苦丁茶冬青叶多糖的分离纯化及其对羟自由基的清除作用

苦丁茶冬青叶经乙醇脱脂、水提醇沉和Sevag法除蛋白,得苦丁茶冬青叶粗多糖KPSⅡ。KPSⅡ经DEAE-纤维素阴离子交换层析柱分离纯化,得到两个纯化多糖组分KPSⅢa和KPSⅢb。KPSⅢa和KPSⅢb经过硫酸水解,还原乙酰化,用气相色谱方法测定了其组成及相对含量。KPSⅢa与KPSⅢb均主要由阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成,其摩尔比分别为10.2:1.0:1.2:8.0:5.4和17.7:1.0:1.1:1.8:4.1。以Fenton反应为产生·OH模型,用紫外分光光度法实验了苦丁茶冬青叶多糖(KPSⅡ、KPSⅢa、KPSⅢb)对模型中产生的·OH的清除作用。结果表明,KPSⅡ、KPSⅢa、KPSⅢb对·OH都具有一定的清除作用,且清除率与多糖的浓度存在一定的量效关系。苦丁茶冬青叶粗多糖KPSⅡ对·OH的清除作用均比纯化多糖(KPSⅢa、KPSⅢb)强。

苦丁茶多糖抗氧化活性研究

采用清除超氧阴离子自由基、清除羟自由基、清除DPPH自由基、双氧水诱导红细胞氧化溶血、红细胞自氧化溶血实验,对A、K_1、K_3三个苦丁茶多糖组分的抗氧化活性进行了研究,并与Vc进行了比较,结果表明:苦丁茶多糖对羟自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基具有一定的清除作用;对H_2O_2诱导红细胞氧化溶血反应、对红细胞自氧化溶血反应都有显著的抑制作用。

苦丁茶多糖的提取分离纯化及部分理化性质研究

以多糖提取率为指标,采用单因素实验和正交实验对苦丁茶多糖的提取工艺条件进行优化,确定最佳提取工艺为:水料比20:1、80℃、提取50 min。在此条件下,苦丁茶多糖提取率为2.43%,先后采用Sevag法脱蛋白、分级醇沉法、DEAE—52纤维素离子交换柱层析法对其进行分离纯化,最后得到K_1和K_22个组分。同时对各苦丁茶多糖进行理化性质分析,结合Sevag法预实验所得出的结果,推测苦丁茶多糖可能为以某种方式结合蛋白的糖缀合物。

苦丁茶中总皂苷含量的测定

建立了苦丁茶 (IlexkudinchaC .J .Tseng) 总皂苷F含量的测定方法。以苦丁茶皂苷F作对照品 ,φ =8%香草醛无水乙醇溶液和 φ =77%硫酸溶液为显色剂 ,6 0℃恒温反应 10min ,分光光度法测定苦丁茶总皂苷的含量。最大吸收波长 5 34nm ,在 6～ 36 μg mL范围内浓度与吸光度线性关系良好 ,相关系数r=0 9995。平均回收率为 97 17% ,RSD =1 6 9%。测定了苦丁茶不同产品的总皂苷含量 ,结果表明方法简便 ,重现性好。该法可作为苦丁茶质量检测的方法之一。

苦丁茶冬青叶多糖的提取及含量测定

目的 研究苦丁茶冬青叶多糖含量的测定方法。方法 以水提醇沉的方法从苦丁茶冬青叶中提取得到苦丁茶冬青叶多糖并以正交实验优化显色条件，采用苯酚-硫酸法测定其多糖含量。结果 测定波长为482nm，最佳显色条件为6％苯酚用量1．0ml，浓硫酸用量7．0ml，反应时间40min。标准曲线回归方程为A=0．0546C-0．0033（n=10），r=0．9998，并在2．51-45．11mg·L^-1范围内呈良好线性关系。平均回收率为98．55％，RSD=1．86％（n=5）。测得多糖平均含量为31．90％，RSD=1．75％（n=6）。结论 该方法简单、准确、重现性好，可为其继续研究开发及应用提供参考依据。

苦丁茶冬青叶多糖KPS Ⅲa的热分析研究

采用热重、热重-红外联用及差示扫描量热法研究苦丁茶冬青叶多糖KPSⅢa的热稳定性。结果表明,苦丁茶冬青叶多糖在225℃以下只失去吸附水,在225～625℃间发生剧烈的裂解反应,产生水和二氧化碳;与肝素、淀粉、半乳糖及甲壳素的热分析比较,含有硫酸酯的苦丁茶冬青叶多糖和肝素的热稳定性较低,含氨基的甲壳素的热稳定性最好。说明苦丁茶冬青叶多糖在225℃以下相对稳定,不同的基团对多糖的热稳定性有很大影响。

反相高效液相色谱-光电二极管阵列检测器法测定苦丁茶中乌索酸的含量

目的建立苦丁茶中乌索酸含量的测定方法,同时采用光电二极管阵列检测器检测乌索酸色谱峰的纯度。方法色谱柱为Nucleosil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水(87∶13),流速0.8 ml/min,检测波长210 nm,柱温26℃。结果乌索酸在1.636-17.724μg(r=0.999 8)范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系,乌索酸的平均回收率为99.3%(RSD为1.7%)。结论该方法样品处理简单,准确度高,分离效能好,适合于苦丁茶叶中乌索酸含量的测定。

脱蛋白工艺对苦丁茶冬青叶多糖提取率的影响

采用乙醇对苦丁茶冬青叶进行脱脂,水提醇沉方法得到苦丁茶冬青叶粗多糖。采用Sevag法去除多糖中的蛋白质,研究了除蛋白次数对多糖及蛋白质含量的影响。结果表明,苦丁茶冬青叶多糖采用Sevag法脱蛋白3次以后再继续脱蛋白意义不大。

苦丁茶冬青叶多糖的提取与鉴定

采用95%乙醇脱脂、水提取及80%乙醇沉淀的方法,从苦丁茶冬青叶中分离得到苦丁茶冬青叶粗多糖KPSⅠ,经Sevag法3次除蛋白得苦丁茶冬青叶粗多糖KPSⅡ.经特征化学反应及紫外光谱、红外光谱分析,确定KPSⅠ、KPSⅡ是多糖类化合物,且含有一定量的蛋白质.多糖含量分别为40.77%和39.10%,蛋白质的含量分别为6.43%和5.16%.

苦丁茶规范化生产标准操作规程

目的制定苦丁茶规范化种植生产标准操作规程。方法按照《中药材生产质量管理规范》(GAP)要求,根据苦丁茶的生物学特性,结合产区农业生态环境,进行多年实践验证,探索苦丁茶的规范化种植方法。结果按该规程生产出的苦丁茶药材符合法定质量标准要求。结论该规程具有可操作性及推广性,可为规范化种植苦丁茶提供技术参考。

苦丁茶冬青叶多糖的组成分析

采用气相色谱法研究苦丁茶冬青叶多糖KPSⅡ的糖基组成及相对含量.苦丁茶冬青叶多糖KPSⅡ及各单糖标准品经硫酸水解、硼氢化钠还原、乙酸酐乙酰化后进行气相色谱分析.由气相色谱分析的保留时间确定苦丁茶冬青叶多糖KPSⅡ的糖基部分由阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖等5种单糖组成,由各峰面积比求出其各单糖摩尔比为10.2∶1.0∶1.2∶8.0∶5.4.

苦丁茶不同采收期多糖含量的动态累积分析

评价广西苦丁茶不同生长期多糖含量的动态累积。在单因素考察基础上,通过响应面法优化得出最佳提取条件;采用紫外-可见分光光度法,以葡萄糖为对照品,于482 nm波长处,采用苯酚-硫酸法测定广西苦丁茶不同月份的多糖含量。多糖在5.83 mg/m L^38.54 mg/m L范围内呈良好线性关系(R2=0.997 9),平均加样回收率为98.618%,RSD为1.96%(n=5);样品的多糖含量在4月份、5月份最高,分别为96.6、82.4 mg/g,随后有所下降,12月份含量最低为47.7 mg/g。4月份苦丁茶多糖含量最高,如果以苦丁茶多糖生物活性作为标准,4月份是苦丁茶最佳采收期。