dikma-C18柱,流动相为甲醇-乙腈-0.1%磷酸（17∶33∶50）,流速1 m L·min^-1,检测波长248 nm,柱温30℃。结果 3,3＇-二甲基鞣花酸0.198-0.990μg（r=0.9991）、3,3＇,4＇-三甲基鞣花酸0.098-0.491μg（r=0.9990）与峰面积的线性关系良好,回收率分别为102.40%、98.41%,RSD分别为2.25%、1.87%（n=6）。结论所用方法简便、快捷、准确,可用于赤胫散药材的质量控制。