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Pseudomonas putida GM6多聚磷酸盐激酶(ppk)基因的克隆及表达 被引量:9
1
作者 管莉菠 蔡天明 +3 位作者 李波 何健 李顺鹏 崔中利 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期727-733,共7页
以一株高效聚磷菌Pseudomonas putidaGM6为研究材料。为获得其多聚磷酸盐激酶(polyphos-phate kinase,ppk)基因,并验证该基因在磷酸盐转运系统中的作用,根据已报道的ppk基因保守区域设计引物,从其总DNA中成功扩增到ppk基因的部分片段(约... 以一株高效聚磷菌Pseudomonas putidaGM6为研究材料。为获得其多聚磷酸盐激酶(polyphos-phate kinase,ppk)基因,并验证该基因在磷酸盐转运系统中的作用,根据已报道的ppk基因保守区域设计引物,从其总DNA中成功扩增到ppk基因的部分片段(约528 bp)。随后采用快速染色体步移方法(Self-formed adap-tor PCR,SEFA-PCR)技术扩增片段的上下游基因序列,将三个序列拼接,用OMIGA软件分析其ORFs,推测ppk基因全长为2 220 bp(GenBank accession number DQ133537)。构建的多聚磷酸盐激酶表达菌株E.coliBL21(DE3)/pET29a-ppk经IPTG诱导后3 h时,明显出现分子量约为81 kDa的表达产物。且表达菌株在12 h时的磷去除率高达80%(对照菌株的磷去除率仅为18%),远高于已报道的40%的去除率。这表明ppk基因在E.coli中的过量表达,导致了E.coli菌体中poly-P的大量聚集,从而大大去除了培养基中的磷酸盐。 展开更多
关键词 多聚磷酸盐激酶 ppk全基因及上下游序列 快速染色体步移方法(SEFA—PCR)
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高效除磷工程菌Pseudomonas putida GM6-PPK1的构建及其除磷能力研究 被引量:4
2
作者 李波 刘卫东 +4 位作者 刘娟 赵晓丽 高雅英 曹慧 崔中利 《土壤》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期600-606,共7页
ppk1基因编码的多聚磷酸盐激酶主要负责多聚磷酸盐的合成,其表达量的高低直接决定聚磷菌的聚P能力的强弱。Pseudomonas putida GM6是从EBPR好氧池活性污泥中分离获得的一株具有聚P能力的菌株,该菌株含有两个编码多聚磷酸盐激酶的基因(p... ppk1基因编码的多聚磷酸盐激酶主要负责多聚磷酸盐的合成,其表达量的高低直接决定聚磷菌的聚P能力的强弱。Pseudomonas putida GM6是从EBPR好氧池活性污泥中分离获得的一株具有聚P能力的菌株,该菌株含有两个编码多聚磷酸盐激酶的基因(ppk1和ppk2)。通过PCR从高效聚磷菌株总DNA中扩增得到了ppk1及其启动子,并定向克隆到pBBRMCS-5载体上,构建了重组质粒pMEPE-PPK,在辅助质粒pRK2013的帮助下,通过三亲接合将pMEPE-PPK转移到原始菌株GM6中,获得的工程菌P.putidaGM6-PPK1。GM6-PPK1除P能力较原始菌株GM6和对照菌株GM6-P5提高了54%,生长能力较原始菌株也有一定增强。通过模拟EBPR工艺,发现GM6-PPK1在厌氧/好氧交替的环境条件下强化表达不但提高了菌体好氧段的吸P能力,而且厌氧段P的释放和PHA的合成较之原始菌株也有显著增加。 展开更多
关键词 强化生物除磷 多聚磷酸盐 多聚磷酸盐激酶 基因工程菌
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ppk1基因缺失对脑膜炎大肠杆菌K1株生物学功能的影响 被引量:1
3
作者 彭亮 潘嘉韵 +3 位作者 罗苏 杨正慧 黄慕芳 曹虹 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期965-968,共4页
目的比较大肠杆菌K1株E44敲除ppk1基因后与野生株之间差异并探讨ppk1基因在E.coli K1株致脑膜炎机制中的作用。方法(1)将野生株与敲除株置于56℃2、4、6 min,以比较二者对热刺激的抵抗力差异;(2)利用电子显微镜直接观察以及采用经典的... 目的比较大肠杆菌K1株E44敲除ppk1基因后与野生株之间差异并探讨ppk1基因在E.coli K1株致脑膜炎机制中的作用。方法(1)将野生株与敲除株置于56℃2、4、6 min,以比较二者对热刺激的抵抗力差异;(2)利用电子显微镜直接观察以及采用经典的粘附、侵袭率定量实验比较二者对脑微血管内皮细胞(HBMEC)的粘附和侵袭能力;(3)将细菌与脑微血管内皮细胞共同孵育后,利用激光共聚焦观察二者诱导脑微血管内皮细胞的细胞骨架重排现象。结果与野生株E44相比,ppk1敲除株对于56℃热刺激的抵抗力明显下降;电子显微镜可以观察到,敲除株粘附和侵袭入HBMEC的数量均少于野生株,定量粘附、侵袭实验也进一步证实;借助激光共聚焦发现敲除株诱导HBMEC细胞骨架重排的能力要弱于野生株。结论 ppk1对于脑膜炎大肠杆菌K1株抵抗热刺激、粘附和侵袭HBMEC以及诱导HBMEC的细胞骨架重排具有重要作用。 展开更多
关键词 脑膜炎 聚磷酸盐激酶1 大肠杆菌K1株 基因敲除
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基于土壤宏基因组的聚磷酸激酶的筛选与鉴定
4
作者 章素平 高森浩 +3 位作者 李王馨月 张锦豪 杨诗韵 尤忠毓 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期254-261,共8页
聚磷酸激酶(polyphosphate kinase,PPK)是一类磷酸基团转移酶,能催化磷酸基团在ATP与多聚磷酸之间的转移反应,可用于生物催化过程中的ATP再生,基于PPK的ATP再生系统已成为生物催化领域的研究热点之一。该研究旨在利用序列驱动的宏基因... 聚磷酸激酶(polyphosphate kinase,PPK)是一类磷酸基团转移酶,能催化磷酸基团在ATP与多聚磷酸之间的转移反应,可用于生物催化过程中的ATP再生,基于PPK的ATP再生系统已成为生物催化领域的研究热点之一。该研究旨在利用序列驱动的宏基因组技术,从土壤宏基因组中挖掘新型的PPK基因。根据文献报道的PPK氨基酸序列保守区域,设计简并引物,以土壤宏基因组DNA为模板进行PCR扩增,筛选到一条来源于Serratia marcescens的PPK编码基因,该基因包含一个2064 bp的开放阅读框,编码一个由687个氨基酸组成的蛋白(SmPPK)。多重序列比对发现SmPPK与Escherichia coli来源的PPK具有较高的序列一致性(87.9%)。系统发育树分析表明,SmPPK与Serratia nevei、Gibbsiella quercinecans等来源的PPK在同一分支上,同属于PPK1家族。同源建模结果显示,SmPPK由4个结构域组成典型的L型空间结构,其活性中心主要由His433、Asp468、His590和Glu621组成。将SmPPK基因与pET 28a连接后转化至E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳显示在80 kDa处存在明显的蛋白表达条带,与理论分子质量一致。酶活性检测显示,SmPPK可以在多聚磷酸钠的存在下,实现ATP的合成,其最高产率为46.5%。利用SmPPK构建ATP再生系统与灵菌红素缩合酶PigC耦合,成功实现灵菌红素类似物的合成。该研究的开展为ATP依赖的生物催化过程提供了构建ATP再生系统的新酶源。 展开更多
关键词 聚磷酸激酶 宏基因组 序列筛选 重组表达 ATP再生
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共表达PPK和GMAS全细胞催化合成L-茶氨酸 被引量:6
5
作者 潘鑫茹 刘均忠 +1 位作者 张宏娟 焦庆才 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1827-1832,共6页
利用pETDuet-1质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中重组表达了多聚磷酸盐激酶(PPK)和γ-谷氨酰甲胺合成酶(GMAS),并以共表达PPK和GMAS的重组菌全细胞催化合成L-茶氨酸,优化了反应参数。SDS-PAGE结果表明,PPK和GMAS共表达成功;最佳全细胞催化反应... 利用pETDuet-1质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中重组表达了多聚磷酸盐激酶(PPK)和γ-谷氨酰甲胺合成酶(GMAS),并以共表达PPK和GMAS的重组菌全细胞催化合成L-茶氨酸,优化了反应参数。SDS-PAGE结果表明,PPK和GMAS共表达成功;最佳全细胞催化反应条件为:35℃,pH=7.0,谷氨酸钠300mmol/L,乙胺盐酸盐420 mmol/L,六偏磷酸钠100 mmol/L,添加2 mmol/L起始量ATP,在100 mL反应体系中转化24 h,L-茶氨酸浓度达到199 mmol/L,谷氨酸钠的转化率达到66.34%。 展开更多
关键词 共表达 多聚磷酸盐激酶 γ-谷氨酰甲胺合成酶 L-茶氨酸 ATP再生 生物工程
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海分枝杆菌ppk基因的生物学功能研究
6
作者 祝琳 施旭骏 高谦 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期649-656,共8页
目的构建海分枝杆菌(Mycobacterium marinum)ppk基因敲除株,对其生物学功能进行研究。方法利用基因同源重组技术,构建了海分枝杆菌ppk基因敲除株;使用DAPI染色法检测细菌胞内多聚无机磷酸盐(poly inorganic phosphate,poly-Pi)浓度;比... 目的构建海分枝杆菌(Mycobacterium marinum)ppk基因敲除株,对其生物学功能进行研究。方法利用基因同源重组技术,构建了海分枝杆菌ppk基因敲除株;使用DAPI染色法检测细菌胞内多聚无机磷酸盐(poly inorganic phosphate,poly-Pi)浓度;比较野生株及突变株在不同环境压力下的生存能力;用野生株和突变株分别感染斑马鱼成鱼,通过观察斑马鱼的存活情况,研究ppk基因对海分枝杆菌毒力的影响。将野生株和突变株分别感染小鼠来源的巨噬细胞系RAW267.4,检测其在巨噬细胞内的增殖。结果 ppk突变株胞内polyPi浓度明显下降;在斑马鱼成鱼感染模型中出现显著减毒表型;其在小鼠来源的巨噬细胞感染模型中的增殖较野生型菌株明显减弱;在营养缺陷、抗生素(利福平、左氧氟沙星)等环境压力下,其生存能力下降。结论 ppk基因影响分枝杆菌在环境压力下的生存,并且在其致病中发挥重要作用。 展开更多
关键词 分枝杆菌 多聚磷酸盐激酶 多聚无机磷酸盐
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Inositol 1,4,5-trisphosphate 3-kinases:functions and regulations 被引量:1
7
作者 HuiJunXIA GuangYANG 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2005年第2期83-91,共9页
Inositol 1,4,5-trisphosphate 3-kinase (IP3 3-kinase/IP3K) plays an important role in signal transduction in animal cellsby phosphorylating inositol 1,4,5-trisphosphate (IP3) to inositol 1,3,4,5-tetrakisphosphate (IP4)... Inositol 1,4,5-trisphosphate 3-kinase (IP3 3-kinase/IP3K) plays an important role in signal transduction in animal cellsby phosphorylating inositol 1,4,5-trisphosphate (IP3) to inositol 1,3,4,5-tetrakisphosphate (IP4). Both IP3 and IP4 arecritical second messengers which regulate calcium (Ca2+) homeostasis. Mammalian IP3Ks are involved in many biologicalprocesses, including brain development, memory, learning and so on. It is widely reported that Ca2+ is a canonicalsecond messenger in higher plants. Therefore, plant IP3K should also play a crucial role in plant development. Recently,we reported the identification of plant IP3K gene (AtIpk2β/AtIP3K) from Arabidopsis thaliana and its characterization.Here, we summarize the molecular cloning, biochemical properties and biological functions of IP3Ks from animal, yeastand plant. This review also discusses potential functions of IP3Ks in signaling crosstalk, inositol phosphate metabolism,gene transcriptional control and so on. 展开更多
关键词 inositol 1 4 5-trisphosphate 3-kinase (IP3 3-kinase/IP3K) inositol polyphosphate kinase (Ipk) inositol phos-phate multikinase (Ipmk) calcium (Ca^(2+)) signal transduction
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多聚磷酸盐在微生物抗环境胁迫中的作用及机制 被引量:2
8
作者 王晨宇 周楚源 +3 位作者 何堤 樊梓豪 王梦梦 杨柳燕 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期168-181,共14页
抗环境胁迫是微生物提高环境适应性和增加生存机会的一个重要策略,探明微生物抗环境胁迫的过程及分子机制对于了解微生物进化和开发微生物资源具有重要意义。多聚磷酸盐(polyphosphate,polyP)在微生物抗环境胁迫中发挥重要作用。在营养... 抗环境胁迫是微生物提高环境适应性和增加生存机会的一个重要策略,探明微生物抗环境胁迫的过程及分子机制对于了解微生物进化和开发微生物资源具有重要意义。多聚磷酸盐(polyphosphate,polyP)在微生物抗环境胁迫中发挥重要作用。在营养限制条件下,polyP可充当微生物的能源来源和信号分子,增强微生物对低营养环境的适应能力。在微生物应对环境胁迫过程中,polyP可作为蛋白质的伴侣,通过蛋白质修饰改变蛋白质结构使其免受失活,从而维持其功能完整性。polyP具有金属螯合能力,可提高微生物对重金属胁迫的抵抗能力。微生物能通过调节polyP的合成来适应环境pH的改变,调节酸碱胁迫过程中的能量消耗。基于polyP抗环境胁迫的特性,通过转基因技术,把polyP合成相关基因转入到农作物中,可以增加农作物体内polyP含量,从而提高农作物抗环境胁迫的能力。利用含有polyP的微生物处理重金属废水,可极大地提高重金属离子的去除效率。同时,微生物中合成的polyP颗粒也能进一步开发为生物活性产品。因此,polyP在微生物抗胁迫中发挥多样化作用,通过各种分子途径提高微生物对环境胁迫的耐受性。加强polyP在微生物抗环境胁迫中的作用与机制研究,不仅丰富微生物抗环境胁迫的研究内容,而且为多聚磷酸盐类生物活性物质的工程应用提供技术支撑。 展开更多
关键词 微生物 多聚磷酸盐 聚磷颗粒 环境胁迫 抗逆机制 转多聚磷酸盐激酶基因 多聚磷酸盐资源开发
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基于双菌耦合发酵策略的烟酰胺单核苷酸合成
9
作者 孙婷 张洪涛 +3 位作者 杨峰 柴文刚 薛皓阳 谭淑引 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第24期201-210,共10页
本研究构建了分别含有烟酰胺核苷激酶(nicotinamideribosidekinase,NRK)和多聚磷酸酶(polyphosphatekinase,PPK)的双菌耦合发酵体系,实现了基于PPK的ATP再生系统在烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)生产中的应用。首先... 本研究构建了分别含有烟酰胺核苷激酶(nicotinamideribosidekinase,NRK)和多聚磷酸酶(polyphosphatekinase,PPK)的双菌耦合发酵体系,实现了基于PPK的ATP再生系统在烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)生产中的应用。首先分别构建表达NRK1和NRK2的工程菌株,筛选得到高活性的大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)-pET28a-NRK1,NMN产量5.17 g/L,产率77.4%;然后对NRK1的诱导表达条件进行优化,发现低温16℃、异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷0.7 mmol/L、接种量3%、诱导时长22 h更利于蛋白的可溶性表达;进一步对E. coli BL21(DE3)-pET28a-NRK1合成NMN的最优体系进行探索,发现在菌体质量浓度100 g/L、温度18℃、时间12 h、ATP与烟酰胺核糖(nicotinamide riboside,NR)浓度比1∶1.5时,NMN产量最高为5.73 g/L,产率85.78%;最后,通过对E. coli BL21(DE3)pET28a-PPK和E. coli BL21(DE3)-pET28a-NRK1耦合发酵系统进行优化,得到最优体系为ATP与NR浓度比1∶3.5、菌体质量浓度比1∶2、发酵时间16 h,NMN产量达11.81 g/L。本研究所建立的高密度双菌耦合发酵产NMN工艺为高效、低成本的大规模发酵生产NMN开辟了新途径。 展开更多
关键词 烟酰胺单核苷酸 烟酰胺核苷激酶 多聚磷酸酶 ATP再生 耦合发酵
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胃癌患者外周血INPP4B表达水平与临床病理特征、化疗敏感性及PI3K/AKT通路的关系 被引量:2
10
作者 刘征 宫向良 +3 位作者 于大中 赵艳云 徐爱芳 宋杨 《中国实验诊断学》 2023年第5期516-521,共6页
目的探讨胃癌患者外周血Ⅱ型多磷酸肌醇4-磷酸酶(INPP4B)表达水平与临床病理特征、化疗敏感性及磷脂酰肌醇3激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)通路的关系。方法选取2018年12月至2019年12月医院收治的79例晚期胃癌患者作为研究组,另外选... 目的探讨胃癌患者外周血Ⅱ型多磷酸肌醇4-磷酸酶(INPP4B)表达水平与临床病理特征、化疗敏感性及磷脂酰肌醇3激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)通路的关系。方法选取2018年12月至2019年12月医院收治的79例晚期胃癌患者作为研究组,另外选取同期于医院体检的健康体检者40例作为对照组。比较研究组与对照组外周血INPP4B表达水平,分析外周血INPP4B与晚期胃癌患者临床病理特征之间的关系。研究组接受含奥沙利铂的方案化疗,根据化疗2个周期后的临床疗效将研究组患者分为敏感组和抵抗组,比较两组外周血INPP4B及外周血PI3K和AKT mRNA表达水平,采用Pearson分析外周血INPP4B与PI3K和AKT mRNA水平的相关性。以INPP4B mRNA水平的中位数将研究组患者分为高表达组(≥0.25)与低表达组(<0.25),采用Kaplan-Meier分析生存曲线。结果研究组外周血中INPP4B mRNA的相对表达量低于对照组(P<0.05)。Ⅳ期胃癌患者外周血INPP4B mRNA低表达占比高于ⅢB期患者(P<0.05)。抵抗组的INPP4B mRNA表达水平低于敏感组,抵抗组PI3K和AKT mRNA表达水平高于敏感组(P<0.05)。化疗前研究组胃癌患者外周血INPP4B mRNA表达水平与PI3K和AKT mRNA表达水平呈负相关(r=-0.551、-0.312,P<0.05)。高表达组与低表达组的中位生存时间为12.00个月(95%CI:10.515~13.954)和11.00个月(95%CI:10.046~12.794),2组中位累积生存曲线比较,差异具有统计学意义(Log rankχ^(2)=7.669,P=0.006)。结论外周血INPP4B与胃癌晚期TNM分期、化疗敏感程度及预后生存有关,且INPP4B调控化疗抗性的机制可能与负调控PI3K/AKT通路有关。 展开更多
关键词 胃癌 Ⅱ型多磷酸肌醇4-磷酸酶 磷脂酰肌醇3激酶 丝苏氨酸蛋白激酶 化疗敏感性
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转聚磷激酶基因的大肠杆菌去除水体中的磷 被引量:10
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作者 王勤 赵庆顺 +3 位作者 肖琳 蒋丽娟 杨柳燕 尹大强 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第6期742-745,共4页
为探索有效的生物除磷方法,构建了聚磷激酶基因(ppk)的表达载体pET28a(+),并转化大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21,获得了可过表达ppk基因的工程菌BL-PPK.RT-PCR结果表明,ppk基因在转化的大肠杆菌中得到了高效表达.聚磷试验结果表明,培养... 为探索有效的生物除磷方法,构建了聚磷激酶基因(ppk)的表达载体pET28a(+),并转化大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21,获得了可过表达ppk基因的工程菌BL-PPK.RT-PCR结果表明,ppk基因在转化的大肠杆菌中得到了高效表达.聚磷试验结果表明,培养10h后,转化了ppk基因的大肠杆菌细胞内聚磷含量比对照菌株高20倍,而培养液中可溶性磷浓度为对照菌株的约1/9. 展开更多
关键词 聚磷激酶(ppk) 聚磷 转基因 大肠杆菌
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多聚磷酸盐在原核和真核生物中的研究进展 被引量:13
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作者 魏峥 聂琰晖 +2 位作者 刘乐庭 卢洁 于常海 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期197-202,共6页
多聚磷酸盐(polyphosphate,poly P)广泛存在于自然界无机环境和生命有机体。细菌学研究显示,poly P可增强细胞抵抗外界恶劣环境的能力,促进严瑾反应(strigent response)和孢子形成,促进生物被膜的形成,提高捕食能力,增强细菌毒力等。对... 多聚磷酸盐(polyphosphate,poly P)广泛存在于自然界无机环境和生命有机体。细菌学研究显示,poly P可增强细胞抵抗外界恶劣环境的能力,促进严瑾反应(strigent response)和孢子形成,促进生物被膜的形成,提高捕食能力,增强细菌毒力等。对真核生物的研究发现,poly P可以促进正常成骨细胞和成纤维细胞分化成熟,参与胞内钙的贮存与释放,刺激一些肿瘤细胞增殖等。本文从现有的信息入手,推测poly P在神经系统中的功能。 展开更多
关键词 多聚磷酸盐 中枢神经系统 多聚磷酸盐激酶 外切聚磷酸酶
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聚磷菌生物除磷机理研究进展 被引量:17
13
作者 朱德锐 贲亚琍 +1 位作者 韩睿 刘德立 《环境科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期62-65,共4页
废水中过量磷酸盐是引起水体富营养化的主要原因之一,生物除磷是一项新型的水处理技术。聚磷菌生物在多聚磷酸盐的合成和降解过程中发挥重要作用。文章综述了目前聚磷菌生物除磷的生化机理,聚磷过程中涉及的主要酶类及磷酸盐转运过程相... 废水中过量磷酸盐是引起水体富营养化的主要原因之一,生物除磷是一项新型的水处理技术。聚磷菌生物在多聚磷酸盐的合成和降解过程中发挥重要作用。文章综述了目前聚磷菌生物除磷的生化机理,聚磷过程中涉及的主要酶类及磷酸盐转运过程相关基因的表达调控。 展开更多
关键词 聚磷菌 聚磷酸盐激酶 磷酸盐转运 双因子调节系统
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多聚磷酸盐及其代谢酶的研究进展 被引量:10
14
作者 石廷玉 王怀林 谢建平 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期181-187,共7页
多聚磷酸盐(polyP)是由几个到几百个无机磷酸盐单体通过高能磷酸键聚合而成的线性多聚体,广泛分布于自然界和生物体。本文总结了polyP在生物体中的重要功能,包括基因表达和调控、DNA的摄取、微生物的运动性、对胁迫和饥饿的应答、病原... 多聚磷酸盐(polyP)是由几个到几百个无机磷酸盐单体通过高能磷酸键聚合而成的线性多聚体,广泛分布于自然界和生物体。本文总结了polyP在生物体中的重要功能,包括基因表达和调控、DNA的摄取、微生物的运动性、对胁迫和饥饿的应答、病原菌的毒性以及对细胞凋亡、血液凝固、细胞钙化、线粒体功能的调节,需要polyP的酶有内切酶、葡萄糖激酶、NAD激酶和AMP磷酸转移酶等。本文对调控polyP的多聚磷酸盐激酶(polyphosphate kinase,ppk)和外切聚磷酸酶(ex-opolyphosphatase,PPX)的生化性质和结构也进行了总结。同时,结合我们的研究工作,重点分析了结核分枝杆菌中PPX的同源蛋白和可能的生物化学活性。 展开更多
关键词 多聚磷酸盐 多聚磷酸盐激酶 外切聚磷酸酶 严紧反应
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Integrated genomics provides insights into the evolution of the polyphosphate accumulation trait of Ca.Accumulibacter
15
作者 Xiaojing Xie Xuhan Deng +6 位作者 Liping Chen Jing Yuan Hang Chen Chaohai Wei Xianghui Liu Stefan Wuertz Guanglei Qiu 《Environmental Science and Ecotechnology》 SCIE 2024年第4期131-144,共14页
Candidatus Accumulibacter,a prominent polyphosphate-accumulating organism(PAO)in wastewater treatment,plays a crucial role in enhanced biological phosphorus removal(EBPR).The genetic underpinnings of its polyphosphate... Candidatus Accumulibacter,a prominent polyphosphate-accumulating organism(PAO)in wastewater treatment,plays a crucial role in enhanced biological phosphorus removal(EBPR).The genetic underpinnings of its polyphosphate accumulation capabilities,however,remain largely unknown.Here,we conducted a comprehensive genomic analysis of Ca.Accumulibacter-PAOs and their relatives within the Rhodocyclaceae family,identifying 124 core genes acquired via horizontal gene transfer(HGT)at its least common ancestor.Metatranscriptomic analysis of an enrichment culture of Ca.Accumulibacter revealed active transcription of 44 of these genes during an EBPR cycle,notably including the polyphosphate kinase 2(PPK2)gene instead of the commonly recognized polyphosphate kinase 1(PPK1)gene.Intriguingly,the phosphate regulon(Pho)genes showed minimal transcriptions,pointing to a distinctive fact of Pho dysregulation,where PhoU,the phosphate signaling complex protein,was not regulating the high-affinity phosphate transport(Pst)system,resulting in continuous phosphate uptake.To prevent phosphate toxicity,Ca.Accumulibacter utilized the laterally acquired PPK2 to condense phosphate into polyphosphate,resulting in the polyphosphate-accumulating feature.This study provides novel insights into the evolutionary emergence of the polyphosphate-accumulating trait in Ca.Accumulibacter,offering potential advancements in understanding the PAO phenotype in the EBPR process. 展开更多
关键词 Candidatus Accumulibacter Comparative genomics Horizontal gene transfer(HGT) PhoU polyphosphate kinase 2(ppk2)
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聚磷酸激酶基因的阻断对刺糖多孢菌生长及多杀菌素合成的影响 被引量:2
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作者 杨燕 罗林根 +5 位作者 唐斯佳 徐妙 丁学知 胡胜标 孙运军 夏立秋 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2014年第5期703-712,共10页
聚磷酸激酶基因(Polyphosphate kinase gene,ppk)是放线霉菌中的一种影响抗生素合成的全局性负调控因子,阻断该基因能显著提高其次级代谢产物产量。本文利用PCR扩增了刺糖多孢菌中的ppk基因中间片段,经酶切连接技术将其克隆到大肠杆菌-... 聚磷酸激酶基因(Polyphosphate kinase gene,ppk)是放线霉菌中的一种影响抗生素合成的全局性负调控因子,阻断该基因能显著提高其次级代谢产物产量。本文利用PCR扩增了刺糖多孢菌中的ppk基因中间片段,经酶切连接技术将其克隆到大肠杆菌-链霉菌穿梭载体pOJ260上,构建阻断型载体pOJ260-ppk;通过接合转移将该功能质粒导入刺糖多孢菌中,获得了遗传性能稳定的重组菌株S.sp-△ppk。对工程菌株的PCR检测结果显示,ppk基因片段已整合到刺糖多孢菌染色体上并成功阻断了该基因的表达。摇瓶发酵结果显示,工程菌株多杀菌素产量较原始菌株提高了122%。阻断聚磷酸激酶基因的表达对刺糖多孢菌的菌丝形态及生长发育产生了影响,并有效地促进该菌多杀菌素的生物合成。 展开更多
关键词 刺糖多孢菌 聚磷酸激酶基因 阻断 多杀菌素 接合转移
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结核分枝杆菌多聚磷酸盐激酶2核酸适配体的抗结核效果评价 被引量:1
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作者 杨扬 李岱容 +3 位作者 黎友伦 陈雨晗 万秋 刘静姝 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期36-41,共6页
目的·探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)多聚磷酸盐激酶2(polyphosphate kinase 2,PPK2)核酸适配体对体外MTB的抑菌效果。方法·运用生物信息学方法分析MTB PPK2与呼吸道部分常见病原菌的同源性,构建PPK2进化... 目的·探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)多聚磷酸盐激酶2(polyphosphate kinase 2,PPK2)核酸适配体对体外MTB的抑菌效果。方法·运用生物信息学方法分析MTB PPK2与呼吸道部分常见病原菌的同源性,构建PPK2进化树。通过酶联寡核苷酸分析(enzyme-linked oligonucleotide assay,ELONA)测定PPK2核酸适配体与MTB标准株H_(37)Rv、卡介苗(BCG)、耻垢分枝杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌的结合亲和力。将PPK2核酸适配体加入血清中孵育24 h,运用琼脂糖凝胶电泳分析其在血清中的生物稳定性。采用微量刃天青显色法测定PPK2核酸适配体对H_(37)Rv的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。将H_(37)Rv与1μmol/L的PPK2核酸适配体在罗氏培养基上培养10 d,观察菌落生长情况。运用酶标仪测定与不同浓度的PPK2核酸适配体共培养10 d后H_(37)Rv菌液的D(600 nm)值,观察PPK2核酸适配体对H_(37)Rv生长的影响。结果·生物信息学方法构建的PPK2进化树显示,H_(37)Rv的PPK2蛋白与呼吸道部分常见病原菌亲缘性较远,与铜绿假单胞菌亲缘关系相对较近。ELONA测定结果显示PPK2核酸适配体能与H_(37)Rv选择性结合。琼脂糖凝胶电泳分析显示PPK2核酸适配体在血清中至少稳定存在8 h。PPK2核酸适配体对H_(37)Rv的MIC为50 nmol/L。罗氏培养基菌落生长结果显示PPK2适配体对H_(37)Rv生长具有抑制作用。生长抑制试验表明随着PPK2核酸适配体浓度增加,H_(37)Rv的D(600 nm)呈现下降趋势,说明PPK2核酸适配体对H_(37)Rv生长存在抑制作用。结论·PPK2核酸适配体对体外H_(37)Rv表现出良好的抑菌活性。 展开更多
关键词 多聚磷酸盐激酶 核酸适配体 结核分枝杆菌 抑菌活性
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EBPR工艺污泥中聚磷菌多样性与除磷潜力评价方法 被引量:6
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作者 郑少奎 罗焇湝 《环境科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期2338-2347,共10页
自1970年代研究者发现聚磷菌(polyphosphate accumulating organism,PAO)并提出经典的强化生物除磷(enhanced biological phosphorus removal,EBPR)工艺“厌氧释磷-好氧摄磷”机理以来,随着EBPR工艺中PAO新菌株的不断发现和生理生化特... 自1970年代研究者发现聚磷菌(polyphosphate accumulating organism,PAO)并提出经典的强化生物除磷(enhanced biological phosphorus removal,EBPR)工艺“厌氧释磷-好氧摄磷”机理以来,随着EBPR工艺中PAO新菌株的不断发现和生理生化特征研究的不断深入,研究者们对EBPR机理的认识一直在不断更新.及时总结近40年来EBPR机理的研究进展,基于活性污泥中PAO菌株信息全面归纳PAO多样性特征,以此为依据客观评价目前活性污泥中PAO除磷潜力评价方法的不足并展望未来重点研究方向,对于推动EBPR工艺优化升级将具有非常重要的理论与实际意义.本文全面调研了1980—2021年国际期刊相关文献,发现传统EBPR机理中厌氧内碳源合成、厌氧释磷意义等受到了较多质疑,反硝化聚磷新机理已获得广泛认同;活性污泥中PAO具有异常丰富的多样性,包含Acinetobacter(29%)、Pseudomonas(15%)、Tetrasphaera(4%)、Alcaligenes(4%)等42个菌属,部分PAO具有反硝化聚磷和异养硝化能力.在目前主流的活性污泥PAO除磷潜力评价方法中,荧光原位杂交和定量PCR技术只以Accumulibacter或Acinetobacter属PAO为检测对象,高通量测序和变性梯度凝胶电泳技术基于片面的PAO多样性信息作为分析依据,在此基础上PAO丰度所反映的PAO除磷潜力的准确性尚存在疑问,未来需要加强面向活性污泥PAO多样性的探针或特异性引物的研发.与传统方法相比,EDTA法胞内多聚磷酸盐颗粒含量检测技术较为先进,但需要以PAO和非PAO菌株为参照深入阐明检测结果的边界. 展开更多
关键词 强化生物除磷(EBPR) 多聚磷酸盐激酶(ppk) 聚磷菌(PAO) 反硝化聚磷菌(DPAO) 除磷潜力
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转聚磷激酶大肠杆菌诱导表达条件及磷浓度对其除磷能力的影响 被引量:4
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作者 任晶 肖琳 +1 位作者 郑小红 杨柳燕 《环境保护科学》 CAS 2008年第6期1-3,22,共4页
在优化转聚磷激酶基因的大肠杆菌(BL-PPK)诱导表达条件基础上探讨了外界磷浓度对其除磷能力的影响,发现37℃细胞对数生长早期添加1.5mmol/L IPTG时聚磷激酶的表达活性和细胞除磷效率最高,同时BL-PPK对高达35mg/L的磷酸盐在6.5h内的去除... 在优化转聚磷激酶基因的大肠杆菌(BL-PPK)诱导表达条件基础上探讨了外界磷浓度对其除磷能力的影响,发现37℃细胞对数生长早期添加1.5mmol/L IPTG时聚磷激酶的表达活性和细胞除磷效率最高,同时BL-PPK对高达35mg/L的磷酸盐在6.5h内的去除效果达到99%以上,并以聚磷的形式积累在细胞内。 展开更多
关键词 生物除磷 聚磷激酶 诱导条件
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奇异变形杆菌聚磷酸盐激酶多克隆抗体的制备和鉴定 被引量:1
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作者 彭亮 区静怡 +3 位作者 潘嘉韵 邓聪 陈景红 曹虹 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期312-316,共5页
目的表达、纯化奇异变形杆菌聚磷酸盐激酶(PPK)蛋白,制备PPK多克隆抗体。方法利用分子生物学软件分析奇异变形杆菌PPK的抗原性、疏水性等参数,选取N端较保守的309个氨基酸,并对其基因序列进行密码子优化以利于原核表达。合成新的基因序... 目的表达、纯化奇异变形杆菌聚磷酸盐激酶(PPK)蛋白,制备PPK多克隆抗体。方法利用分子生物学软件分析奇异变形杆菌PPK的抗原性、疏水性等参数,选取N端较保守的309个氨基酸,并对其基因序列进行密码子优化以利于原核表达。合成新的基因序列后插入pET28b(+)质粒,转化入转化宿主菌BL21(DE3),诱导、表达融合蛋白。通过镍琼脂糖亲和层析技术,将获得的融合蛋白进行纯化。以纯化的蛋白作为免疫原并结合使用佐剂,背部多点注射新西兰大白兔,ELISA检测兔血清效价,Western Blotting验证抗体特异性。结果成功构建了奇异变形杆菌PPK的原核表达重组质粒,可在0.5 mmol/L IPTG、37℃条件下获得较好的诱导、表达;利用镍柱纯化后的PPK蛋白与免疫佐剂一起,采用背部多点接种新西兰大白兔,制备了效价高的兔抗血清。ELISA检测血清效价达到1∶512 000,Western Blotting对ppk基因缺失株及其野生株进行验证显示抗体特异性良好。结论利用pET28b(+)载体可构建奇异变形杆菌PPK的原核表达重组质粒,表达、纯化后的蛋白与佐剂共同免疫新西兰大白兔,可获得效价高、特异性良好的兔多克隆抗体血清,为奇异变形杆菌聚磷酸盐激酶的检测以及深入研究PPK在奇异变形杆菌致病中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 奇异变形杆菌 聚磷酸盐激酶 多克隆抗体
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